熒光光度分析法測(cè)定維生素

熒光光度分析法測(cè)定維生素第一頁，共十三頁，編輯于2023年，星期三OBJECTIVE1學(xué)習(xí)和掌握熒光光度分析法測(cè)定VB2的基本原理和方法。2學(xué)習(xí)熒光分光光度計(jì)的使用方法。第二頁，共十三頁，編輯于2023年，星期三PRINCIPLE熒光：物質(zhì)的分子經(jīng)紫外光照射后，發(fā)射出的較原來吸收光的頻率低、波長長的光。不同的熒光物質(zhì)有各自的特征激發(fā)光波長和熒光波長，利用物質(zhì)的熒光現(xiàn)象進(jìn)行定性、定量分析的方法稱為熒光分析法。第三頁，共十三頁，編輯于2023年，星期三對(duì)同一物質(zhì)而言，若εbC＜1（＜0.05），即溶液的組成量度極稀時(shí)，熒光強(qiáng)度F與溶液的組成量度C有以下關(guān)系：

F=2.303ФI0εbC

Ф：熒光效率I0：入射光強(qiáng)度ε:熒光物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)b：樣品池的厚度

＜

I0和b當(dāng)固定時(shí)，

F=K’C第四頁，共十三頁，編輯于2023年，星期三0FCC樣品

F=K’C

F樣品第五頁，共十三頁，編輯于2023年，星期三VB2的C（HAc）=0.1mol/L溶液在紫外光照射下，發(fā)出黃綠色熒光，可直接進(jìn)行熒光測(cè)定。pH=2.9,λ激發(fā)370nm，467nmλ發(fā)射

527nmVB2，核黃素第六頁，共十三頁，編輯于2023年，星期三PROCEDURE1

維生素B2系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制0.1mol/LHAc準(zhǔn)確吸取VB2貯備液(125g/ml)

0.50ml定容50.0ml搖勻1.25g/mlVB2

操作液第七頁，共十三頁，編輯于2023年，星期三編號(hào)123456VB2

操作液(ml)0.002.004.006.008.0010.00用0.1mol/LHac稀釋至(ml)25.00熒光強(qiáng)度F相對(duì)熒光強(qiáng)度F’第八頁，共十三頁，編輯于2023年，星期三2待測(cè)溶液的配制取樣品溶液

5.00ml

0.1mol/LHAc定容25.0ml搖勻待測(cè)溶液第九頁，共十三頁，編輯于2023年，星期三3

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制1）儀器預(yù)熱（激發(fā)光波長360nm，熒光波長510nm）。2）以系列標(biāo)準(zhǔn)液6號(hào)液為標(biāo)準(zhǔn)，調(diào)節(jié)熒光強(qiáng)度F為90左右。3）固定熒光測(cè)定條件不變。分別測(cè)定下列標(biāo)準(zhǔn)液1~6號(hào)液（由稀倒?jié)猓┑臒晒鈴?qiáng)度F，并記錄。4）以溶液組成量度C為橫坐標(biāo)，相對(duì)熒光強(qiáng)度F’，為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。0F’C(g/ml)第十頁，共十三頁，編輯于2023年，星期三4樣品測(cè)定1）在相同的熒光測(cè)定條件下，測(cè)定樣品液的熒光強(qiáng)度F。2）從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對(duì)應(yīng)的組成量度，再乘以5，得試樣中維生素B2的組成量度。C待測(cè)0F’C(g/ml)第十一頁，共十三頁，編輯于2023年，星期三DATA

編號(hào)

1234567VB2

操作液(ml)0.002.004.006.008.0010.005.00樣品用0.1mol/LHac稀釋至(ml)25.00VB2標(biāo)準(zhǔn)溶液組成量度(g/ml)熒光強(qiáng)度F相對(duì)熒光強(qiáng)度F’實(shí)驗(yàn)結(jié)果：CV