版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
p14ARF、mdm2、p53蛋白在鼻咽癌中表達(dá)的研究【摘要】目的探討p14ARF、mdm2、p53蛋白在鼻咽癌中的表達(dá)及其意義。方法應(yīng)用免疫組化法檢測58例鼻咽癌組織和20例慢性鼻咽炎癥組織中p14ARF、mdm2、p53蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果p14ARF、mdm2、p53蛋白在鼻咽癌組織和慢性鼻咽炎癥組織中的陽性表達(dá)率分別為%、%、%和100%、0、0,各個(gè)蛋白在兩組之間表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<)。結(jié)論p14ARF蛋白低表達(dá)以及mdm2、p53蛋白高表達(dá)與鼻咽癌有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】鼻咽癌;p14ARF;mdm2;p53
Abstract:ObjectiveToinvestigatetheroleofp14ARF,mdm2,p53proteinintheprocessofcarcinogenesisofnasopharyngealcarcinoma.MethodsExpressionofp14ARF,mdm2andp53proteinweredetectedbyimmunohisto-chemicalmethodsin78formalin-fixedandparaffin-embeddedtissues,includingnasopharyngealcarcinoma(n=58),chronicnasopharyngitis(n=20).Resultspositiveratesofp14ARF,mdm2,p53inpatientswithnasopharyngealcarcinomaandchronicnasopharyngitiswere%、%、%and100%,0,0,respectively.Expressionofp14ARFproteinweresignificantlydecreasedandmdm2,p53proteinweresignificantlyelevatedinnasopharyngealcarcinomacomparedwithchronicnasopharyngitis(P<).ConclusionTheresultssuggestedthatp14ARF-mdm2-p53cellcycleregulationpathwaymayplayimportantrolesincarcinogenesisofnasopharyngealcarcinomaandmaybevaluablemarkersinnasopharyngealcarcinomadiagnosisandtherapy.
Keywords:nasopharyngealcarcinoma;p14ARF;mdm2;p53
細(xì)胞周期的調(diào)控是由許多不同基因組成的多條通路來完成的。在人類腫瘤細(xì)胞中,最主要的細(xì)胞周期調(diào)控通路有兩條:RB通路(p16INK4a-CDK4/6-pRb-E2F)和p53通路(p14ARF-mdm2-p53),近年來p14ARF-mdm2-p53通路的作用日益受到重視。本文應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)鼻咽癌中p14ARF、mdm2、p53蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測并分析各個(gè)蛋白表達(dá)與鼻咽癌之間的關(guān)系。
1材料與方法
材料
研究材料取自2000-2005年我院鼻咽活檢標(biāo)本,共78例,其中鼻咽癌標(biāo)本58例(低分化鱗癌57例,未分化癌1例),鼻咽黏膜慢性炎標(biāo)本20例;男45例,女13例;年齡12~79歲,平均49歲。所有病例診斷前未接受過抗癌治療。以上標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定,石蠟包埋,4μm切片。
兔抗人p14ARF多克隆抗體購自美國Neomarkers公司,稀釋度為1∶250;鼠抗人mdm2單克隆抗體、鼠抗人p53單克隆抗體、即用型第二代免疫組化ElivisionTM廣譜試劑盒、DAB顯色劑、多聚賴氨酸以及其他免疫組化輔助試劑均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。
方法
免疫組織化學(xué)染色,按照說明書進(jìn)行。陰性對(duì)照以PBS代替一抗,陽性對(duì)照為已知陽性對(duì)照片。免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參考許良中[1]等的方法,在光學(xué)顯微鏡下每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野記數(shù)細(xì)胞(鼻咽癌組織為癌細(xì)胞;慢性鼻咽炎癥組織為上皮細(xì)胞)。根據(jù)陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞占所觀察細(xì)胞數(shù)的百分比即陽性細(xì)胞百分比:染色強(qiáng)度打分:無色(0分),淡黃色(1分),棕黃色(2分),棕褐色(3分);陽性細(xì)胞所占百分比打分:無陽性細(xì)胞(0分),陽性細(xì)胞數(shù)≤10%(1分),11%~50%(2分),51%~75%(3分),>75%(4分);染色強(qiáng)度得分×陽性細(xì)胞百分比得分得出最終結(jié)果:0~3分為陰性(-),>3分為陽性(+)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,率間比較采用χ2檢驗(yàn),相關(guān)性比較采用Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn),P<為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
p14ARF蛋白表達(dá)
p14ARF以細(xì)胞核出現(xiàn)著色為陽性(圖1、2,見封2)。p14ARF蛋白在鼻咽癌組織和慢性鼻咽炎癥組織中的陽性表達(dá)率分別為%、100%,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<),見表1。
mdm2蛋白表達(dá)
mdm2以細(xì)胞核出現(xiàn)著色為陽性,其中部分細(xì)胞漿也有著色(圖3,見封2)。mdm2蛋白在鼻咽癌組織和慢性鼻咽炎癥組織中的陽性表達(dá)率分別為%、0,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<),見表1。
p53蛋白表達(dá)
p53以細(xì)胞核出現(xiàn)著色為陽性(圖4,見封2)。p53蛋白在鼻咽癌組織和慢性鼻咽炎癥組織中的陽性表達(dá)率分別為%、0,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<),見表1。表1鼻咽癌和慢性鼻咽炎癥中p14ARF、mdm2、p53蛋白的表達(dá)情況
各蛋白表達(dá)相關(guān)性分析
Spearman相關(guān)分析表明,鼻咽癌組織中p14ARF、mdm2、p53表達(dá)均無相關(guān)性(P>),見表2。表2p14ARF與mdm2、p53蛋白表達(dá)的相關(guān)性
3討論
p53基因是研究最多最活躍的抑癌基因之一,至少50%以上的人類腫瘤存在p53基因高頻率突變失活。從對(duì)原發(fā)性鼻咽癌標(biāo)本的研究來看,鼻咽癌中p53基因的突變情況不同于其他腫瘤。大部分報(bào)道指出鼻咽癌存在野生型p53而很少突變[2]。但大量的研究顯示:鼻咽癌組織和鼻咽癌細(xì)胞株有p53蛋白過表達(dá)或稱為聚集。本研究顯示鼻咽癌及慢性鼻咽炎癥組織中p53蛋白陽性表達(dá)率分別為%和0,與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[3-4]。
小鼠雙微粒體mdm2(mousedoubleminute2)基因最初是從鼠自發(fā)轉(zhuǎn)化3T3成纖維細(xì)胞雙微染色體基因擴(kuò)增的篩選中發(fā)現(xiàn)的,是一種進(jìn)化上保守的癌基因。正常情況下,p53誘導(dǎo)mdm2基因轉(zhuǎn)錄,mdm2蛋白和p53結(jié)合使其失活并促進(jìn)p53降解,形成了負(fù)反饋調(diào)節(jié)環(huán)路,因而在正常細(xì)胞中野生型p53蛋白和mdm2互相調(diào)節(jié)保持精細(xì)的平衡并處于低水平。mdm2在鼻咽癌中的作用目前研究資料較少,有文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)dm2在鼻咽癌組織中的主要活化方式是過表達(dá)而不是擴(kuò)增[5]。
本研究結(jié)果顯示mdm2蛋白在鼻咽癌組織和慢性鼻咽炎癥組織中的陽性表達(dá)率分別為%和0,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與廖芝玲等[6]等的研究結(jié)果基本一致。此外,本研究結(jié)果顯示mdm2、p53蛋白在鼻咽癌組織中的陽性表達(dá)率分別為%、%,其中mdm2陽性的病例中p53的陽性率為75%。
鼻咽癌細(xì)胞中高表達(dá)的mdm2蛋白可能有類似于某些病毒蛋白產(chǎn)物的作用,它與野生型p53蛋白結(jié)合后,可使其半衰期延長,因而免疫組化容易檢測到。而高表達(dá)的野生型p53蛋白又可調(diào)節(jié)mdm2蛋白的表達(dá)使其表達(dá)水平進(jìn)一步提高,因而出現(xiàn)這兩個(gè)基因在表達(dá)水平之間的高度相關(guān)性。這種高度相關(guān)性可以解釋某些鼻咽癌組織中為何只出現(xiàn)p53蛋白的高表達(dá)而沒有p53基因突變這一現(xiàn)象,同時(shí)也提示,mdm2可能通過野生型p53蛋白在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。
p14ARF是由p16INK4a的可變讀碼框架ARF(alternativereadingframe)編碼,它與INK4a共享Exon2和Exon3,取代Exonlα的是位于其上游約20kb的Exonlβ,三個(gè)外顯子共同編碼的p14ARF蛋白是一種核蛋白,位于核仁和(或)核內(nèi)包涵體中[7],該蛋白相對(duì)十分穩(wěn)定,半衰期接近6h,主要經(jīng)過蛋白酶體途徑降解。
p14ARF作為抑癌基因,其功能失活的機(jī)制主要包括基因的突變、缺失和甲基化。p14ARF的功能失活則導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,大量研究表明肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、白血病、胰腺癌、黑色素瘤、喉癌等中均有p14ARF的表達(dá)缺失。但國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道p14ARF高表達(dá)于幾乎所有宮頸癌中。究其原因,可能與宮頸癌中高危型HPVE6、E7癌蛋白有關(guān)。
Kwong等[8]應(yīng)用甲基化特異性PCR對(duì)4個(gè)鼻咽癌細(xì)胞株、4個(gè)異種移植瘤、33例鼻咽癌組織和6例正常鼻咽組織的研究發(fā)現(xiàn)p14ARF的啟動(dòng)子甲基化率分別為25%、25%、18%和0。李永強(qiáng)[9]等報(bào)道p14ARF蛋白在36例晚期鼻咽鱗癌中陽性表達(dá)率為%。本研究顯示該蛋白在鼻咽癌組織和慢性鼻咽炎癥組織中的陽性表達(dá)率分別為%、100%,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
另外,本研究采用Spearman相關(guān)分析未發(fā)現(xiàn)p14ARF、mdm2、p53表達(dá)有相關(guān)性。腫瘤形成是一個(gè)非常復(fù)雜的過程,而非單純的線性關(guān)系,有必要進(jìn)一步的研究。
【參考文獻(xiàn)】
[1]許良中,楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中國癌癥雜志,1996,6(4):229-231.
[2]NasrinN,TaibaK,HannanN,etmolecularstudyofEBVDNAandp53mutationsinnasopharynealcarcinomaofSandiArabpatients[J].CancerLett,1994,82(2):189-198.
[3]Taweevisitofp53andneoplasticcellproliferationinundifferentiatednasopharyngealcarcinoma[J].SoutheastAsianJTropMedPublicHealth,2007,38(1):136-140.
[4]成偉,梁中敏,劉維奇,等.P53、nm23蛋白和血管內(nèi)皮生長因子在鼻咽癌微血管生成中的作用[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,6(1):6-8.
[5]羅均利,肖健云,田勇泉,等.鼻咽癌細(xì)胞中MDM2基因的擴(kuò)增與表達(dá)及其與p53的表達(dá)、EB病毒潛伏感染、細(xì)胞增生的關(guān)系[J].中國耳鼻咽喉顱底外科雜志,1999,5(3):169-174.
[6]廖芝玲,何偉民,張斌,等.ΔNp63、p21WAF1及MDM2基因蛋白在鼻咽癌組織表達(dá)的研究[J].廣西醫(yī)學(xué),2003,25(11):2101-2106.
[7]KashubaE,MattssonK,KleinG,etinducestherelocationofHDM2andp53toextranucleolarsitesthataretargetedbyPML
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2024-2030年中國孕婦營養(yǎng)保健品行業(yè)營銷模式及投資前景展望報(bào)告版
- 2024-2030年中國奧他米韋項(xiàng)目申請(qǐng)報(bào)告
- 2024-2030年中國大型購物中心行業(yè)經(jīng)營策略及投資規(guī)劃分析報(bào)告
- 2024-2030年中國國際電路租賃行業(yè)前景趨勢規(guī)劃研究報(bào)告
- 眉山職業(yè)技術(shù)學(xué)院《射頻電路與系統(tǒng)》2023-2024學(xué)年第一學(xué)期期末試卷
- 茂名職業(yè)技術(shù)學(xué)院《編程語言基礎(chǔ)》2023-2024學(xué)年第一學(xué)期期末試卷
- 2024年度企業(yè)管理制度與勞動(dòng)合同修訂及員工權(quán)益保障協(xié)議3篇
- 影視后期制作教案第01周-02-1圖層
- 2024事業(yè)單位工作長期合同工特殊工種安全協(xié)議樣本2篇
- 2024年標(biāo)準(zhǔn)采購合同管理細(xì)則版B版
- 保函(履約、投標(biāo)、付款、質(zhì)量等保函參考格式)
- 北京東城區(qū)北京匯文中學(xué)2023-2024學(xué)年高二物理第一學(xué)期期末復(fù)習(xí)檢測模擬試題含解析
- 《流程分析與改善》課件
- 花道-插花技藝養(yǎng)成智慧樹知到課后章節(jié)答案2023年下云南林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院
- 高中生學(xué)籍卡
- 玻璃門窗清潔程序和規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)范本
- 2023年入伍50年戰(zhàn)友聚會(huì)發(fā)言稿范文
- 特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化(IPF)治療新藥-尼達(dá)尼布課件
- 滬科版八年級(jí)數(shù)學(xué)上冊全套試卷
- 應(yīng)用PDCA提高入院宣教的知曉率
- 醫(yī)療質(zhì)量(安全)不良事件報(bào)告制度
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論