細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的技術(shù)方法公眾微信號(hào)詳解

細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的技術(shù)方法公眾微信號(hào)詳解演示文稿本文檔共56頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分（優(yōu)選）細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的技術(shù)方法公眾微信號(hào)本文檔共56頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分蛋白激酶磷酸化及其活性測(cè)定本文檔共56頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分蛋白激酶磷酸化的檢測(cè)裂解培養(yǎng)的細(xì)胞獲得裂解上清以免疫共沉淀法獲得蛋白激酶SDS再加入蛋白激酶磷酸化特異性抗體以PhosphoAb-HRPWestern化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白激酶的磷酸化程度。本文檔共56頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分經(jīng)典蛋白激酶活性分析實(shí)驗(yàn)流程以免疫共沉淀法獲得蛋白激酶加入該激酶底物和32-ATP，激酶使底物磷酸化放射自顯影，確定磷酸化條帶本文檔共56頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分以免疫共沉淀法獲得蛋白激酶加入該激酶底物，激酶使底物磷酸化再加入底物磷酸化特異性抗體以PhosphoAb-HRPWestern化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒測(cè)定底物的磷酸化程度，進(jìn)而推出蛋白激酶活性非放射性蛋白激酶活性分析實(shí)驗(yàn)流程本文檔共56頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分較傳統(tǒng)激酶活性測(cè)定方法的優(yōu)點(diǎn)無需接觸放射性物質(zhì)敏感度高：可以檢測(cè)到每個(gè)磷酸化分子特異性：利用磷酸化特異性抗體可以進(jìn)行位點(diǎn)特異性分析信噪比高低背景系統(tǒng)完整：提供一整套直接從細(xì)胞裂解液中測(cè)試酶活的試劑節(jié)約時(shí)間：由幾天降到幾分鐘本文檔共56頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分02468101214051020306090120Time(min)RelativekinaseactivityDynamicprocessesofp38activationbyLPSinRAWcells本文檔共56頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分EffectofindividualMAPKpathwaysonPRAKactivityinintactcellsMKK7(D)GST-ATF2GST-ELK1MKK1(E)MKK6(E)ControlHSP27PRAK本文檔共56頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分ControlAniso.ArseniteTNF-80kDa-47kDa-39kDa-80kDa-47kDakDa97.4-68.0-43.9-29.0-18.4-14.3-ControlAniso.ArseniteTNFABThemajorkinasesofp38andp38本文檔共56頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分P38MAPKinasePathway本文檔共56頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分蛋白磷酸化位點(diǎn)分析及其功能鑒定本文檔共56頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分PhosphopeptidemapofHSP27phosphorylatedbyPRAKinvitro

ChromatographyElectrophoresispH1.9+MAPKAPK2ChromatographyElectrophoresispH1.9+PRAKChromatographyElectrophoresispH1.9MIX+本文檔共56頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分++++----+-HSP27p38GST-PRAK(93A)GST-PRAK(WT)GST-PRAK(186A)GST-PRAK(212A214A)GST-PRAK(182A)GST-PRAK(WT)GST-PRAK(182D)GST-PRAK(182D212D)+-+-+-FoldofActivation05101520GST-PRAK(182A)GST-PRAK(182D)GST-PRAK(WT)GST-PRAK(93A)GST-PRAK(186A)GST-PRAK(182D212D)GST-PRAK(212A214A)BAElectrophoresispH8.9++p38-PRAK(182A)+p38-PRAK(182D)p38-PRAK(wt)T182istheregulatoryphosphorylationsiteofPRAK本文檔共56頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分DNA重組技術(shù)的應(yīng)用活性誘變體無活性誘變體結(jié)構(gòu)與功能的研究本文檔共56頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分PCRprimerPCRprimer本文檔共56頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分本文檔共56頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分JNK2JNK3JNK1p38p38p38p38ERK1ERK2ERK5TherelationshipbetweenthemembersofMAPKfamily本文檔共56頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分MAPK

DuralPhosphorylationSitesL-12Length

**hp38

DFGLARHTDDEMTGYVATRWYRAPE 25hP38b

DFGLARQADEEMTGYVATRWYRAPE 25hp38g

DFGLARQADSEMTGYVVTRWYRAPE 25hp38d

DFGLARHADAEMTGYVVTRWYRAPE 25hJNK1

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DFGLARIADPEHDHTGFLTEYVATRWYRAPE 31hERK2

DFGLARVADPDHDHTGFLTEYVATRWYRAPE 31hBMK1DFGMARGLCTSPAEHQYFMTEYVATRWYRAPE 32YHOG1

DFGLARIQDPQMTGYVSTRWYRAPE 25YSMK1

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DFGLARCLASSSDSRETLVGFMTEYVATRWYRAPE 35YFUS3

DFGLARIIDESAADNSEPTGQQSGMTEYVATRWYRAPE 38domainVIIVIIILoop-12(T-Loop)sequenceofMAPkinases本文檔共56頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分Constructionofp38loop-12toERKlikestructure

p38...DFGLARHTDDEMTGYVATRWYRAPE...p38(E)...DFGLARHTDDEMTEYVATRWYRAPE...p38(6+)...DFGLARHTDDEHDHTGFMTGYVATRWYRAPE...p38(6+E)...DFGLARHTDDEHDHTGFMTEYVATRWYRAPE...p38(VAP)...DFGLARVADPEMTGYVATRWYRAPE...p38(DL)...DFGLARHTDDDLTGYVATRWYRAPE...p38(VAPD6+LE)...DFGLARVADPDHDHTGFLTEYVATRWYRAPE...ERK2...DFGLARVADPDHDHTGFLTEYVATRWYRAPE...本文檔共56頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分MAPKMKKSubstratesLoop-12isakeystructuretodeterminetheselectionofsubstrate(...TXY...)本文檔共56頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分病毒技術(shù)對(duì)于揭示細(xì)胞信號(hào)通路的作用腺病毒逆轉(zhuǎn)錄病毒本文檔共56頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分本文檔共56頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分本文檔共56頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分細(xì)胞信號(hào)分子特異性抑制劑的應(yīng)用本文檔共56頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分幾種MAPK通路抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖:ONH2OCH3OPD98059HNNSOFCH3NOHNFNHNSB202190SB203580CH=CHCH=CHOHOCH3OHOCH3OOCurcumin本文檔共56頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分EffectsofSB203580andPD98059onendogenousPRAKactivityHSP27TNF+++---------Arsenite+++---------PMA+++---------SB203580_---+--+---+PD98059----+--+--+-本文檔共56頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分細(xì)胞信號(hào)分子的熒光標(biāo)記本文檔共56頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分LPSEGFControl本文檔共56頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分p38p38p38p38本文檔共56頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分p38p38p38p38本文檔共56頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分LPS、UV刺激心肌細(xì)胞共聚焦顯微鏡大體掃描LPSControlUV本文檔共56頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分本文檔共56頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分細(xì)胞信號(hào)分子的三維結(jié)構(gòu)分析本文檔共56頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)分析對(duì)于揭示信號(hào)分子的功能的作用本文檔共56頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分本文檔共56頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的研究本文檔共56頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分PHTHSH3SH2KinaseBtkSH3SH2KinaseSrc蛋白激酶結(jié)構(gòu)域本文檔共56頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分1、蛋白質(zhì)結(jié)合實(shí)驗(yàn)本文檔共56頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分2、免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)本文檔共56頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分2、FRET和BRET本文檔共56頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分與信號(hào)分子相互作用蛋白質(zhì)分子的相互作用本文檔共56頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分酵母雙雜合系統(tǒng)本文檔共56頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分IdentificationofMEF2Casasubstrateforp38本文檔共56頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分第一步附著第二步激活第三步緊密粘附第四步滲出ECEC：趨化因子受體：PECAM：白細(xì)胞整合素：選擇素：選擇素配體：白細(xì)胞激活物：Ig家族成員圖12.1白細(xì)胞的滲出過程

本文檔共56頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分噬菌體展示技術(shù)本文檔共56頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分報(bào)告基因技術(shù)研究細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路通過轉(zhuǎn)錄因子對(duì)基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響。本文檔共56頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分本文檔共56頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分051015RelativeluciferaseactivityControlLPSEGFLPS+FHPIp38isinvolvedintheenhancementofTNF-promotertransactivity本文檔共56頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分Inductionofc-JunthroughMEF2Cphosphorylationbyp38本文檔共56頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分蛋白質(zhì)與核酸相互作用技術(shù)研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)尤其是轉(zhuǎn)錄因子與特定核酸序列的相互作用。本文檔共56頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分EMSA本文檔共56頁；當(dāng)前第52頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子的干預(yù)技術(shù)研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)尤其是轉(zhuǎn)錄因子與特定核酸序列的相互作用。本文檔共56頁；當(dāng)前第53頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分反義核酸技術(shù)的應(yīng)用本文檔共56頁；當(dāng)前第54頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分RNAi本文檔共56頁；當(dāng)前第55頁；編輯于星期日\22點(diǎn)16分RNAiFigure1.Effectsofmex-3RNAinterferenceonlevelsoftheendogenousmRNA.NomarskiDICmicr