高考生物二輪復(fù)習(xí)七生物技術(shù)實(shí)踐講義含解析

生物技術(shù)實(shí)踐

點(diǎn)清?線明?面廣——專題主干知識(shí)整合

:-----［建議］學(xué)前理一理，平時(shí)翻一翻，考前憶一憶

［理清一一知識(shí)聯(lián)系］

菌種及代謝類型-1一探究加德洗衣_廠府制劑種類

粉的洗劑效果1自變量、無關(guān)變量

果酒:C6Hl206f2c2H5OH+2c。2-

果醋gCzH'OH+OzfCH3coOH傳統(tǒng)發(fā)「梅的方法

-原理-一梅的固定化

+麗~酵技術(shù)應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：必反復(fù)使用

腐乳：蛋白質(zhì)』一肽+氨基酸

生過程

酵母細(xì)胞L

脂肪上

甘油+脂肪酸物實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)

裝置圖、流程圖」的固定化

發(fā)酵

技

營養(yǎng)慧）培養(yǎng)基」DNA的溶解性：在60.14mol/L的NaCl

術(shù)

種類-1溶液中溶解度段低;不溶于冷酒精

實(shí)地武動(dòng)物:滲透漲破

消毒一破碎細(xì)胞方法〈植物：團(tuán)研廨

⑶滅菌微生物踐DNA的

-的實(shí)驗(yàn)一」粗提取「「一利用NaCl溶液、冷酒精

團(tuán)倒速業(yè)曼制備培養(yǎng)基一4蛋白解

室培養(yǎng)與鑒定f去除雜質(zhì)

「加熱

平板劃線法

純化大腸桿菌」匚鑒定無溜上鑒定試劑二笨胺

5）稀釋涂布平板法

［記清----主干術(shù)語］

1.制作果酒、果醋，腐乳、酸奶（泡菜）利用的微生物分別是醛理菌、醋酸菌、毛霉（主

要）和乳酸菌,異化作用類型分別是兼蝮氮型、需氧型、震氧型、厭氧薯

2.制作果酒和果醋的實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄f沖洗一榨汁-＞漕精發(fā)酵f醋酸發(fā)酵。

3.制作果酒和果醋的發(fā)酵裝置中充氣口的作用是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣，

排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)排出￡色,出料口用來取樣。

4.制作果酒時(shí)溫度一般控制在！8:2殍工，時(shí)間為過二12N，前期需氧后期丕震氧；

制作果醋時(shí)溫度控制在3aH3顯℃，時(shí)間為7-?ad，始終需氧。

5.毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪

酶可將脂肪水解為苴迪和脆隨酸。

6.腐乳制作的實(shí)驗(yàn)流程：讓豆腐上長出毛霉一加鹽腌制f加鹵湯裝瓶f密封腌制。

7.加鹽腌制時(shí)間約為8d,配制鹵湯中的酒的含量一般控制在12%左右。

8.用鹽腌制時(shí)，注意控制鹽的用量：鹽的濃度過低，不足以抑制微生物的生長,可能

導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過高會(huì)影響腐乳的口味。食鹽的作用：抑制微生物的生長，避

免腐敗變質(zhì)；析出水分:，使豆腐變硬，在后期制作過程中不易酥爛；調(diào)味作用，給腐乳以必

要的咸味；浸提毛酶菌絲上的量自霰。

9.配制鹵湯：鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的，直接關(guān)系到腐乳的色、香、味。

酒的作用：防止雜菌泣染以防腐；與有機(jī)酸結(jié)合形成酯，賦予腐乳風(fēng)味；酒精含量的高低與

腐乳后期發(fā)酵時(shí)間的長短有很大關(guān)系，酒精含量越高，對(duì)蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳

成熟期延長;酒精含量過低，蛋白酶的活性高，加快蛋白質(zhì)的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐

敗，難以成塊。

10.微生物培養(yǎng)基的成分一般包括水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及生長因子等。

11.消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的物微生物（不包括

芽抱和抱子）。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽抱和抱

王。

12.制備固體培養(yǎng)基的步驟包括計(jì)算、觸、溶化、天黃、倒平板等。

13.純化微生物常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法,平板劃線法可以分離

微生物但不能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù),稀釋涂布平板法既可分離微生物也可以沏微生物進(jìn)行社

數(shù)。

14.平板劃線法是通過攜斑在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐

步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可

見的子細(xì)胞群體，這就是菌落。

15.稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂

布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)，即稀釋涂布平板法一般分為系列稀釋操作和涂布平

板操作兩步。

16.對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法;對(duì)于需要長期保存的菌種，可以

采用甘油管藏的方法。

17.DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，在濃度0.14mol/L的NaCl溶液中溶

解度最低。

18.DNA不溶于酒精溶液,但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可溶于酒精，可利用冷卻的酒精對(duì)提

取的DNA進(jìn)行純化。

19.在雞血細(xì)胞液中加入一定量鬣驅(qū)并用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液，可獲取含

DNA的濾液；切碎洋蔥，加入一定量洗滌劑和食鹽,攪拌研磨，過濾后收集濾液，可獲取含

DNA的濾液。

20.處理植物組織時(shí)需要進(jìn)行研磨，其目的是破碎細(xì)胞壁,使核物質(zhì)容易溶解在邂1

溶液中；研磨不充分會(huì)使DNA的提取量減少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致得不到絲狀沉淀物。

21.用二苯胺鑒定DNA,在沸水浴的條件下呈現(xiàn)藍(lán)色。

22.目前常用的加酶洗衣粉的酶制劑有四類：能自酶、，脂肪酶、…淀粉酶和纖維素酶,其

中，應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。

23.探究加酶洗衣粉與普通洗衣粉洗滌效果的實(shí)驗(yàn)自變量是選衣粉的獨(dú)婁葭探究加酶洗

衣粉洗滌的最佳溫度條件實(shí)驗(yàn)的自變量是水的遍度j

24.一般來說，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合和物理吸附法固定,而細(xì)胞多采用魚埋法固定化。

這是因?yàn)榧?xì)胞個(gè)大，而酶分子很?。粋€(gè)大的難以被吸附或結(jié)合，而個(gè)小的酶容易從包埋材料

中漏出。

25.酵母細(xì)胞固定化的步驟：酵母菌的活化一配制CaCL溶液一型制迤藻酸鈉硼一海

藻酸鈉溶液與酵母菌細(xì)胞混合一固定化酵母細(xì)胞。

26.如果制作的凝膠珠顏色過淺、呈白色，說明海藻酸鈉的濃度偏低,固定的酵母細(xì)胞

數(shù)目較少；如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形,則說明海藻酸鈉的濃度偏高,制作失敗，

需要再作嘗試。

［澄清一一思維誤區(qū)］

關(guān)注點(diǎn)1誤認(rèn)為兼性厭氧與“有氧、無氧”都一樣

［澄清］酵母菌在有氧條件下進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖；在無氧條件下，進(jìn)行無氧呼吸

產(chǎn)生酒精和CO?,產(chǎn)生的酒精對(duì)其他微生物和酵母菌本身都具有毒害作用，所以在無氧條件

下酵母菌不能大量繁殖。

關(guān)注點(diǎn)2誤認(rèn)為釀酒和釀醋所利用的微生物類型相同

［澄清］釀酒和釀醋所利用的微生物不同，前者為酵母菌一一真核生物；后者為醋酸菌

一一原核生物。二者本質(zhì)區(qū)別是有無以核膜為界限的細(xì)胞核。

關(guān)注點(diǎn)3不明確腐乳前期發(fā)酵和后期發(fā)酵的作用

［澄清］前期發(fā)酵的主要作用是創(chuàng)造條件讓毛霉生長，使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳

成型。后期發(fā)酵主要是酶與微生物協(xié)同參與生化反應(yīng)的過程，即通過各種輔料與腐乳的緩慢

水解作用，生成腐乳的香氣。

關(guān)注點(diǎn)4誤認(rèn)為腐乳制作中食鹽的作用只是調(diào)節(jié)風(fēng)味

［澄清］食鹽在腐乳制作中的作用有：①析出豆腐中的水分，有利于豆腐塊成形；②抑

制雜菌；③形成腐乳的風(fēng)味；④殺死毛霉等微生物，有利于菌體內(nèi)蛋白酶、脂肪酶等發(fā)揮作

用。

關(guān)注點(diǎn)5不明確影響腐乳口味的因素有哪些

［澄清］影響腐乳口味的因素有：①豆腐的含水量；②鹽的用量；③酒的用量；④香辛

料的種類和用量；⑤其他輔料的種類；⑥發(fā)酵溫度和時(shí)間。

關(guān)注點(diǎn)6不能區(qū)分選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基

［澄清］按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基?選擇培養(yǎng)基是

指在培養(yǎng)基中加入或不加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進(jìn)所需要的微生

物的生長。如在某培養(yǎng)基中加入青霉素，則能抑制細(xì)菌的生長，對(duì)真菌的生長無影響。鑒別

培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別

不同類別的微生物。如伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基能指示大腸桿菌的存在。

關(guān)注點(diǎn)7平板冷凝后，不明確平板倒置的目的

［澄清］平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平

板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造

成污染。

關(guān)注點(diǎn)8不了解影響加酶洗衣粉洗滌效果的因素

［澄清］影響加酶洗衣粉洗滌效果的因素有水溫、水量、水質(zhì)、洗衣粉的用量，衣物的

質(zhì)料、大小及浸泡時(shí)間和洗滌的時(shí)間等。在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)控制好自變量之外的無關(guān)變量。

關(guān)注點(diǎn)9不明確酵母細(xì)胞固定化實(shí)驗(yàn)中，海藻酸鈉和氯化鈣的作用

［澄清］海藻酸鈉作為酵母菌的包埋劑。氯化鈣能與海藻酸鈉反應(yīng)，形成凝膠珠。

關(guān)注點(diǎn)10不明確DNA粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)中，兩次使用蒸儲(chǔ)水的作用

［澄清］第一次加蒸館水，使雞血細(xì)胞吸水漲破；第二次加蒸譙水，使含DNA的NaCl

溶液濃度降低，析出DNA。

關(guān)注點(diǎn)11不明確破碎動(dòng)植物細(xì)胞的方法

［澄清］破碎植物細(xì)胞的方法用研磨法，在研磨之前，向研缽中加入食鹽、洗滌劑和植

物材料破碎動(dòng)物細(xì)胞的方法用滲透漲破法，過程是在雞血細(xì)胞液中加入蒸鐳水，用玻璃棒

進(jìn)行快速攪拌。

專題復(fù)習(xí)I2個(gè)主攻點(diǎn)之（一）傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)和微生物的利用

串主干知識(shí)◎一網(wǎng)打盡（基穩(wěn)才能樓高）

1.傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用（填圖）

（1）果酒和果醋的制作：

i挑選葡萄一m沖洗一榨汁一■（曳色酵一醋酸發(fā)酵

卜驗(yàn)流程

?條件控制《^^以計(jì)與殛〉條件控制

果

果閭18?25P溫度國30?35C

牌

酒

制

制先通氣，后西密封空氣全程⑹通氣

作

作

110?12d時(shí)間網(wǎng)7?8d

⑵腐乳的制作：

①制作原理：

空氣中的一些真菌起主要作用的是回毛高

蛋白質(zhì)器，」吩了■的強(qiáng)堰氨基酸卜扁L|脂肪虺啦回甘油+用脂肪用

②實(shí)驗(yàn)流程及影響因素：

——函謔忘二而兼呼二加麗蝙』贏疏翩

|70%|~|含水-k］|二毛坯:鹽=而口

P''0------------1如2%|

I發(fā)酵時(shí)間I希宰和

2.圖解識(shí)記微生物的培養(yǎng)、分離與計(jì)數(shù)（填圖）

接種方法

I［II平板劃線法卜------—」釋稀涂布平板法

注I酒精等化

pH、C）2等g紫外線耐毒~

技術(shù)

因碳源、回氮源、水、營養(yǎng)T灼燒滅菌

無機(jī)鹽、生長因子四一I干熱滅菌~

口國而壓蒸汽滅菌

變芬麗素的細(xì)菌

利用網(wǎng)選擇培養(yǎng)應(yīng)用微生物

工分解纖維素胸函

基對(duì)微生物篩選的分離

舞舞一?!國稀釋涂布平板漆

?顯微鏡直接計(jì)期，

WM高頻考點(diǎn)◎一包在內(nèi)（方向比努力更重要）

考向（一）果酒、果醋和腐乳的制作

［真題導(dǎo)向］

1.（2018?江蘇高考）.某高校采用右圖所示的發(fā)酵罐進(jìn)行葡萄酒

主發(fā)酵過程的研究，下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.夏季生產(chǎn)果酒時(shí)，常需對(duì)罐體進(jìn)行降溫處理

B.乙醇為揮發(fā)性物質(zhì)，故發(fā)酵過程中空氣的進(jìn)氣量不宜太大

C.正常發(fā)酵過程中罐內(nèi)的壓力不會(huì)低于大氣壓

D.可以通過監(jiān)測(cè)發(fā)酵過程中殘余糖的濃度來決定何時(shí)終止發(fā)酵

解析：選B利用酵母菌進(jìn)行酒精發(fā)酵時(shí)，一般將溫度控制在18?25°C,因此夏季生產(chǎn)

果酒時(shí)，需要對(duì)發(fā)酵罐體進(jìn)行降溫處理；發(fā)酵過程中，進(jìn)氣口閥門應(yīng)該關(guān)閉，以保證發(fā)酹罐

的無氧環(huán)境，使酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生酒精：正常發(fā)酵過程中，由于酵母菌進(jìn)行無氧呼吸

產(chǎn)生C02,所以發(fā)酵罐內(nèi)的壓力增大，高于大氣壓；葡萄酒的發(fā)酵過程消耗葡萄糖，所以可

以通過監(jiān)測(cè)發(fā)酵過程中殘余糖的濃度來決定何時(shí)終止發(fā)酵。

2.（2017?江蘇高考，多選）如圖是探究果酒與果醋發(fā)酵的裝置示

氣體出工培養(yǎng)基入口

意圖。下列相關(guān)敘述正確的是（）［卜/羅入口

A.改變通入氣體種類，可以研究呼吸作用類型對(duì)發(fā)酵的影響

B.果酒發(fā)酵中期通入氮?dú)猓湍妇鷮挠醒鹾粑D(zhuǎn)變?yōu)闊o氧呼吸

C.果醋的發(fā)酵周期與實(shí)驗(yàn)設(shè)定的溫度密切相關(guān)

D.氣體入口與氣體出口可以交換使用

解析：選ABC改變通入氣體的種類，例如分別通入氮?dú)夂脱鯕猓裳芯繜o氧呼吸和有

氧呼吸對(duì)發(fā)酵的影響；果酒發(fā)酵中期通入氮?dú)?，更利于?chuàng)造無氧條件，酵母菌將從有氧呼吸

轉(zhuǎn)變?yōu)闊o氧呼吸；果醋發(fā)酵的菌種是醋酸桿菌，其生長的適宜溫度是30?35C,溫度能影

響醋酸桿菌的代謝，從而影響果醋的發(fā)酵周期；氣體的入口必須伸入培養(yǎng)液中，氣體出口不

能伸入培養(yǎng)液中，如果氣體的入口和出口交換，會(huì)導(dǎo)致發(fā)酵液噴出。

3.（2015?江蘇高考，多選）下圖為蘋果酒的發(fā)酵裝置示意圖，下列敘述錯(cuò)誤的是（)

A.發(fā)酵過程中酒精的產(chǎn)生速率越來越快

B.集氣管中的氣體是酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生的CO?

C.發(fā)酵過程中酵母種群呈“J”型增長

D.若發(fā)酵液表面出現(xiàn)菌膜，最可能原因是發(fā)酵瓶漏氣

解析：選ABC酵母菌發(fā)酵過程中因營養(yǎng)物質(zhì)的消耗、pH的變化等，酒精的產(chǎn)生速率會(huì)

越來越慢。集氣管收集的氣體除酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生的CO?外，還有有氧呼吸產(chǎn)生的C02?

發(fā)酵過程中，隨著營養(yǎng)物質(zhì)消耗、pH降低等，酵母菌的繁殖速度會(huì)變慢，其種群不會(huì)呈“J”

型增長。發(fā)酵液表面出現(xiàn)的菌膜可能是醋酸菌在有氧條件下繁殖產(chǎn)生的，說明發(fā)酵瓶可能漏

氣。

［拓知識(shí)］解讀發(fā)酵裝置圖

裝置圖結(jié)構(gòu)或操作目的

充氣口醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣

普手吊排氣口酒精發(fā)酵時(shí)用來排出co2

T口長而彎曲的膠管防止空氣中微生物的污染

出二批二

首君

制酒時(shí)關(guān)閉充氣口

制醋時(shí)充氣口連接氣泵，輸入無菌空氣

［過關(guān)練習(xí)］

1.（2018?南通調(diào)研）下列關(guān)于利用葡萄制作果酒過程的敘述，正確的是（）

A.選用棕色玻璃瓶以防止光照抑制酵母菌發(fā)酵

B.將葡萄汁裝滿發(fā)酵瓶以保證無氧的發(fā)酵環(huán)境

C.將發(fā)酵瓶置于35℃的恒溫環(huán)境中可加快發(fā)酵速度

D.要給發(fā)酵瓶適時(shí)排氣，后期可延長排氣間隔時(shí)間

解析：選D光照不影響酵母菌的發(fā)酵；葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有約1/3的空間，

避免發(fā)酵液溢出；酒精發(fā)酵的最佳溫度是18?25"C；要給發(fā)酵瓶適時(shí)排氣，后期可延長排

氣間隔時(shí)間。

2.（2018?江浦高級(jí)中學(xué)段考）如圖表示工業(yè)上利用蘋果制備果酒、果醋的流程圖。下

列敘述錯(cuò)誤的是（）

朝汁篷愿料

鮮蘋果汁|巫一純度蘋果酒|旦|蘋果原醋|」T蘋果醋|

A.過程①②所需的最適溫度不相同

B.過程②需要在有氧氣的條件下進(jìn)行

C.若過程①人工接種酵母菌可以縮短蘋果酒的釀制時(shí)間

D.整個(gè)發(fā)酵過程都必須在嚴(yán)格無菌條件下才能正常進(jìn)行

解析：選D①表示果酒發(fā)酵、②表示果醋發(fā)酵。①所用的菌種是酵母菌，其發(fā)酵的溫

度是18?25℃,②所用的菌種是醋酸菌，其發(fā)酵的最適溫度是30?35°C；②果醋發(fā)酵需

要醋酸菌，醋酸菌是需氧型生物，故果醋發(fā)酵要在有氧條件下進(jìn)行；果酒發(fā)酵若人工接種酵

母菌，菌種的純度高，產(chǎn)生果酒的效率高，故可以縮短蘋果酒的釀酒時(shí)間；發(fā)酵前所有的器

具和用品都要進(jìn)行無菌處理，接種酵母菌或醋酸菌后在無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在嚴(yán)格無菌條件

下會(huì)殺死酵母菌和醋酸菌。

考向（二）腐乳的制作

［真題導(dǎo)向］

1.（2017?江蘇高考）下列關(guān)于“腐乳的制作”實(shí)驗(yàn)，敘述正確的是（）

A.控制發(fā)酵溫度的主要目的是腐乳調(diào)味

B.腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用

C.毛霉的主要作用是分解脂肪和淀粉

D.成品腐乳表面的粘性物質(zhì)主要由細(xì)菌產(chǎn)生

解析：選B控制發(fā)酵溫度主要目的是利于菌種繁殖和代謝；腐乳制作后期加入香辛料

和料酒有防腐作用；毛霉的作用主要是分解蛋白質(zhì)和脂肪；成品腐乳表面的粘性物質(zhì)主要是

毛霉產(chǎn)生的菌絲，而毛霉屬于真菌。

2.（2016?江蘇高考）下列關(guān)于中學(xué)“腐乳的制作”實(shí)驗(yàn)，敘述正確的是（）

A.加鹽主要是為了調(diào)節(jié)水分，利于毛霉生長

B.加料酒主要是為了滅菌，避免腐敗變質(zhì)

C.發(fā)酵過程中起主要作用的是乳酸桿菌

D.實(shí)驗(yàn)室制作的腐乳不宜直接食用

解析：選D加鹽不僅能抑制雜菌的生長也會(huì)抑制毛霉的生長，另外加鹽還可析出豆腐

中的水分，有利于腐乳成形。加料酒可以抑制微生物的生長，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的風(fēng)味,

但不能滅菌。在腐乳制作的發(fā)酵過程中起主要作用的是毛霉。實(shí)驗(yàn)室制作的腐乳因未經(jīng)質(zhì)量

鑒定，不宜直接食用。

［防易錯(cuò)］腐乳制作流程中需注意的問題

讓豆腐上

-I直接接種或利用空氣中的毛霉泡子

長出毛霉

方法：逐層加鹽.隨層數(shù)加高而增加鹽量.近瓶

口表面鋪厚些

”.析出豆腐中的水分.使豆腐塊變硬.

加鹽腌制，以免過早穌爛

作用《

b.抑制微生物生長.避免豆腐塊腐敗

..變質(zhì)

酒：抑制微生物生長.并使腐乳具有獨(dú)特香味

加鹵湯裝瓶

香辛料：調(diào)味、防腐殺菌

將瓶口通過酒精燈的火焰

密封腌制

用膠條將瓶口密封

［過關(guān)練習(xí)］

1.（2018?蘇錫常鎮(zhèn)四市調(diào)研）總狀毛霉和米根霉是常見的霉菌。研究人員將總狀毛霉

和米根霉的抱子懸液分別接種到兩組豆腐切塊上，完成前期發(fā)酵后，分別測(cè)定兩組霉菌產(chǎn)生

的蛋白酶的活力，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，下列有關(guān)敘述正確的是（）

聯(lián)

H

第

茸

$

u(

m、

c

A.總狀毛霉與米根霉都能利用蛋白酶將分解產(chǎn)生的肽和氨基酸分泌到細(xì)胞外

B.總狀毛霉與米根霉接種量與蛋白酶活力呈正相關(guān)

C.相同適宜條件下接種等量的兩種菌，總狀毛霉使豆腐塊中的蛋白質(zhì)減少更多

D.接種量為5CFU/mL時(shí)發(fā)酵制作的腐乳品質(zhì)最好

解析：選C總狀毛霉與米根霉都能將蛋白酶分泌到細(xì)胞外，進(jìn)而將豆腐塊中的蛋白質(zhì)

分解產(chǎn)生肽和氨基酸；據(jù)圖分析，隨著接種量的增加，總狀毛霉與米根霉產(chǎn)生蛋白酶的活性

都是先增加后減弱，并不是一直呈現(xiàn)正相關(guān)；相同適宜條件下接種等量的兩種菌，總狀毛霉

的蛋白酶活性更高，因此使豆腐塊中的蛋白質(zhì)減少更多；圖示只能說明接種量為5CFU/mL

時(shí)，蛋白酶的活性最大，但不能說明發(fā)酵制作的腐乳品質(zhì)最好。

2.（2018?江蘇高考沖刺預(yù)測(cè)）下列關(guān)于“腐乳的制作”實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是（）

A.為防止微生物污染應(yīng)加大用鹽量

B.含水量大于85%的豆腐利于保持濕度，適宜制作腐乳

C.裝壇階段加入料酒可有效防止雜菌污染

D.密封瓶口前瓶口不需要通過火焰滅菌

解析：選C加鹽主要是為了抑制微生物生長，防止豆腐腐敗變質(zhì)，但鹽量過多，會(huì)影

響腐乳的成熟期和口感。豆腐含水量以70%為宜，毛霉為異養(yǎng)需氧型真菌，若含水量過高，

會(huì)影響毛霉的有氧呼吸，豆腐不宜成塊；若含水量過少，則不利于毛霉的生長，并且毛霉的

代謝也離不開水。加料酒為了抑制微生物的生長，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的香味。封瓶時(shí)，

需要將瓶口通過酒精燈的火焰，這樣可以防止雜菌污染。

考向（三）微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和分離

［真題導(dǎo)向］

1.（2016?江蘇高考，多選）漆酶屬于木質(zhì)素降解酶類，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域

有著廣泛用途。如圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過程，相關(guān)敘述正確的是（）

A.生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品

B.篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落

C.在涂布平板上長出的菌落，再通過劃線進(jìn)一步純化

D.斜面培養(yǎng)基中含有大量營養(yǎng)物，可在常溫下長期保存菌株

解析：選BC生活污水中含木質(zhì)素的物質(zhì)相對(duì)較少，產(chǎn)漆酶菌株也較少，不宜作為分

離產(chǎn)漆酶菌株的樣品；產(chǎn)漆酶菌株可降解木質(zhì)素，在篩選培養(yǎng)基中加入木質(zhì)素可篩選產(chǎn)漆酶

的菌株，篩選時(shí)可通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落；在涂布后的平板上生長的菌落可能還有

其他雜菌，可再通過平板劃線法進(jìn)一步純化；對(duì)于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏

的方法，即在一20℃的冷凍箱中保存。

2.（2015?江蘇高考）做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是（）

A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋

B.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上

C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落

D.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上

解析：選D在高壓滅菌的操作過程中，加熱結(jié)束后應(yīng)讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，待壓

力表的壓力降到零時(shí)，打開放氣閥，旋松螺栓，打開蓋子。倒平板時(shí)，用左手將培養(yǎng)皿打開

一條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全取下放到一邊。接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌后應(yīng)在火焰旁冷

卻后，再用其挑取菌落。在微生物的培養(yǎng)中，一般將培養(yǎng)皿倒置，在皿底上用記號(hào)筆做標(biāo)記。

3.（2018?江蘇高考）酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來源。

有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研

究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程，請(qǐng)回答下列

問題:

③平板澆注分離④劃線純化⑤擴(kuò)大培養(yǎng)

（1）配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基

的,及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行滅菌。

（2）取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中將溫度約

（在25℃、50℃或80"C中選擇）的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。

（3）挑取分離平板中長出的單菌落，按步驟④所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有

a.為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌

b.劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落

c.挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量

d.可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株

（4）步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營養(yǎng)和供應(yīng)。

為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋1000倍后，經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色，用25X

16型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上_______色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于

，才能達(dá)到每毫升3義1（/個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。

解析：（D配制培養(yǎng)基時(shí)，進(jìn)行計(jì)算、稱量、溶解、定容后，需先調(diào)pH再分裝到錐形瓶

中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。（2）倒平板時(shí)的培養(yǎng)基溫度約為50℃,冷凝后倒置培養(yǎng)。（3）平板劃

線時(shí)，接種針;接種環(huán)使用前和每次劃線后都需要進(jìn)行灼燒滅菌，以免造成雜菌污染；劃線

時(shí)不能劃破培養(yǎng)基表面，否則不能形成正常菌落；挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)不同的菌落，分

別測(cè)定酵母細(xì)胞中蛋白質(zhì)含量;逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，能篩選出耐受高甲醇的菌株。

（4）酵母菌是兼性厭氧型真菌，在有氧條件下可大量繁殖。酵母擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，需保證充足的

營養(yǎng)和氧氣等條件。由題中信息“經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色”可知，計(jì)數(shù)室中培養(yǎng)液容積實(shí)

際只有0.1+2=0.05（mn?）。設(shè)5個(gè)中方格中無色（活細(xì)胞不能被臺(tái)盼藍(lán)染色）的細(xì)胞數(shù)目為

x個(gè)，則3X1（）9=X+5X25X1000X10004-0.05,解得x=30（個(gè)）。

答案：（l）pH高壓蒸汽（濕熱）（2）50℃（3）a、b、d（4）氧氣無30

［拓知識(shí)］微生物純化方法的比較

方法平板劃線法稀釋涂布平板法

5?(f)

平板劃線法

1mL1mL1ml.1ml.1mL1mL

圖示

!111111

9mL9mL9niL9ml.9ml.9mL

幡羿液幡彝液稀群液稀輯液稀彝液稀籽液

泳布器淆毒潴加01液涂布器灼燒滅厘涂布窗液

稀釋涂布平板法

(1)接種環(huán)的灼燒：

(1)稀釋操作時(shí)，每支試管及其中的9mL

①第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生

水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口

物，避免污染培養(yǎng)物

和移液管應(yīng)在離酒精燈火焰1?2cm處

②之后每次劃線前：殺死殘留菌種，保

(2)涂布平板時(shí)：

證每次劃線菌種來自上次劃線末端

①涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒，

操作③劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污

取出時(shí)讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將

注意染環(huán)境和感染操作者

沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引

事項(xiàng)(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行操

燃

作，以免溫度太高殺死菌種

②不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒

(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域

杯中，以免引燃其中的酒精

相連

③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管

(4)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大

頭不要接觸任何物體

將培養(yǎng)基劃破

優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離既可以計(jì)數(shù)，又可以觀察菌落特征

吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不

缺點(diǎn)不能計(jì)數(shù)

顯著，容易蔓延

適用

適用于好氧菌適用于厭氧菌和兼性厭氧菌

范圍

目的在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖而來的子細(xì)胞群體一一菌落

平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)

培養(yǎng)

基造成污染

［過關(guān)練習(xí)］

1.某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A,研究人員用化合物A、

磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素等配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的

菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()

重復(fù)多次，直至獲得目的菌

A.培養(yǎng)基中加入化合物A作為唯一碳源，目的是為了篩選目的菌

B.實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過程中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，可使目的菌和培養(yǎng)液充分接觸

C.實(shí)驗(yàn)操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是防止外來雜菌污染

I).將固體培養(yǎng)基得到的目的菌重復(fù)多次上述實(shí)驗(yàn)的目的是獲得大量菌種

解析：選D培養(yǎng)基中以化合物A為唯一碳源，可以篩選出能高效降解化合物A的細(xì)菌;

實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過程中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，既可使目的菌和培養(yǎng)液充分接觸，又可以增加培養(yǎng)液中溶氧

量；微生物培養(yǎng)過程中要進(jìn)行無菌操作，防止外來雜菌的污染；將固體培養(yǎng)基得到的目的菌

重復(fù)多次上述實(shí)驗(yàn)是為了純化高效降解化合物A的細(xì)菌。

2.(2017?江蘇高考)苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小

明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)如圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請(qǐng)回答

下列問題：

(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白陳、MHPO,、MgSO,、苯酚和水，其中可作為碳源的有

(2)將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸，以達(dá)到富

集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集，應(yīng)進(jìn)一步,以便于菌落計(jì)數(shù)

與分離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加一

(3)右圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中(填圖中序號(hào))

區(qū)域更易獲得單菌落。

(4)采用比色測(cè)定法(使用苯酚顯色劑)檢測(cè)降解后的廢水中苯酚殘

留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng)，下表中1?5號(hào)比色管的

苯酚濃度應(yīng)分別為。

管號(hào)123456

苯酚濃度(mg/L)1

如果廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋

（填序號(hào)：①5②10③20）倍后，再進(jìn)行比色。

解析：（1）富集培養(yǎng)基中蛋白陳、苯酚都是含碳的有機(jī)物，可作為碳源。（2）欲富集酚降

解菌，隨轉(zhuǎn)接次數(shù)的增加，應(yīng)逐漸增加培養(yǎng)基中苯酚的含量；若接種培養(yǎng)后平板上菌落過于

密集，則應(yīng)進(jìn)一步稀釋后再進(jìn)行涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落計(jì)數(shù)與分離；平板

培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，除含有水、營養(yǎng)物質(zhì)（碳源、氮源、無機(jī)鹽等）外，還需添加瓊脂作為

凝固劑。（3）利用連續(xù)劃線法接種時(shí)，最后的劃線區(qū)域（③）中，菌體的密度較小，容易獲得單

菌落。（4）因系列濃度梯度中6號(hào)比色管中苯酚濃度為1mg/L,故1?5號(hào)比色管中的苯酚

濃度應(yīng)分別為Omg/L、0.2mg/Lx0.4mg/L、0.6mg/L>0.8mg/L；根據(jù)題意,廢水為50mg/L

苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，要使稀釋后的苯酚殘留液濃度介于。?1mg/L,需

將殘留液稀釋20倍左右。

答案：（1）蛋白豚、苯酚（2）增加稀釋涂布凝固劑⑶③（4）0、0.2、0.4、0.6、

0.8③

練麓奧典題精選◎一站通關(guān)（題貴在精而不在多）

一、選擇題

1.（2019屆高三?蘇州調(diào)研）下列有關(guān)微生物發(fā)酵技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.傳統(tǒng)的發(fā)酵過程受技術(shù)條件限制，通常不進(jìn)行無菌操作

B.成品腐乳表面的皮膜是由毛霉等真菌的菌絲形成的，對(duì)人體無害

C.制備果酒、果醋和腐乳時(shí)，都是以建立種群優(yōu)勢(shì)作為發(fā)酵的基本條件

D.果醋的制備可以建立在果酒發(fā)酵的基礎(chǔ)上，也可以直接利用葡萄汁發(fā)酵

解析：選A傳統(tǒng)的發(fā)酵過程受技術(shù)條件限制，通常滅菌不嚴(yán)格，但也進(jìn)行無菌操作。

成品腐乳表面的皮膜是由毛霉等真菌的生長，產(chǎn)生的菌絲進(jìn)入豆腐塊的深層而形成，對(duì)人體

無害。制備果酒、果醋和腐乳時(shí)，建立的優(yōu)勢(shì)種群依次是酹母菌、醋酸菌、毛霉，以此作為

發(fā)酵的基本條件。當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將果汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)氧氣充足、

缺少糖源時(shí)，醋酸菌可以先將酒精變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?，因此果醋的制備可以建?/p>

在果酒發(fā)酵的基礎(chǔ)上，也可以直接利用葡萄汁發(fā)酵。

2.下列有關(guān)制作果酒、果醋和腐乳的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.果酒的制作過程中既涉及有氧呼吸又涉及無氧呼吸

B.果醋發(fā)酵溫度較高，且發(fā)酵過程要特別注意氧氣的供應(yīng)

C.變酸的酒表面的菌膜含醋酸菌，腐乳的“皮”為毛霉菌絲

D.發(fā)酵過程中所有的相關(guān)反應(yīng)都是在微生物的細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的

解析：選D腐乳制作過程中，蛋白質(zhì)和脂肪的水解反應(yīng)發(fā)生在毛霉的細(xì)胞外。

3.（2018?鹽城三模）下列有關(guān)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的敘述，正確的是（）

A.果酒、果醋和腐乳制作中，利用的都是微生物胞內(nèi)酶

B.制作果醋的醋酸菌，屬于嚴(yán)格厭氧的微生物

C.青霉、毛霉、曲霉等均參與了腐乳的發(fā)酵

D.制作果酒、果醋和腐乳所需時(shí)間基本相同

解析：選C果酒、果醋是微生物的代謝產(chǎn)物，需要的酶為胞內(nèi)酶；腐乳制作是利用

毛霉產(chǎn)生的蛋白酶、脂肪酶分解蛋白質(zhì)、脂肪，蛋白酶、脂肪酶是胞外酶。制作果醋需要醋

酸菌，它是一種好氧的微生物。青霉、毛霉、曲霉等真核生物均參與了腐乳的發(fā)酵。制作果

酒的時(shí)間一般為10?12d,制作果醋的時(shí)間一般為7?8d,制作腐乳的時(shí)間稍長。

4.如圖裝置可用于生物技術(shù)實(shí)踐的相關(guān)實(shí)驗(yàn)。下列有關(guān)敘述正b邨5

確的是（）亡|伊

A.制作果酒、果醋或腐乳時(shí)，所需控制的溫度都是相同的Ha墨

甲乙

B.乙裝置可以先用于果酒的制作，后用于果醋的制作

C.用裝置中制作腐乳時(shí)，自下而上隨著豆腐塊加高逐漸減少用鹽量

D.裝置乙中b為排氣口，c為充氣口，可防止空氣中微生物的污染

解析：選B制作果酒、果醋或腐乳時(shí)，控制的溫度分別是18?25℃、30?35℃、15~

18℃：用裝置甲制作腐乳時(shí)，越接近瓶口微生物感染機(jī)會(huì)越多，所以加鹽量應(yīng)增大；裝置

乙中b為充氣口，c為排氣口，排氣口長而彎曲可防止空氣中微生物的污染。

5.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.培養(yǎng)基滅菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌

B.各種微生物培養(yǎng)基的配方中必須包含碳源、氮源、水、無機(jī)鹽及瓊脂等成分

C.純化培養(yǎng)微生物常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法

D.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以選擇培養(yǎng)分解尿素的微生物

解析：選B各種微生物培養(yǎng)基的配方中一般都包含碳源、氮源、水、無機(jī)鹽等，但由

于各種微生物生長特點(diǎn)不同，培養(yǎng)基中添加的營養(yǎng)物質(zhì)也不相同，如以CO2為碳源的自養(yǎng)型

生物，培養(yǎng)基中不必添加碳源，而一些能以反為氮源的微生物，培養(yǎng)基中也不必加氮源；

另外只有固體培養(yǎng)基中才常添加瓊脂做凝固劑。

6.養(yǎng)殖池中存在的有毒物質(zhì)主要是氨及亞硝酸，這兩種物質(zhì)可被硝化細(xì)菌吸收利用。

若要對(duì)養(yǎng)殖池底泥中硝化細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)，則（）

A.需要配制添加一定濃度氨鹽的牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基，以篩選硝化細(xì)菌

B.應(yīng)對(duì)采集底泥使用的工具進(jìn)行滅菌，全部接種過程均需在酒精燈火焰旁進(jìn)行

C.可以采用平板劃線法進(jìn)行計(jì)數(shù)，還需與未接種的空白培養(yǎng)基同時(shí)培養(yǎng)

I）.應(yīng)將培養(yǎng)基置于30℃恒溫下培養(yǎng)12h后，統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基中全部菌落數(shù)

解析：選B牛肉膏蛋白腺本身含有氮源，許多微生物都可以其作為氮源，因此加入牛

肉膏蛋白陳無法篩選硝化細(xì)菌；平板劃線法可以分離菌種，但不能用于計(jì)數(shù)；培養(yǎng)過程中應(yīng)

每隔一段時(shí)間觀察，直到菌落穩(wěn)定開始計(jì)數(shù)。

7.（2019屆高三?南通調(diào)研）下列檢測(cè)某熟制食品中大腸桿菌是否超標(biāo)的實(shí)驗(yàn)操作，不

合理的是（）

A.待檢測(cè)食品需要經(jīng)過滅菌操作后取樣檢測(cè)

B.應(yīng)設(shè)置未接種的培養(yǎng)基，作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)照

C.用稀釋涂布平板法接種、計(jì)數(shù)大腸桿菌的活菌數(shù)

1）.接種后將培養(yǎng)皿倒置并在適宜溫度下培養(yǎng)

解析：選A待檢測(cè)食品滅菌后會(huì)將大腸桿菌殺死，無法檢測(cè)大腸桿菌是否超標(biāo)；應(yīng)

設(shè)置未接種的培養(yǎng)基作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)照；應(yīng)用稀釋涂布平板法接種、計(jì)數(shù)大腸桿菌的活菌數(shù)；

接種后應(yīng)該將培養(yǎng)皿倒置，并在適宜溫度下培養(yǎng)。

8.在分離、純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)中，劃線接種（甲）、培養(yǎng)結(jié)果（乙）

如右圖。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.接種前應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

B.連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落

C.接種過程中至少需要對(duì)接種環(huán)灼燒5次

D.甲中a區(qū)域?yàn)閯澗€的起始位置

解析：選D在分離、純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)中，接種前應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌；連

續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落；接種過程中，對(duì)接種環(huán)在接種前要灼燒，每次劃

線后均需灼燒，因此至少需要灼燒5次；據(jù)乙中菌落分布特點(diǎn)可推知甲中d區(qū)域?yàn)閯澗€的起

始位置。

9.（多選）下列有關(guān)“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.高壓蒸汽滅菌鍋加蓋時(shí)應(yīng)按順時(shí)針方向依次旋緊螺栓

B.選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類

C.待培養(yǎng)基冷卻至室溫時(shí)倒平板

D.統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)量時(shí)，接種方法可采用稀釋涂布平板法

解析：選ABC高壓蒸汽滅菌鍋加蓋時(shí)，將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)，

再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致；鑒別培養(yǎng)基可以鑒定培養(yǎng)

基中某種微生物的種類；待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)倒平板；稀釋涂布平板法可用于活菌

數(shù)量的計(jì)數(shù)。

10.（2017?南通二模，多選）下列有關(guān)果酒、果醋和腐乳制作的比較，正確的是（）

A.主要菌種不一定是真核生物

B.溫度控制必須保證微生物繁殖最快

C.發(fā)酵過程會(huì)釋放熱量

D.可通過色、香、味等對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)價(jià)

解析：選ACD果醋制作利用的菌種是醋酸菌，是原核生物；發(fā)酵溫度和微生物繁殖最

快的溫度不一定相同，如腐乳制作的發(fā)酵溫度為15?18℃,此溫度并不是毛霉繁殖最快的

溫度；三種發(fā)酵過程中，菌種都會(huì)進(jìn)行細(xì)胞呼吸釋放熱量。

二、非選擇題

11.（2018-江蘇六市二模）圖1表示研究人員為篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株進(jìn)行的相關(guān)實(shí)驗(yàn)

流程，其中透明圈是微生物在固體培養(yǎng)基上消耗特定營養(yǎng)物質(zhì)形成的。請(qǐng)回答下列問題：

⑴本實(shí)驗(yàn)中，選擇蘑菇培養(yǎng)基質(zhì)作為纖維素酶高產(chǎn)菌株的來源，這是因?yàn)?/p>

（2）篩選用的培養(yǎng)基應(yīng)以作為唯一碳源，并在配制培養(yǎng)基時(shí)加入

一作為凝固劑。篩選時(shí)應(yīng)選擇"d較大的菌株，因?yàn)檫@一指標(biāo)值越大說明一

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

（3）圖2、圖3是研究纖維素前的最適溫度和熱穩(wěn)定性的結(jié)果。

①研究纖維素酶的熱穩(wěn)定性時(shí)，首先將纖維素酶液置于35?65℃的不同溫度條件下保

溫2h,再取上述不同溫度處理的纖維素酶液和,并在℃

下測(cè)定纖維素酶的催化速率，計(jì)算酶活性殘留率。

②生產(chǎn)中使用該纖維素酶時(shí)，最好將溫度控制在40℃左右，依據(jù)是—

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

解析：（1）蘑菇培養(yǎng)基質(zhì)中富含纖維素，會(huì)聚集較多的纖維素分解菌，因此本實(shí)驗(yàn)中選

擇蘑菇培養(yǎng)基質(zhì)作為纖維素醐高產(chǎn)菌株的來源。（2）篩選纖維素分解菌，用的培養(yǎng)基應(yīng)以纖

維素作為唯一碳源，這樣纖維素分解菌能正常生長，其他微生物則不能生長。篩選用的培養(yǎng)

基是固體培養(yǎng)基，應(yīng)加入瓊脂作為凝固劑（絕大多數(shù)微生物不能利用瓊脂）。篩選時(shí)應(yīng)選擇

較大的菌株，因?yàn)檫@一指標(biāo)值越大說明單個(gè)菌體產(chǎn)生的纖維素酶的活性越強(qiáng)。（3）①根

據(jù)對(duì)照實(shí)驗(yàn)的基本原則，應(yīng)選擇上述不同溫度處理的纖維素酶液和經(jīng)相應(yīng)保溫處理的纖維素

液，又據(jù)圖2可知，在50℃酶的活性最高，因此在50"C下測(cè)定纖維素酶的催化速率，計(jì)

算酶活性殘留率。②據(jù)圖3可知，在40℃左右，纖維素酶的熱穩(wěn)定性高，作用時(shí)間持久，

且酶活性相對(duì)較高，因此生產(chǎn)中使用該纖維素酶時(shí)，最好將溫度控制在40℃左右。

答案：（1）蘑菇培養(yǎng)基質(zhì)中富含纖維素，會(huì)聚集較多的纖維素分解菌（2）纖維素瓊脂

單個(gè)菌體產(chǎn)生的纖維素酶的活性越強(qiáng)（3）①經(jīng)相應(yīng)保溫處理的纖維素液50②該溫度

下，纖維素酶的熱穩(wěn)定性高，作用時(shí)間持久，且酶活性相對(duì)較高

12.（2015?江蘇高考）人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動(dòng)物的胃，可用來發(fā)酵處理秸稈，提

高秸稈的營養(yǎng)價(jià)值。為了增強(qiáng)發(fā)酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素醐高產(chǎn)菌株，并對(duì)其

降解纖維素能力進(jìn)行了研究。請(qǐng)回答下列問題：

（1）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項(xiàng)不需要的是________（填序號(hào)）。

①酒精燈②培養(yǎng)皿③顯微鏡④無菌水

（2）在涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是

____________________________________________________________________________________________________________________O

（3）向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時(shí)，若試管口粘附有培養(yǎng)基，需要用酒精棉球擦凈的

原因是_____________________________