麻杏石甘口服液中添加鹽酸溴己新的測(cè)定超高效液相色譜法

麻杏石甘口服液中添加鹽酸溴己新的測(cè)定超高效液相色譜法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了麻杏石甘口服液中鹽酸溴己新的超高效液相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于麻杏石甘口服液中鹽酸溴己新的測(cè)定。本方法檢出限為1.5mg/mL，定量限為5mg/mL。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。原理麻杏石甘口服液中添加的鹽酸溴己新提取后經(jīng)UPLC分離，二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定，依據(jù)保留時(shí)間和紫外光譜圖定性，外標(biāo)法定量。試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為優(yōu)級(jí)純。水符合GB/T6682一級(jí)水的規(guī)定。甲醇（CH3OH）：色譜純。冰醋酸（CH3COOH）：優(yōu)級(jí)純。三乙胺（（C2H5）3N）：優(yōu)級(jí)純。流動(dòng)相（5%冰醋酸）：量取冰醋酸（4.3）50mL，加水稀釋至1000mL，加三乙胺（4.4）適量調(diào)節(jié)pH至4.0，脫氣備用。對(duì)照品：鹽酸溴己新，純度≥95.0%。鹽酸溴己新標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱取鹽酸溴己新對(duì)照品（4.6）10mg，加甲醇（4.2）溶解后轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，再加甲醇（4.2）稀釋至刻度，搖勻，得1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-18℃冰箱保存，有效期3個(gè)月。有機(jī)微孔濾膜：0.22μm。初始流動(dòng)相：量取5%冰醋酸（4.5）250mL與甲醇（4.2）250mL，混勻，備用。儀器設(shè)備超高效液相色譜儀，配備二極管陣列（PDA）檢測(cè)器。天平：感量0.00001g。酸度計(jì)。離心機(jī)：5000rpm。超聲波清洗機(jī)。試驗(yàn)步驟試樣制備準(zhǔn)確吸取麻杏石甘口服液試樣1.0mL，置50mL離心管中，加24.0mL甲醇（4.2）充分混勻，超聲10min，5000rpm離心10min，準(zhǔn)確吸取上清液1.0mL，置20.0mL容量瓶中，加初始流動(dòng)相（4.9）稀釋至刻度，搖勻，用有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，待測(cè)。同時(shí)做試樣空白，同法處理。標(biāo)準(zhǔn)曲線制備準(zhǔn)確吸取鹽酸溴己新標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.7）5.0mL，置50mL容量瓶中，加初始流動(dòng)相（4.9）稀釋至刻度，搖勻，得100μg/mL的對(duì)照品溶液，分別吸取100μg/mL的對(duì)照品溶液適量，用初始流動(dòng)相（4.9）倍比稀釋，得1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL的對(duì)照品系列工作液。超高效液相色譜儀參考條件色譜柱：C18，50mm×2.1mm；粒徑1.7μm，或性能相當(dāng)者。流動(dòng)相A：5%冰醋酸。流動(dòng)相B：甲醇。流速：0.3mL/min。進(jìn)樣量：10μL。柱溫：35℃。PDA檢測(cè)器，波長(zhǎng)掃描范圍：190nm～400nm。定量最大吸收波長(zhǎng)：248nm。液相色譜梯度洗脫條件見(jiàn)表1。液相色譜梯度洗脫條件時(shí)間min流動(dòng)相A%流動(dòng)相B%50501.250502.530704.030704.550505.05050測(cè)定定性測(cè)定試樣溶液色譜圖的保留時(shí)間與對(duì)照品溶液色譜圖的保留時(shí)間相對(duì)偏差不大于2.5%，且試樣溶液的光譜圖與對(duì)照品溶液的光譜圖一致，則判定試樣中存在鹽酸溴己新。定量測(cè)定取試樣溶液和對(duì)照品溶液各10μL注入超高效液相色譜儀，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，外標(biāo)法定量。鹽酸溴己新典型色譜圖參見(jiàn)附錄A.1～A.3。數(shù)據(jù)處理試樣中鹽酸溴己新的含量按下式計(jì)算： （SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)公式\*ARABIC1）式中：X──試樣中鹽酸溴己新的含量，單位為毫克每毫升（mg/mL）；C──試樣溶液中鹽酸溴己新的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V1──試樣溶解總體積500（兩次稀釋25X20=500），單位為毫升（mL）；V──試樣的體積，單位為毫升（mL）；1000──用于單位換算。結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后兩位。精密度在重復(fù)性條件下兩次獨(dú)立測(cè)XX果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

（資料性附錄）

鹽酸溴己新典型色譜圖40μg/mL鹽酸溴己新對(duì)照品溶液特征色譜圖見(jiàn)圖A.1。40μg/mL鹽酸溴己新對(duì)照品溶液特征色譜圖10mg/mL陽(yáng)性添加鹽酸溴己新麻杏石甘口服液樣品溶液特征色譜圖見(jiàn)圖A.2。10mg/m