液相維修保養(yǎng)講座

液相維修保養(yǎng)講座第一頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三第二頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

HPLC的梯度系統(tǒng)

溶劑輸送系統(tǒng)(泵)檢測(cè)器進(jìn)樣器色譜柱梯度混合器溶劑輸送系統(tǒng)(泵)高壓梯度比例閥檢測(cè)器進(jìn)樣器ABCD色譜柱溶劑輸送系統(tǒng)(泵)低壓梯度阻尼器混合器第三頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM能引起HPLC發(fā)生問題的潛在因素:機(jī)械方面,化學(xué)方面,環(huán)境方面,操作方面,保養(yǎng)方面工作環(huán)境:如電源及地線,濕度,灰塵,環(huán)境溫度等;化學(xué)品:如溶劑質(zhì)量,樣品狀況,色譜柱/保護(hù)柱狀況等;機(jī)械方面:泵,進(jìn)樣器,檢測(cè)器,在線過濾器,管路連接質(zhì)量等;操作保養(yǎng):正確的操作程序,完善地日常及定期保養(yǎng);第四頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM

邏輯判斷及處理

觀察現(xiàn)象,分析色譜圖及相關(guān)參數(shù),問題分類,尋求正確的切入點(diǎn),從最易最簡(jiǎn)處如手;

問題

化學(xué)品

環(huán)境

機(jī)器 *色譜柱/保護(hù)柱 *電源 *泵 *溶液 *地線 *進(jìn)樣器 *樣品 *溫度 *檢測(cè)器 *濕度 *數(shù)據(jù)處理單元 *清潔程度

第五頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM

分析系統(tǒng)工作狀況的最直觀的表現(xiàn): 系統(tǒng)壓力 色譜圖-基線 峰形 重疊譜圖(重現(xiàn)性)第六頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM

基線問題分析第七頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM基線噪聲流動(dòng)相內(nèi)含有空氣-脫氣處理泵有問題.如單項(xiàng)閥,梯度閥,泵桿及密封件的問題清洗或更換系統(tǒng)有漏液之處-

檢漏并處理檢測(cè)池內(nèi)有氣泡-

沖洗檢測(cè)池或在檢測(cè)池出口家適當(dāng)反壓,如接一段內(nèi)徑常 0.009“的管子(此法只適用于UV檢測(cè)器!!!)

電噪聲-

去除噪聲源,信號(hào)線屏蔽,檢查系統(tǒng)接地狀況檢測(cè)器光源燈能量低-

更換光源燈檢測(cè)池污染-

沖洗檢測(cè)池第八頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM基線周期性噪聲絕大多數(shù)情況下是來源于泵的問題泵頭內(nèi)有氣泡

-

流動(dòng)相脫氣

,泵頭排氣(注意正確的排氣方法)泵進(jìn)出口閥有問題

-

清洗或更換閥組件柱塞桿有問題

-

更換柱塞桿及其密封圈溶劑混合不良

-

加裝混合器電噪聲

-

去除噪聲源第九頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三非周期性噪聲氣泡-流動(dòng)相脫氣檢測(cè)池內(nèi)有氣泡-

流動(dòng)相脫氣,檢測(cè)池后加適當(dāng)反壓系統(tǒng)有漏液之處-

檢漏并處理電噪聲-

去除噪聲源Waters?ConnectionsSM第十頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三基線漂移系統(tǒng)未充分平衡環(huán)境溫度影響(尤其對(duì)示差,電導(dǎo),電化學(xué)檢測(cè))-

室溫,柱溫,檢測(cè)池溫度控制梯度系統(tǒng)-溶劑A于溶劑B的ABS值相差大

-試用另種溶劑色譜柱污染或有其他組份被洗脫出-

沖洗,直至基線穩(wěn)定溶劑發(fā)生變化(如溶入氣體或溶劑揮發(fā))-

氦氣或脫氣機(jī)脫氣,溶劑瓶避光,密封(但要 注意防止溶劑瓶?jī)?nèi)產(chǎn)生負(fù)壓)系統(tǒng)有漏液之處-

檢漏并處理

Waters?ConnectionsSM第十一頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM基線周期性波動(dòng)溫度影響-

環(huán)境溫度及檢測(cè)池溫度控制.注意空調(diào)機(jī)的影響溶劑混合不良-

加裝混合器流動(dòng)相脫氣不良-

流動(dòng)相脫氣供電電源的影響泵不良-

檢修處理

第十二頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM基線有無規(guī)律的尖峰氣泡-

溶劑脫氣電路接觸不良-保證清潔,接線牢固,接點(diǎn)無氧化光源燈不良-

檢查處理電噪聲-

去除噪聲源第十三頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM脫氣方法在線脫氣機(jī)脫氣氦氣脫氣真空過濾脫氣注意:溶劑應(yīng)每天脫氣第十四頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三超聲脫氣注意事項(xiàng)：1.在加入改性劑前脫氣溶劑2.氦氣脫氣只有在溶劑比例不變時(shí)比較好—因溶劑或添加劑揮發(fā)會(huì)改變比例3.流動(dòng)相應(yīng)該天天脫氣第十五頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM無樣品峰未進(jìn)樣泵未工作漏液流動(dòng)相或樣品的問題柱子或保護(hù)柱的問題數(shù)據(jù)采集裝置的問題或其與檢測(cè)器連線的問題第十六頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM負(fù)峰組份的ABS值小于溶劑的ABS值氣泡通過了檢測(cè)池對(duì)RI檢測(cè)器不一定是有了問題，很可能是正常的所有峰都是負(fù)峰-可能是檢測(cè)器輸出與數(shù)據(jù)單元連線 極性接反第十七頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM峰形不好-如峰拖尾,峰分叉,出肩膀機(jī)械原因還是化學(xué)原因系統(tǒng)有不正常的死體積在線過濾器(INLINEFILTER)污染(通常會(huì)伴隨有系統(tǒng)壓力升高之現(xiàn)象)色譜柱污染保護(hù)柱(GUARDCOLUMN)污染溶劑不好或使用不對(duì)(包括流動(dòng)相及樣品溶解液)樣品不好色譜柱不良-

*溶劑的影響 *流速變化率不可太大-操作上應(yīng)注意*日常保養(yǎng)第十八頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

檢測(cè)池為什么會(huì)得到變形的色譜峰所有色譜峰都變形（變壞）？

第十九頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

Voids-highbackpressure,distortedand/ordoublepeaks相似的變化第二十頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三誘發(fā)原因展寬是以下兩種因素的綜合結(jié)果：儀器/系統(tǒng)影響;色譜柱的影響;進(jìn)樣器連接管線進(jìn)樣器至色譜柱色譜柱至檢測(cè)器接頭及篩板檢測(cè)池體積進(jìn)樣體積色譜柱本身死體積篩板阻塞第二十一頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三‘差的’色譜結(jié)果注意：色譜峰高降低，峰寬加大.‘良好的’色譜結(jié)果譜帶展寬比較第二十二頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三譜帶展寬體積與系統(tǒng)體積死體積/譜帶展寬體積(無色譜柱時(shí))滯后(系統(tǒng))體積滯后(系統(tǒng))體積溶劑輸送系統(tǒng)(泵)檢測(cè)器進(jìn)樣器色譜柱梯度混合器溶劑輸送系統(tǒng)(泵)高壓梯度注意∶滯后體積包括進(jìn)樣器、阻尼器、混合器及其管路！比例閥檢測(cè)器進(jìn)樣器ABCD色譜柱溶劑輸送系統(tǒng)(泵)低壓梯度阻尼器混合器第二十三頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

**\

A12,000

B7,000相同色譜柱A儀器：譜帶展寬較小--(70mL)塔板數(shù)較高(12,000)儀器B：譜帶展寬較大--(130mL)塔板數(shù)較低(7,000)

塔板數(shù)：柱效測(cè)定結(jié)果塔板數(shù)是反映色譜柱及儀器性能狀態(tài)—的關(guān)鍵參數(shù)第二十四頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三0.090"ParkerStyle0.130"WatersStyle其它Waters?色譜柱

WatersSpherisorb?和許多其它品牌色譜柱安裝及連接好壞帶來的影響第二十五頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

確保色譜柱適當(dāng)連接確保螺釘和錐箍固定在合適位置注：色譜柱接頭連接不當(dāng)—產(chǎn)生死體積(Parker型錐箍與Waters接頭連接)密封(連接)良好(PEEK接頭比較方便)死體積第二十六頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三KeystoneSLIPFreeRConnectors*錐箍位置可根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)節(jié)*AvailablefromWaters方便使用的連接器第二十七頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

.009".020".040"注意：連接管線內(nèi)徑的差異！管線內(nèi)徑對(duì)柱外譜帶展寬的影響第二十八頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

連接管線對(duì)系統(tǒng)譜帶展寬的影響.009".020".040"樣品譜帶在管線內(nèi)發(fā)生了擴(kuò)散

注：過長(zhǎng)的管線亦會(huì)造成較大的譜帶展寬第二十九頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三實(shí)例：管線內(nèi)徑對(duì)柱效的影響

—在色譜柱與進(jìn)樣器之間使用不同內(nèi)徑的管線J.Li下圖：柱效：4000用0.04″內(nèi)徑的管路測(cè)柱效的色譜圖上圖：柱效：1,1000用0.009″內(nèi)徑的管路測(cè)柱效的色譜圖注：使用相同色譜柱第三十頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三譜帶展寬對(duì)分離度的影響 ES-TIC不正確的管線連接靈敏度降低儀器：QuattroUltima

代謝產(chǎn)物研究

改善了管線連接更換了進(jìn)樣器與切換閥及質(zhì)譜檢測(cè)器之間的10個(gè)接頭拆掉了內(nèi)徑0.005英寸的多余管線4英尺靈敏度提高一倍代謝產(chǎn)物可以從尾部分離出來使用某一用戶的原有色譜系統(tǒng)優(yōu)化的系統(tǒng)J.Li第三十一頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三系統(tǒng)性能考察

-譜帶展寬試驗(yàn)儀器譜帶展寬試驗(yàn)(不接色譜柱)將色譜柱從系統(tǒng)上卸下來，連接換上零死體積兩通流速：1mL/min.用單波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器測(cè)定。(notaPDA/DAD)用流動(dòng)相稀釋測(cè)試混合物使檢測(cè)器產(chǎn)生0.5-1.0AUFS的響應(yīng)(可以使用系統(tǒng)啟動(dòng)測(cè)試混合物，其中含有尿嘧啶、對(duì)羥基苯甲酸乙酯和羥基苯甲酸丙酯;Waters部件號(hào)：Wat034544)進(jìn)樣2到5uL上述溶液使用5sigma法測(cè)量峰高4.4%處的峰寬：譜帶展寬(mL)=峰寬(PW,seconds)/60典型的LC系統(tǒng)譜帶展寬體積應(yīng)為100uL±20uL微柱系統(tǒng)之展寬應(yīng)小于20uL第三十二頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三系統(tǒng)譜帶展寬試驗(yàn):測(cè)量“峰”寬(系統(tǒng)中未連接色譜柱)測(cè)量峰寬(W)，將其換算成以μL為單位的體積。因系統(tǒng)未連接色譜柱，故V接近于零。注：隨著色譜峰的加寬，譜帶展寬加大，分離度亦下降第三十三頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三影響色譜峰形的化學(xué)因素色譜柱毀壞溶解樣品的溶劑不當(dāng)色譜柱過載質(zhì)量過載體積過載其它柱外效應(yīng)采樣速率時(shí)間常數(shù)第三十四頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三當(dāng)上樣量超過一定限度時(shí)發(fā)生–注意峰起點(diǎn)提前6.25μginjected2Minutes分析規(guī)模上樣量(6μg)獲得良好的色譜峰形46AbsorbanceAbsorbance25mginjected制備規(guī)模上樣量(25mg)產(chǎn)生質(zhì)量過載的色譜峰形注意：分析與制備之色譜峰的落點(diǎn)位于相同保留時(shí)間(-------)24Minutes6濃度/質(zhì)量過載對(duì)峰形的影響第三十五頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三進(jìn)樣體積對(duì)色譜峰形的影響500μL300μL100μL10μL色譜柱/體積過載第三十六頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三體積過載注意：色譜峰起點(diǎn)相同第三十七頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

檢測(cè)池為什么色譜圖中某個(gè)或一些色譜峰變形?為什么得到一個(gè)或一些變形的色譜峰?變形譜帶某一個(gè)樣品組分與顆粒表面發(fā)生陽離子交換第三十八頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三一些色譜峰峰形很好，但某一個(gè)或幾個(gè)色譜峰峰形差Minutes0510152025此化合物因化學(xué)問題導(dǎo)致拖尾—錯(cuò)誤地選擇了填料或流動(dòng)相pH這些色譜峰峰形良好第三十九頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三硅膠溶解

PH的影響

傳統(tǒng)硅膠基質(zhì)填料的pH局限性鍵合相水解XTerra雜化填料—寬pH范圍第四十頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三硅膠在水中的溶解(ppm)12345678910240-220-200-180-160-140-120-100-80-60-40-20-0-pHSilicaSolubilityCurve硅膠基質(zhì)

pH2-8聚合物基質(zhì)pH2-12

AtpH>8硅膠溶解流動(dòng)相pH和色譜柱壽命pH>8導(dǎo)致傳統(tǒng)硅膠鍵合相顆粒溶解，形成死體積第四十一頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三所有色譜峰都變壞(變形)–溶解樣品的溶劑不正確—洗脫強(qiáng)度比流動(dòng)相強(qiáng)(Toostrong)較強(qiáng)溶劑第四十二頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三(Toostrong)STRONGERSAMPLESOLVENT所有色譜峰都變形—化學(xué)問題溶解樣品的溶劑不當(dāng)溶劑強(qiáng)度強(qiáng)于流動(dòng)相第四十三頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三堿性物質(zhì)拖尾—化學(xué)問題(色譜柱品牌/pH)Time(min)50普通C18現(xiàn)代C18中性物質(zhì)堿性物質(zhì)中性物質(zhì)堿性物質(zhì)0pH7不同品牌色譜柱的硅醇基活性的差異第四十四頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

填裝良好的色譜柱良好的色譜結(jié)果系統(tǒng)、色譜柱、連接狀況皆可良好第四十五頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

色譜柱對(duì)峰形的影響--色譜柱塌陷柱頭有死體積 -Channeling填料塌陷第四十六頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

Voids-highbackpressure,distortedand/ordoublepeaks色譜柱塌陷(存在死體積)(機(jī)械振動(dòng)或高pH{顆粒溶解})會(huì)導(dǎo)致所有峰都變形！第四十七頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三SeeAppendixformoreinformation色譜峰形欠佳的其它原因色譜峰形問題：展寬且拖尾的色譜峰色譜柱進(jìn)口過濾器(篩板)部分阻塞卸下接頭在線過濾器污染更換篩板保護(hù)柱污染更換保護(hù)柱或柱芯第四十八頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM關(guān)注系統(tǒng)性能兩個(gè)要點(diǎn)-峰保留時(shí)間(RT)重現(xiàn)性,峰面積重現(xiàn)性RT重現(xiàn)性不好

-無規(guī)律變化:*流量不穩(wěn)-氣泡,漏液,泵 *溫度影響 有規(guī)律的變化,且逐漸趨于穩(wěn)定:系統(tǒng)未充分平衡RT重現(xiàn)性好,但峰面積重現(xiàn)性不好

-*進(jìn)樣量-選用定量管進(jìn)樣時(shí),進(jìn)樣 體積應(yīng)大于3倍定量管容積; *樣品,氣泡; *樣品在流動(dòng)相各組份中不能充分 溶解(通常伴隨有柱壓逐漸升高 且經(jīng)反沖后,柱壓會(huì)恢復(fù)正常之現(xiàn) 象); *基線噪聲的影響; *積分處理的影響;第四十九頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM工作環(huán)境的影響電源-

容量穩(wěn)定性地線-

系統(tǒng)統(tǒng)一電源,統(tǒng)一接地清潔-

不要輕視灰塵的影響濕度-

特別是近海地區(qū)溫度-

空調(diào)機(jī)的影響

第五十頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三

保留時(shí)間重現(xiàn)性重現(xiàn)性流動(dòng)相比例溫度

pH

離子對(duì)峰漂移平衡固定相穩(wěn)定性色譜柱污染疏水塌陷有機(jī)相低于5%第五十一頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三溫度對(duì)保留時(shí)間重現(xiàn)性的影響增加溫度降低保留溫度每變化1°，保留變化1%到2%選擇性漂移(通常較小)第五十二頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三300C500C600C Minutes1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.00400C溫度的影響(等度分離)1920psiN=1680N=2250塔板數(shù)1160psi較高溫度的益處：*縮短運(yùn)行時(shí)間*改善靈敏度*獲得較為尖銳的峰形,N*降低色譜柱反壓(流動(dòng)相的粘度減小)反壓第五十三頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三溫度的影響(等度分離)較高溫度的益處：*縮短運(yùn)行時(shí)間*改善靈敏度*獲得較為尖銳的峰形,N*降低色譜柱反壓(流動(dòng)相的粘度減小)*不同的選擇性26.523.5第五十四頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三溫度的影響AU0.000.050.100.15AU0.000.050.100.15AU0.000.050.100.15Minutes0.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0012345112345234530°C40°C50°C1Triamterene2Althiazide3Bumetanide4Benzthiazide5EthacrynicAcid影響較小，但由溫度變化可獲得有明顯的選擇性變化.有助于對(duì)選擇性的細(xì)微調(diào)節(jié)Column:XTerraMSC183.5μm,4.6mmx50mmMobilephase:25%MeOH,65%water,10%ammoniumbicarbonatebuffer,pH9Wagrowski,Tran第五十五頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三保留時(shí)間變化

有些色譜峰

保留時(shí)間變化

化學(xué)問題色譜柱類型不對(duì)(CNvsC18)pH流動(dòng)相中有機(jī)相比例不對(duì)，或有機(jī)溶劑類型不對(duì)。第五十六頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三溶劑(有機(jī)相)組成對(duì)保留時(shí)間重現(xiàn)性的影響溶劑組成每變化1%，保留時(shí)間變化5%到15%on

在含有大量水相為流動(dòng)相時(shí)，鍵合相塌陷第五十七頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三等度色譜-溶劑組成變化，保留時(shí)間變化12341234有機(jī)相比例高--運(yùn)行時(shí)間短有機(jī)相比例低--運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng)第五十八頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三PH對(duì)保留時(shí)間重現(xiàn)性的影響中性物質(zhì)：無影響酸性物質(zhì)：pH增加，保留降低堿性物質(zhì)：pH增加，保留提高0.1pH的變化會(huì)導(dǎo)致高達(dá)10%的保留時(shí)間變化.第五十九頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三注：色譜填料顆粒，溫度及有機(jī)相比例保持恒定pH是方法開發(fā)中選擇性調(diào)節(jié)的有力工具。–pH控制可能是關(guān)鍵因素pH0.111010002468101214log(k)Acid(Un-ionized)NeutralBase1SilicaC18pHlimitsXTerraBase1+2(Ionized)Acid(Ionized)Base2NA,B1B2Un-ionized反向模式B1NAB2pH5.5pH6.0流動(dòng)相pH對(duì)保留因子的影響(k)Reproducibility第六十頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三色譜峰形良好，但有些色譜峰發(fā)生移動(dòng)

Minutes0102030Amitriptyline不同pH第六十一頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三保留時(shí)間重現(xiàn)性非色譜柱的影響：

離子對(duì)試劑(己烷磺酸)保留在低濃度下，離子對(duì)試劑濃度增加，保留增加在高濃度下，離子對(duì)試劑的濃度對(duì)保留幾乎無影響需要長(zhǎng)時(shí)間的平衡由于固定相試劑吸附試劑(平衡可能需要使用多達(dá)500個(gè)柱體積的流動(dòng)相)第六十二頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三使用離子對(duì)流動(dòng)相的色譜柱-明顯需要相對(duì)較長(zhǎng)的平衡時(shí)間

1μmol/m2 300m2/g 2g

(表面覆蓋率) (硅膠表面積) (色譜柱中的填料量)

*覆蓋此色譜柱需要相當(dāng)于600μmoles的離子對(duì)試劑*如果PIC試劑的流動(dòng)相濃度是1mM/升，需要600mL溶劑

***600minutes@1mL/min***離子對(duì)法的平衡(10小時(shí))第六十三頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三鬼峰：來自樣品的原因樣品溶解性用流動(dòng)相溶解樣品避免產(chǎn)生沉淀—阻塞色譜柱或管線色譜峰變形樣品中被測(cè)物的穩(wěn)定性

pH

光(使用棕色瓶)溫度時(shí)間/溶劑注意：*樣品的問題可能與樣品瓶相關(guān)第六十四頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM某些意想不到的因素或不良的工作習(xí)慣會(huì)影響您的工作無線裝置或于儀器同一供電線路中的高頻設(shè)備及頻繁啟動(dòng)的大功率設(shè)備可能會(huì)帶來噪聲干擾載液/氣容器,實(shí)驗(yàn)器皿和器械的清潔實(shí)驗(yàn)器皿和器械的清潔不清潔帶來干擾質(zhì)量不良的化學(xué)品或使用不當(dāng)(如濾膜)帶來的影響實(shí)驗(yàn)前/后的準(zhǔn)備和收尾工作.正確的開機(jī)/關(guān)機(jī)操作第六十五頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM 用戶可自己作的日常檢查系統(tǒng)壓力檢查:系統(tǒng)壓力主要是柱壓. 若系統(tǒng)有不正常的高壓,可分段檢查,以判斷故障來源;流量檢查-用脫氣的甲醇,泵后要有約1000PSI的反壓

進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器洗針系統(tǒng)的檢查2690/2695PLUNGERWASH及NEEDLEWASH的檢查吸樣針內(nèi)是否有氣泡同樣進(jìn)樣量的重現(xiàn)性檢測(cè)器開機(jī)自檢(CALIBRATION)定期清洗系統(tǒng)-溶劑過濾頭,泵,進(jìn)樣器,檢測(cè)器 清洗方法定期清潔系統(tǒng)-防/除塵.清潔電路時(shí),需注意人身安全及防止靜電損壞電路 板第六十六頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM溶劑更換的正確程序:用中間溶劑過度有機(jī)溶劑和鹽類溶劑不準(zhǔn)直接過度!!!第六十七頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM溶劑過濾:選用合適的濾膜-脂溶性,水溶性,通用性過濾方式:過濾后混合,混合后過濾

第六十八頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三510泵示意圖第六十九頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三515泵示意圖第七十頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三第七十一頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三7725i第七十二頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三717自動(dòng)進(jìn)樣器第七十三頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三486光路示意圖第七十四頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三2487光路示意圖第七十五頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三示差檢測(cè)器流路示意圖第七十六頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM2690/2695標(biāo)準(zhǔn)啟動(dòng)程序:1.溶劑管理系統(tǒng)的準(zhǔn)備:啟動(dòng)-溶劑脫氣-初始化密封墊清洗裝置-初始化溶劑管理系統(tǒng)

第七十七頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM脫氣啟動(dòng)脫氣機(jī)前一定要保證脫氣機(jī)真空腔內(nèi)充滿溶劑.使用DRYPPIME使所有真空腔內(nèi)充滿溶劑第七十八頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM啟動(dòng)柱塞桿密封墊清洗系統(tǒng)作用-柱塞桿密封墊清洗液可潤(rùn)滑柱塞桿及其密封墊并 沖去溶劑或鹽類沉積物,起到保護(hù)柱塞桿及其密封 墊的作用;清洗液的選擇-對(duì)反相色譜,選用80%水及20%甲,或 80%水及20%乙腈;步驟-*在MAIN屏幕內(nèi)按DIAG鍵; *取下柱塞桿密封墊清洗液管入口端的過濾頭; *注射針管充滿清洗液并接于清洗液管入口端;*按PRIMESEALWSH鍵,START,推注射器;*當(dāng)清洗液充滿清洗系統(tǒng)后,按HALT鍵; *裝回過濾頭,將清洗液管置于清洗液內(nèi); *按CLOSE返回;第七十九頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSMDRYMRIME什么情況下作DRYMRIME-溶劑管理系統(tǒng)的管路是干的或者有空氣存在;操作步驟-*將注射器插入啟動(dòng)/排氣閥中,反時(shí)針旋 轉(zhuǎn)扭1/2圈,打開閥門; *在2690/2695屏幕進(jìn)入DRYMRIME; *選欲作PRIME的管路; *抽動(dòng)注射器,直至溶劑充滿管路;第八十頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSMWETPRIME什么情況下作WETMRIME-溶劑管理系統(tǒng)的管路中含有液體,并且要更換儲(chǔ)液瓶和溶劑時(shí);注意:只有溶劑管理系統(tǒng)的管路中含有液體時(shí)才可作WETPRIME;操作步驟-*進(jìn)入2690/2695DIRECTFUNCTION*選WETPRIME,按屏幕指示操作;第八十一頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM平衡脫氣機(jī)操作步驟-*在STATUS屏幕輸入要運(yùn)行的初始溶劑 組成; *將DEGASSERMODE的參數(shù)設(shè) 為CONTINUOUS; *在DIRECTFUNCTIONS菜單中選WET PRIME,按比例ENTER; *輸入0.000ML/MIN,定時(shí)為10分鐘;

……...第八十二頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM2690/2695標(biāo)準(zhǔn)啟動(dòng)程序:2.樣品管理系統(tǒng)啟動(dòng)-初始化進(jìn)樣針清洗裝置-沖洗樣品管理系統(tǒng)什么情況下作沖洗樣品管理系統(tǒng)- *初始化溶劑管理系統(tǒng); *更換溶劑; *進(jìn)樣器針管內(nèi)發(fā)現(xiàn)氣泡; *每天開始使用2690/2695之前;注意:為避免鹽類析出,當(dāng)從緩沖液換為有機(jī)溶劑時(shí),應(yīng)使用中介溶劑,入如水.操作步驟-*按MENU/STATUUS鍵以顯示CONTROL屏幕; *在COMPOSITION欄中輸入相應(yīng)的溶劑組成; *選PURGEINJECTOR,按屏幕指示操作;

注意:初次啟動(dòng)該系統(tǒng)時(shí)要使COMPRESSIONCHECK框空白,以免作壓縮檢測(cè). 在密封件調(diào)整之前不可作壓縮檢測(cè).

第八十三頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三Waters?ConnectionsSM啟動(dòng)針清洗系統(tǒng)作用-保持進(jìn)樣針的清潔,避免進(jìn)樣之間的樣品交叉污染.同時(shí),還清洗了進(jìn)樣針,從而保護(hù)了進(jìn)樣器密封墊.清洗液的選擇-

色譜條件 清洗液 緩沖液,反相 90%水及10%甲醇 非水溶液,反相 100%甲醇 正相 流動(dòng)相

GPC 流動(dòng)相 離子交換 水步驟-*在MAIN屏幕內(nèi)按DIAG鍵; *按PRIMENDLWSH鍵.可重復(fù)多作幾遍;第八十四頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三疏水塌陷(流動(dòng)相中有機(jī)相比例低時(shí)發(fā)生)當(dāng)使用有機(jī)相比例較低的流動(dòng)相（極性較高的）時(shí)，觀察到保留完全喪失的現(xiàn)象

使用100%水溶液流動(dòng)相，進(jìn)樣77針，運(yùn)行時(shí)間超過20小時(shí)，保留時(shí)間皆比較穩(wěn)定

但當(dāng)

停止流速后，再開機(jī)時(shí)，保留喪失。此現(xiàn)象表明：當(dāng)色譜柱卸壓時(shí)，流動(dòng)相被排出孔外?40min40minVo第八十五頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三未濕潤(rùn)的孔濕潤(rùn)的孔注意：保留性質(zhì)與填料表面積與配體密度有關(guān)。然而，如果硅膠表面未濕潤(rùn)，那么有效的色譜表面積會(huì)減少95%，因此，降低被分析物的保留特性即等于“疏水塌陷”，記住：幾乎所有的表面積都在孔內(nèi)！低有機(jī)溶劑或純水溶液流動(dòng)相被排出孔外C18

硅膠什么是“疏水塌陷”？第八十六頁，共九十二頁，編輯于2023年，星期三為什么卸壓會(huì)導(dǎo)致色譜柱疏水塌陷—可能機(jī)理停止輸液時(shí)，迫使水相流動(dòng)相進(jìn)入孔中的壓力降低為零。壓力降低時(shí)，疏水的孔表面會(huì)排斥極性流動(dòng)相，使孔中“dewet”the