基因工程操作程序

（補充知識）基因的結(jié)構1、原核細胞的基因結(jié)構非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游與RNA聚合酶結(jié)合位點啟動子①RNA聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結(jié)合位點，并與其結(jié)合。②轉(zhuǎn)錄開始后，RNA聚合酶沿DNA分子移動，并以DNA分子的一條鏈為模板合成RNA。③轉(zhuǎn)錄完畢后，RNA鏈釋放出來，緊接著RNA聚合酶也從DNA模板鏈上脫落下來。原核細胞的基因結(jié)構能轉(zhuǎn)錄相應的信使RNA，能編碼蛋白質(zhì)編碼區(qū)非編碼區(qū)①不能轉(zhuǎn)錄為信使RNA，不能編碼蛋白質(zhì)。②有調(diào)控遺傳信息表達的核苷酸序列，在該序列中，最重要的是位于編碼區(qū)上游的RNA聚合酶結(jié)合位點。啟動子12、真核細胞的基因結(jié)構編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位點內(nèi)含子外顯子啟動子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子內(nèi)含子：外顯子：真核細胞的基因結(jié)構編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列有調(diào)控作用的核苷酸序列，包括位于編碼區(qū)上游的RNA聚合酶結(jié)合位點。非編碼序列：包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子21.2基因工程的基本操作程序為什么要獲得目的基因為什么要把目的基因與載體結(jié)合受體細胞是指什么為什么要進行檢測3基因文庫的構建模式圖通過對受體菌的培養(yǎng)而儲存基因4由mRNA反轉(zhuǎn)錄形成cDNAmRNADNA單鏈DNA單鏈RNA–DNA雜交分子RNA–DNA雜交分子單鏈DNA單鏈DNA雙鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄使RNA降解復制核酸酶H??形成氫鍵5第一步：獲取目的基因

方法：

1.從基因文庫中獲取目的基因。2.利用PCR技術合成DNA

PCR:聚合酶鏈式反應.是以DNA變性、復制的某些特性為原理設計的.前提條件是必須對目的基因有一定的了解，需要設計引物。

6PCR原理圖

7PCR的過程（1）以DNA片段作模板，在90℃高溫下，分開成為單鏈DNA。

（2）以DNA小段寡聚核苷酸做引物，在50℃的溫度下，找到可以配對的正鏈和負鏈，形成互補結(jié)合（3）在70℃高溫下，合成一條與模板DNA單鏈（正鏈或負鏈）互補結(jié)合的DNA新鏈。

（4）以上三個步驟周而復始，即反應體系的溫度從90oC-50oC-75oC，目的基因的量不斷增加反應體系中經(jīng)歷：變性——淬火——合成——重復。結(jié)果：目的基因的量成指數(shù)形式擴增（2n)高溫的作用是？引物是怎樣獲得的？四種脫氧核苷三磷酸（4XdNTP)酶高溫DNA聚合酶（Taq酶），原料8第二步：基因表達載體的構建核心目的基因與載體結(jié)合