藥物分析 20生物制品

第二十章生物制品分析第一節(jié)概述《中國藥典》2010版一部——中藥二部——化學(xué)藥物三部——生物藥物生物制品：是以微生物、細(xì)胞、動物或人源組織和體液等為原料，應(yīng)用傳統(tǒng)技術(shù)或現(xiàn)代生物技術(shù)制成，用于人類疾病的預(yù)防、治療和診斷的制品。第一代：利用生物材料加工制成的含有某些天然活性物質(zhì)與混合成分的粗提制劑如：垂體后葉素、甲狀腺片生化制藥的六個階段：1、原料的選擇和預(yù)處理；2、組織及細(xì)胞的破碎；3、從破碎的細(xì)胞中提取有效成分制成粗品；4、采用多種生化技術(shù)從粗品中將目的物精制出來；5、干燥及保存；6、制劑。第二代：根據(jù)生物化學(xué)和免疫學(xué)原理，應(yīng)用近代生化分離純化技術(shù)從生物體制取的具有針對性治療作用的特異生化成分。如：人血白蛋白、人纖維蛋白原第三代：應(yīng)用生物工程技術(shù)生產(chǎn)的天然生理活性物質(zhì)，以及通過蛋白質(zhì)工程原理設(shè)計制造的具有比天然物質(zhì)更高活性的類似物，或與天然物質(zhì)結(jié)構(gòu)不同的全新的藥理活性成分如：重組人干擾素、EPO基因工程藥物在受體細(xì)胞中得到目的蛋白質(zhì)對基因改造并導(dǎo)入受體細(xì)胞分離、純化或合成控制該蛋白質(zhì)的基因確定對疾病有效的蛋白質(zhì)第一節(jié)生物制品的分類按用途（ChP2010）：預(yù)防類：疫苗治療類：抗毒素、細(xì)胞因子、血液制品診斷類：ABO血型1.疫苗類：用病毒或立克次體接種于動物、雞胚，或經(jīng)組織培養(yǎng)后加以處理制造而成

疫苗就是病毒，不過這種病毒已經(jīng)剔除致病能力。當(dāng)人體接種疫苗時，免疫系統(tǒng)就會產(chǎn)生一定的保護物質(zhì)。當(dāng)人再次接觸該類病毒時，人的免疫系統(tǒng)就會循著原有的記憶，制造更多的保護物質(zhì)來阻止病毒對人體的傷害。1.1細(xì)菌類疫苗：卡介苗

1.2病毒類疫苗：麻疹疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗

1.3聯(lián)合疫苗：百白破聯(lián)合疫苗

1.4雙價疫苗及多價疫苗2.抗毒素及抗血清類：用細(xì)菌類毒素或毒素免疫馬或其他大動物所取得的免疫血清叫抗毒素用細(xì)菌或病毒本身免疫馬或其他大動物所取得的免疫血清叫抗（菌）病毒血清

人工被動免疫3.血液制品：由健康人的血清或經(jīng)特異免疫的人血漿，經(jīng)分離、提純或重組DNA技術(shù)制成的血漿蛋白組分，以及血液細(xì)胞有形成分4.重組DNA制品：采用遺傳修飾，將所需制品的編碼DNA通過一種質(zhì)粒或病毒載體，引入適宜的微生物或細(xì)胞系，DNA經(jīng)過表達和翻譯后生成蛋白質(zhì)，再經(jīng)提取和純化而回收所需制品制得。細(xì)胞因子類、生長因子類、激素類、酶類疫苗、診斷用品第二節(jié)、生物制品的質(zhì)量要求生物制品的安全性1.異源性生物活性大分子物質(zhì)2.性質(zhì)不穩(wěn)定，易變性失活

3.易受微生物污染生物制品的有效性生物制品的可接受性因生化藥物的來源復(fù)雜，不同的原材料和生產(chǎn)工藝得到的產(chǎn)品的質(zhì)量會有差異，包括主要成分的含量、比例，以及其它成分的種類和/或含量等，而這些差異往往質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)反映不出來，從嚴(yán)格意義上說，生化藥物沒有仿制。所以，在進行生化藥物研究時首先要基于“不可仿制”來考慮問題。

1、注重原材料和工藝過程控制，結(jié)合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，較全面地控制產(chǎn)品質(zhì)量。2、產(chǎn)品上市后不要輕易更換原材料變更生產(chǎn)工藝、改換劑型、延長有效期等。如果需要進行以上變更，應(yīng)針對變更情況對產(chǎn)品的質(zhì)量、安全性和有效性的影響進行相應(yīng)的研究工作包括藥學(xué)、藥理毒理和臨床研究。3、因為生化藥物的質(zhì)量是靠全程控制來保證，其原液（或半成品）應(yīng)不可以自由銷售，否則不僅增大了流通環(huán)節(jié)染菌的可能性，又不利于成品全程的質(zhì)量控制。4、動物源性病毒的滅活工藝及驗證是一個需要研究和探討的課題。因為人們對動物源性病毒的認(rèn)識，以及動物源性病毒與人類感染性疾病的關(guān)系的認(rèn)識是在逐步地深入，對病毒的滅活和工藝驗證也會隨著人們認(rèn)識的提高而不斷地趨于更科學(xué)和合理。

1918年的西班牙流感由H1N1亞型流感病毒引起，是歷史上最為嚴(yán)重的流感大流行，全球約20億人感染，4000萬人死亡。

1957年的亞洲流感(H2N2)首發(fā)于中國貴州，8個月內(nèi)席卷全球，全球至少100萬人死于這場災(zāi)難。

1968年香港流感(H3N2)至少波及世界55個國家和地區(qū)，造成全球150萬~200萬人死亡。通過對這3次流感疫情的研究發(fā)現(xiàn)，引起疫情發(fā)生的病原都同動物流感病毒有著不可分割的關(guān)系。第三節(jié)、鑒別試驗依據(jù)生物制品的生物學(xué)特點，利用免疫學(xué)方法來判斷與確證產(chǎn)品的真?zhèn)?。免疫是人體的一種生理功能，人體依靠這種功能識別“自己”和“非己”成分，從而破壞和排斥進入人體的抗原物質(zhì)，或人體本身所產(chǎn)生的損傷細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等，以維持人體的健康?？乖贵w反應(yīng)的特點主要有三性：即特異性、比例性、可逆性。

特異性。是抗原抗體反應(yīng)的最主要特征，這種特異性是由抗原決定簇和抗體分子之間空間結(jié)構(gòu)的互補性確定的。

比例性。是指抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系，只有當(dāng)二者濃度比例適當(dāng)時才出現(xiàn)可見反應(yīng)。而當(dāng)抗原抗體比例超過此范圍時，反應(yīng)速度和沉淀物量都會迅速降低甚至不出現(xiàn)抗原抗體反應(yīng)。

可逆性。是指抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離恢復(fù)為抗原與抗體的特性。1.免疫雙擴散法原理為相應(yīng)的抗原與抗體，在瓊脂凝膠板上的相應(yīng)孔內(nèi)，分別向周圍自由擴散。在抗原和抗體孔之間，擴散的抗原與抗體相遇而發(fā)生特異性反應(yīng)，并于兩者濃度比例合適處形成肉眼可見的白色沉淀線，證明有抗原和抗體反應(yīng)發(fā)生。2.免疫電泳法免疫電泳法是指利用在電場作用下標(biāo)本中各組分因電泳遷移率不同而分成區(qū)帶，然后與抗體進行雙向免疫擴散，在適當(dāng)比例處形成沉淀線。根據(jù)沉淀線的數(shù)量、位置及形狀，以分析標(biāo)本中所含組分的性質(zhì)。

3.免疫印跡法供試品與特異性抗體結(jié)合后，抗體再與酶標(biāo)抗體特異性結(jié)合，通過酶學(xué)反應(yīng)的顯色，對供試品的抗原特異性進行檢查。4.免疫斑點法

ChP2010-重組人干擾素α2a5.酶聯(lián)免疫法

ChP2010-抗毒素和抗血清制品第四節(jié)、生物制品的檢查安全性毒性試驗；防腐劑試驗；熱原質(zhì)試驗；有關(guān)安全性的特殊試驗安全性和效力檢定效力檢定濃度測定；動物保護率試驗；活菌率或病毒滴度測定；免疫抗體滴度測定；穩(wěn)定性試驗。檢查項目：1.物理性狀檢查：外觀、溶解速率、裝量2.蛋白質(zhì)含量測定：凱氏定氮法3.防腐劑和滅活劑含量測定：苯酚、甲醛4.純度檢查：電泳法、HPLC5.相對分子量或分子大小測定6.其他檢查：水分、酸堿度、氯化鈉7.安全性檢查7.1檢查對象

菌種和主要原材料半成品（包括原液）成品生物制品的全程質(zhì)量控制7.2檢查內(nèi)容

7.2.1過敏性物質(zhì)檢查

過敏性試驗：抗血清要檢查異體蛋白牛血清含量測定血型物質(zhì)檢測：避免溶血（人血白蛋白）7.2.2殺菌、滅活和脫毒檢查

死菌苗、滅活疫苗及類毒素制品需做無菌檢查、活毒檢查、解毒試驗7.2.3殘余毒力和毒性物質(zhì)檢查殘余毒力檢查：減毒活疫苗無毒性檢查毒性試驗

死菌苗、組織培養(yǎng)疫苗、白蛋白防腐劑檢查

除活菌苗、活疫苗及輸注用血液用品7.2.4外源性污染檢查

野毒檢查熱原檢查乙型肝炎表面抗原：血液制品8.生物制品的效力測定8.1免疫力試驗定量免疫定量攻擊法

變量免疫定量攻擊法：50%有效免疫劑量測定定量免疫變量攻擊法：保護指數(shù)測定被動保護力測定8.2活菌數(shù)和活病毒滴度測定活菌疫苗需測定活菌率8.3血清學(xué)試驗：

測定抗體水平或抗原活性9.雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查生物污染物：微生物污染、細(xì)胞成分、外源DNA、培養(yǎng)基成分產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)：聚合物、降解物工藝添加劑：抗生素、防腐劑9.1.宿主細(xì)胞蛋白殘留量檢查控制異源蛋白以防超量后引起機體免疫反應(yīng)特別是需反復(fù)多次注射的藥品方法：酶聯(lián)免疫吸附劑測定法9.2.外源性DNA殘留量的檢查