定量分析方法性能確認

學習和討論內(nèi)容管理機構(gòu)的要求方法確認的支持性文件方法的評價的主要內(nèi)容1當前第1頁\共有48頁\編于星期二\21點ALB試劑說明書當前第2頁\共有48頁\編于星期二\21點ALB試劑說明書當前第3頁\共有48頁\編于星期二\21點管理機構(gòu)的要求

2003年1月24日,美國醫(yī)醫(yī)療服務中心(CMS、theFinalCLIARule)公布.陳述：“實驗室的分析方法（non-waived）必須要確認其性能.”

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使用美國食品及藥物管理局認可的但未更改的方法，實驗室要證實其方法的性能與生產(chǎn)廠家所建立方法的性能進行比較。當前第5頁\共有48頁\編于星期二\21點管理機構(gòu)的要求CLIA是根據(jù)分析方法的復雜性，方法分為三大類:1.Waivedtests(豁免試驗)2.Non-waivedunmodifiedtests–moderateandhighcomplexitytests(中度或高度試驗)3.Non-waived,modified(orin-housedeveloped)tests.(更改中度或高度試驗或開發(fā)的試驗)當前第6頁\共有48頁\編于星期二\21點管理機構(gòu)的要求

Non-waived,未更改的中等和高度復雜性

化學、血液學etc.要求進行四個方面的方法確認1.重復性實驗Replicationexperiment(estimateimprecision)2.方法學的比較Comparisonofmethods(estimateinaccuracy)3.線性實驗Linearityexperiment(reportablerange)4.參考值的確認Establishreferenceintervals.

當前第7頁\共有48頁\編于星期二\21點管理機構(gòu)的要求

Non-waivedtests更改的中等和高度復雜性或?qū)嶒炇议_發(fā)的試驗，要求進行六個方面的方法確認1.Precision精密度2.Accuracy準確度3.Reportablerange可報告范圍4.ReferenceIntervals參考值范圍

5.Analyticalsensitivity(detectionlimit)分析靈敏度（最低檢測值）6.Analyticalspecificity(interferingsubstances)分析的特異性（干擾物質(zhì)）

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《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》檢查細則（通用要求）醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室應當保證檢測系統(tǒng)的完整性和有效性，對需要校準的檢驗儀器、檢驗項目和對臨床檢驗結(jié)果有影響的輔助設(shè)備定期進行校準。當前第9頁\共有48頁\編于星期二\21點CAP-LAP的要求COM.40300AnalyticAccuracy/PrecisionPhaseIIThelaboratoryverifiesorestablishesanalyticaccuracyandprecisionforeachtest.COM.40400AnalyticSensitivityPhaseIIThelaboratoryverifiesorestablishestheanalyticsensitivity(lowerdetectionlimit)ofeachassay,asapplicable.COM.40500AnalyticInterferencesPhaseIIThelaboratoryverifiesorestablishesanalyticinterferencesforeachtest

COM.40600ReportableRangePhaseIIThereportablerange(analyticmeasurementrange)isverified/establishedforeachanalyticprocedurebeforeimplementationCOM.50000ReferenceIntervalsPhaseIIThelaboratoryestablishesorverifiesitsreferenceintervals(normalvalues).當前第10頁\共有48頁\編于星期二\21點方法確認的支持性文件定量實驗室方法的初步評價（CLSIEP10）臨床化學設(shè)備操作精密度評價（CLSIEP5）用患者標本進行方法學比較和偏倚評估（CLSIEP9）定量分析方法的線性（CLSIEP6）臨床化學干擾試驗（CLSIEP7）基質(zhì)效應的評價（CLSIEP14）精密度和準確度性能的用戶證實(EP15-A)CLSIClinicalandLaboratoryStandardsInstitute當前第11頁\共有48頁\編于星期二\21點方法的評價的主要內(nèi)容方法確認=評價誤差總誤差=系統(tǒng)誤差+隨機誤差.方法確認的基本內(nèi)容:–評價不精密度(隨機誤差)–評價不準確度(系統(tǒng)誤差)–可報告范圍的確認(線性)–參考值的確認(正常值范圍)

當前第12頁\共有48頁\編于星期二\21點方法的評價的主要內(nèi)容對于更改的中等和高度復雜性或?qū)嶒炇议_發(fā)的試驗，要增加二項內(nèi)容：–分析方法的靈敏度Analyticalsensitivity(limitofdetection)–分析方法的特異性Analyticalspecificity(interferingsubstance)當前第13頁\共有48頁\編于星期二\21點不精密度

指同一樣本在一定條件下多次重復測定得到的一系列單次測定值之間的接近程度，是表示測定結(jié)果中隨機誤差大小程度的指標。用標準差和變異系數(shù)描述不精密度的大小當前第14頁\共有48頁\編于星期二\21點不精密度

1.計算批內(nèi)（間）不精密度(CV或SD),并將與廠家批內(nèi)（間）不精密度比較

2.計算總不精密度(CV或SD)，并將與廠家總不精密度比較

3.不精密度分析目標進行比較當前第15頁\共有48頁\編于星期二\21點不精密度當前第16頁\共有48頁\編于星期二\21點CLIA88推薦最大測量不精密度當前第17頁\共有48頁\編于星期二\21點不正確度大批檢測結(jié)果的均值與真值的一致程度與系統(tǒng)誤差有關(guān)，常用偏倚表示不正確度當前第18頁\共有48頁\編于星期二\21點Page

19測量不正確度與檢測系統(tǒng)的關(guān)系檢測系統(tǒng)校準品試劑分析儀當前第19頁\共有48頁\編于星期二\21點不正確度

評價準確度的常用試驗方法比較試驗回收試驗干擾試驗當前第20頁\共有48頁\編于星期二\21點不正確度方法比較試驗（comparisonofmethodsexperiment）將試驗方法（待評價或待驗證的方法）與比較方法（參考方法或準確度已知的方法）進行比較用于評價試驗方法的恒定和比例系統(tǒng)誤差。當前第21頁\共有48頁\編于星期二\21點不正確度方法要點：

–比較方法理想的比較方法=referencemethod–樣本個數(shù)：40份患者樣本

1/3低濃度1/3中濃度

1/3高濃度（可報告范圍）當前第22頁\共有48頁\編于星期二\21點不正確度統(tǒng)計學包括：

圖形分析Graphanalysis回歸分析Regressionanalysis偏差分析Biasanalysis可接受的標準Acceptablecriterion當前第23頁\共有48頁\編于星期二\21點不正確度圖形分析–差異圖:Y軸:試驗方法與比較方法之差

X軸:比較方法的測定值

當前第24頁\共有48頁\編于星期二\21點不正確度–對比圖:Y軸:試驗方法測定值

X軸:比較方法的測定值當前第25頁\共有48頁\編于星期二\21點回歸分析回歸方程Y=a+bXa為回歸線截矩，反映恒定系統(tǒng)誤差的大小,a=0時，表示無恒定系統(tǒng)誤差b為回歸線斜率，反應比例系統(tǒng)誤差的大小，

b=1時，表示無比例系統(tǒng)誤差不正確度當前第26頁\共有48頁\編于星期二\21點相關(guān)系數(shù)（r）可幫助判斷測定的濃度范圍對于斜率和截矩的評估是否合適，而不能用于判斷方法是否可受。r>0.99,應用線性回歸統(tǒng)計r<0.99,應用配對t-test不正確度當前第27頁\共有48頁\編于星期二\21點

判斷差異能否被接受，應在醫(yī)學決定水平與總可允許誤差比較。應用方法比較的回歸方程,計算醫(yī)學決定水平的預期偏差.丨a+bXc）-Xc丨〈1/2TEa（CLIA88）不正確度當前第28頁\共有48頁\編于星期二\21點Page

29衡量質(zhì)量的兩個重要指標測量的固有不精密度測量的不正確度總誤差允許總誤差TEA當前第29頁\共有48頁\編于星期二\21點總誤差（TE）

總誤差（TE）的估計TE=SE+RETE=bias+nSD

TE<<TEa（CLIA88）(n=2、3、4)當前第30頁\共有48頁\編于星期二\21點Page

31允許總誤差指標與其他國家總誤差指標檢驗項目本標準TE(%)美國TE丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶16.0±20%

天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶15.0±20%

γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶11.0±20%

堿性磷酸酶18.0±30%

肌酸激酶15.0±30%

淀粉酶15.0±30%

乳酸脫氫酶11.0±20%

總蛋白5.0±10%

白蛋白6.0±10%

總膽紅素15.0±20%±6.84mmol/L血糖7.0±10%±0.33mmol/L肌酐12.0±15%±26.5μmol/L尿酸12.0±17%

尿素8.0±9%±0.71mmol/L總膽固醇9.0±10%

甘油三酯14.0±25%

氯離子4.0±5%

當前第31頁\共有48頁\編于星期二\21點測量不精密度和不正確度對質(zhì)量的影響當前第32頁\共有48頁\編于星期二\21點可報告范圍可報告范圍（reportablerange）指可以報告的所有結(jié)果范圍，包含兩種類型的范圍分析測量范圍（analyticalmeasurementrange，AMR）臨床可報告范圍（clinicalreportablerange，CRR）。當前第33頁\共有48頁\編于星期二\21點評價分析方法能報告的可信的最低、最高的濃度范圍值。確認廠家所提供該分析系統(tǒng)的可報告范圍是否一致。目的:可報告范圍當前第34頁\共有48頁\編于星期二\21點目測線性法最小二剩法線性評價NCCLS制訂并推出的評價方案（EP-6）多項式線性評價方案（2002）可報告范圍當前第35頁\共有48頁\編于星期二\21點紅色：S形蘭色：拋物線黑色：直線可報告范圍當前第36頁\共有48頁\編于星期二\21點可報告范圍樣本數(shù)量：驗證線性：5-7個濃度水平，重復2次測定。建立線性：7-11個濃度水平，測定2-4次當前第37頁\共有48頁\編于星期二\21點目測線性法可報告范圍當前第38頁\共有48頁\編于星期二\21點可報告范圍當前第39頁\共有48頁\編于星期二\21點最小二剩法線性評價方案擬合的直線方程

Y=Ax+B

可報告范圍當前第40頁\共有48頁\編于星期二\21點1、b（在1.000.03范圍內(nèi))，a近于0，則可直接判斷該測定方法可報告范圍在實驗已涉及濃度。2、

若b不接近1，a較大；若b0.97，或1.03，已有可能b和1之間有統(tǒng)計上顯著性差異。試著舍去某組數(shù)據(jù)，另作回歸統(tǒng)計。若縮小分析范圍后，回歸式有明顯改善，b近于1，a趨于0。此時，縮小的分析范圍是真實的可報告范圍。

進行統(tǒng)計學判斷和評價:可報告范圍當前第41頁\共有48頁\編于星期二\21點干擾試驗是通過定量檢測樣本中的物質(zhì)所引起試驗方法的系統(tǒng)誤差，以評價方法的準確度。由干擾物質(zhì)引起的誤差通常是恒定系統(tǒng)誤差，與分析物的濃度無關(guān)系。干擾試驗當前第42頁\共有48頁\編于星期二\21點

檢測限（limitofdetection）指檢測系統(tǒng)可檢測出的最低分析物濃度。包括檢測低限、生物監(jiān)測限和功能靈敏度。檢測限當前第43頁\共有48頁\編于星期二\21