藥物分析課件ppt 第四章 藥物的含量測定方法與驗(yàn)證

第四章

藥物的含量測定方法與驗(yàn)證

學(xué)習(xí)要求:1、掌握容量法、分光光度法、色譜法等藥物含量測定方法的基本方法、特點(diǎn)和有關(guān)要求。掌握色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的主要內(nèi)容。2、熟悉不經(jīng)有機(jī)破壞和經(jīng)有機(jī)破壞的樣品前處理方法。3、掌握藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的指標(biāo)和驗(yàn)證的方法。4、了解滴定液的配制與標(biāo)定，分析儀器的校正和檢定。

第一節(jié)

定量分析樣品的前處理方法

一、概述

1.為什么要對定量分析的樣品進(jìn)行前處理？

含鹵素有機(jī)藥物R-X（F，Cl,Br,I）金屬有機(jī)藥物R-O-Me（有機(jī)酸或酚的含金屬有機(jī)藥物金屬鹽；結(jié)合不牢固）

有機(jī)金屬藥物R-Me

（結(jié)合牢固）

2.常用的處理方法不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法藥物分析中常用的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法鹵原子的活潑性1.鹵原子與碳原子直接相連，鹵原子的活潑性和它直接相連的烴基的結(jié)構(gòu)有很大關(guān)系。（1）乙烯型鹵和芳鹵不活潑（2）烯丙型鹵和芐鹵活潑（3）鹵代烷型介于兩者之間2.分子中所含鹵原子的個(gè)數(shù)

分子中所含鹵原子的個(gè)數(shù)越多，活潑性越強(qiáng)，特別是同一碳上含多個(gè)鹵原子或一個(gè)苯環(huán)上含多個(gè)鹵原子時(shí)，活潑性增強(qiáng)更加明顯3.鹵素的種類I＞Br＞Cl＞F常見的含鹵素有機(jī)藥物三氯叔丁醇六氯對二甲苯膽影酸碘他拉酸鹽酸胺碘酮醋酸氟輕松磺溴酞鈉含金屬有機(jī)藥物的分析

含金屬的有機(jī)藥物：金屬原子不與碳原子直接相連，通常為有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物如酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵

有機(jī)金屬藥物：金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連，結(jié)合比較牢固如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利酒石酸銻鉀含金屬元素的有機(jī)藥物硬脂酸鎂富馬酸亞鐵葡萄糖酸銻鈉卡巴胂醋酸苯汞汞撒利（一）直接測定法

例如：富馬酸亞鐵

溶于熱稀礦酸，采用鈰量法，鄰二氮菲作指示劑二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（二）經(jīng)水解后測定法

1.堿水解后測定法

例如：三氯叔丁醇的含量測定

CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH(CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3AgCl+NaNO3AgNO3+NH4SCNAgSCN+NH4NO3

2.酸水解后測定法

例如：硬脂酸鎂的含量測定

Mg(C17H35COO)2+H2SO4

MgSO4+2C17H35COOH

H2SO4+2NaOHNa2SO4

+2H2O

△（三）經(jīng)還原分解后測定法

1.堿性還原后測定

例如：泛影酸的含量測定

2.酸性還原后測定

例如：碘番酸的含量測定

Zn還原后銀量法

3.利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測定含量

（1）含銻藥物

例如：葡萄糖酸銻的含量測定

Sb5++2KISb3++2K+

++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6

（2）含鐵藥物

2Fe3++2KI2Fe2++2K++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6H+

濕法破壞

藥物分析中常用的有機(jī)破壞的方法有

HNO3-HClO4法干法破壞(一)濕法破壞HNO3-H2SO4法

H2SO4-硫酸鹽法

HNO3-H2SO4-HClO4法；H2SO4-H2O2；H2SO4-KMnO4(二)干法破壞1.高溫?zé)胱品訜o水Na2CO3或ZnO等以助灰化三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法

2.氧瓶燃燒法(oxygenflaskcombustionmethod)

（1）儀器裝置

500ml,1000ml,2000ml,磨口、硬質(zhì)玻璃錐形瓶

（2）樣品制備

固體樣；液體樣（3）吸收液的選擇

用于X、S、P等的鑒別、檢查、含量測定時(shí)多數(shù)是H2O或H2O-NaOH；少數(shù)為H2O-NaOH-H2O2.

（4）燃燒分解操作法

例如：碘苯酯的含量測定第二節(jié)定量分析方法的特點(diǎn)一、容量分析法

（一）容量分析法（滴定法）的特點(diǎn)

儀器廉價(jià)易得；

操作簡單、快速；測定結(jié)果準(zhǔn)確（RSD＜0.2%）；方法耐用性高；儀器普通易得；專屬性較差。（二）容量分析法的計(jì)算問題

1.

滴定度（T）的概念每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y藥物的質(zhì)量(mg)

2.滴定度的計(jì)算

aA+bBcC+dD

T(mg/ml)=m×a/b×M

3.百分含量的計(jì)算

（1）直接滴定法

含量（%）=V×F×T/W×100%

F=實(shí)際標(biāo)定的濃度/規(guī)定的濃度

（2）間接滴定法（生成物滴定法；剩余量滴定法）含量（%）=（VO

–

VB)×F×T/W×100%例：鹽酸奈福泮的含量測定：稱取鹽酸奈福泮（C17H19NO·HCl）0.1524g,加冰醋酸10ml，微溫使溶解，放冷，加5％醋酸汞溶液5ml與結(jié)晶紫指示液1滴，，用0.0991mol/L的高氯酸滴定液滴定至溶液顯藍(lán)色，共消耗高氯酸滴定液5.45ml，空白試驗(yàn)消耗高氯酸滴定液0.15ml。已知每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于28.98mg的C17H19NO·HCl。計(jì)算鹽酸奈福泮的百分含量。

＝＝98.9%例：鹽酸去氧腎上腺素的含量測定

取本品約0.1g，精密稱定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）50ml，再加鹽酸5ml，立即密塞，放置15分鐘并時(shí)時(shí)振搖，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，振搖后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于3.395mg的C9H13NO2·HCl。C9H13NO2＋3Br2→C9H10Br3NO2＋3HBrBr2＋2KI→2KBr＋I(xiàn)2I2＋2Na2S2O3→2NaI＋Na2S4O6反應(yīng)原理：溴滴定液（0.05mol/L）滴定度＝0.05×(1/3)×203.67＝3.395(mg/ml)鹽酸去氧腎上腺素的百分含量計(jì)算：二、光譜分析法

（一）紫外-可見分光光度法（200nm～760nm)1.朗伯-比耳定律

A=Ecl

靈敏度高，可達(dá)10-4g/ml～

10-7g/ml

2.特點(diǎn)準(zhǔn)確度高，RSD為2%～5%

儀器價(jià)格低廉，操作簡單，易普及，應(yīng)用范圍廣。專屬性差

3.儀器校正和檢定

波長校正:用汞燈中較強(qiáng)譜線237.38、253.65、275.28、296.73、313.16、334.15、365.02、404.66、425.83、546.07nm與576.96nm

或用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm進(jìn)行校正。

吸收度的檢定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至1000ml

波長(nm)235(最小)257(最大)313(最小)350(最大)

E1%1cm

124.5144.048.62106.6

雜散光檢查：試劑濃度(g/ml)測定波長透光率(%)

NaI1.00220nm＜0.8NaNO25.00340nm＜0.8

4.對溶劑的要求:注意溶劑的末端吸收：使用范圍均不能小于截至使用波長。

波長范圍220～240nm241～250nm251～300nm300nm以上溶劑+吸收池A

＜0.41＜0.20＜0.10＜0.05

5.測定方法

要求供試品溶液的吸光度A應(yīng)在0.3～0.7

對照品比較法：Cx=(Ax/Ar)Cr;含量%=Cx×D/W×100%

常用方法吸收系數(shù)法：Cx=Ax/〔

(E1%1cm

)x×100〕計(jì)算分光光度法：VitA的三點(diǎn)校正法比色法：注意空白對照的制備問題

例：貝諾酯的含量測定取本品適量，精密稱定，加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每1ml中約含7.5μg的溶液，在240nm的波長處測定吸光度；另取貝諾酯對照品，精密稱定，同法測定，計(jì)算，即得。貝諾酯的百分含量計(jì)算：例：已酮可可堿（C13H18N4O3）緩釋片的含量測定取緩釋片10片，除去包衣后，精密稱重為4.858g（標(biāo)示量為0.4g/片），研細(xì)，精密稱取0.4874g，置200ml量瓶中，加水100ml，置溫水浴中保溫，振搖，使己酮可可堿溶解，放冷，加水至刻度，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液25ml,置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，再精密量取稀釋液2ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液，照分光光度法在274nm的波長處測定吸光度為0.361,按C13H18N4O3的吸收系數(shù)為365計(jì)算已酮可可堿的標(biāo)示量百分含量。標(biāo)示量（％）＝＝×100％

＝98.6％

（二）熒光分光光度法

靈敏度高，可達(dá)10-10g/ml～

10-12g/ml

在低濃度進(jìn)行測定，防止F與C不成正比及自熄滅作用

1.特點(diǎn)用基準(zhǔn)物溶液校正儀器靈敏度，防止樣品液熒光衰減靈敏度高，但干擾因素多。制備熒光衍生物，可提高其靈敏度和選擇性。用樣品量少，操作簡單，方法快速，應(yīng)用范圍較廣。

含量測定

常用的方法對照品比較法:Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)×CrCh.P.收載地高辛片、利血平片、洋地黃毒苷片。2.干擾的排除（1）溶劑：必要時(shí)蒸餾；（2）溶液：過濾；通惰性氣體除氧；（3）玻璃儀器：高度潔凈；（4）溫度

三、色譜分析法

按分離原理分為：吸附；分配；離子交換；排阻色譜方法分類按分離方法分為：PC；TLC；柱色譜；GC，HPLC。

（一）HPLC法

1.對HPLC儀器一般要求

色譜柱、流動相按品種項(xiàng)下要求。

（1）色譜柱（2）檢測器（3）流動相二極管陣列檢測器采集的色譜圖

內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中主成分含量3.測定方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法外標(biāo)法測定供試品中主成分含量外標(biāo)一點(diǎn)法

應(yīng)用示例：

RP-HPLC法測定鹽酸黃酮哌酯片含量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法如頭孢拉??；頭孢羥氨芐；頭孢唑啉鈉用外標(biāo)一點(diǎn)法

色譜柱的理論板數(shù)：n=5.54(tR/Wh/2)2

2.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分離度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2)＞1.5

拖尾因子：T=W0.05h/2d1

應(yīng)在0.95～

1.05

重復(fù)性：RSD≤2%例：吲達(dá)帕胺的含量測定精密稱取乙酰苯胺20.3mg，置100ml量瓶中，加甲醇5ml溶解后，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。再精密稱取吲達(dá)帕胺對照品20.6mg，置100ml量瓶中，加甲醇5ml溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液10ml和內(nèi)標(biāo)溶液5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測得吲達(dá)帕胺峰面積為1647448，乙酰苯胺峰面積為950624。另取吲達(dá)帕胺樣品19.8mg，按同法測定，記錄色譜圖，測定吲達(dá)帕胺峰面積為1559907，乙酰苯胺峰面積為942133。求吲達(dá)帕胺的百分含量。

＝＝99.4%

第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

一、準(zhǔn)確度

是指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，一般用回收率表示。（一）含量測定方法的準(zhǔn)確度

1.原料藥可用已知純度對照品或樣品進(jìn)行測定；或與已建準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。

2.制劑要考察輔料對回收率的影響。采用在空白輔料中加入原料對照品的方法作回收率試驗(yàn)，然后計(jì)算RSD。（二）雜質(zhì)定量測定方法的準(zhǔn)確度向藥物中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測試；與另一種成熟的方法進(jìn)行比較；不能測定響應(yīng)因子時(shí)，可用原料藥主成分的響應(yīng)因子。但同時(shí)應(yīng)明確表示單個(gè)雜質(zhì)或雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比或面積比。

（二）數(shù)據(jù)要求

回收率%=（測定平均值—空白值）/加入量×100%

要求制備高、中、低三濃度的樣品，各測定3次。應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率，或測定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。

二、精密度

是指在規(guī)定的測試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定結(jié)果之間的接近程度。

（一）精密度表示方法

1.

偏差(deviation,d)d=測得值-平均值=Xi-X

2.標(biāo)準(zhǔn)偏差（standarddeviation,SD或S）

S=[(∑Xi–X)2/(n-1)]1/23.相對標(biāo)準(zhǔn)差(relativestandarddeviation,RSD)也稱變異系數(shù)

(coefficientofvariation,

CV)

RSD=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值×100%=S/X×100%（二）驗(yàn)證內(nèi)容1.重復(fù)性在相同操作條件下,由同一個(gè)分析人員測定所得結(jié)果的精密度，也稱批內(nèi)精密度。（n=3×3或6）2.中間精密度在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果的精密度。

3.重現(xiàn)性在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測定結(jié)果的精密度。包括重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性

三、專屬性是指在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測定方法，均應(yīng)考察其專屬性。（一）鑒別反應(yīng)應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分，不含被測組分的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。（二）含量測定和雜質(zhì)測定色譜法和其他分離法，應(yīng)附代表性的圖譜，以說明專屬性。

圖中應(yīng)注明各組分的位置，色譜法中分離度應(yīng)符合要求。在能獲得雜質(zhì)的情況下，可加到試樣中，考察對結(jié)果的干擾。在雜質(zhì)和降解物不能獲得的情況下，可用已驗(yàn)證方法和藥典方法進(jìn)行對照；也可用對試樣加速破壞的方法，比較兩種方法。

四、檢測限（limit