實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物質(zhì)量控制演示文稿

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物質(zhì)量控制演示文稿本文檔共48頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物質(zhì)量控制本文檔共48頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分國家標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)等級(jí)種類飼養(yǎng)條件四級(jí)無菌動(dòng)物GermfreeanimalGF隔離系統(tǒng)Isolationsystem四級(jí)悉生動(dòng)物GnotobioticsanimalGN隔離系統(tǒng)Isolationsystem三級(jí)無特定病原體動(dòng)物SpecificpathogenfreeanimalSPF屏障系統(tǒng)Barriersystem二級(jí)清潔動(dòng)物CleananimalCL屏障系統(tǒng)Barriersystem一級(jí)普通動(dòng)物ConventionalanimalCV開放系統(tǒng)Opensystem本文檔共48頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分各種動(dòng)物國家標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)物種分級(jí)小鼠、大鼠CL、SPF、GF地鼠、豚鼠、兔CV、CL、SPF、GF犬、猴CV、SPF本文檔共48頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分本文檔共48頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分第二節(jié)普通動(dòng)物一、概念定義（conventionalanimalCV）：不攜帶人獸共患病病原和動(dòng)物烈性傳染病病原的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。特點(diǎn)：1、微生物控制要求最低。2、生理學(xué)特性：健康的外貌，正常的飲食，眼角、鼻腔無分泌物附著，尸檢無眼觀病灶。本文檔共48頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分二、人獸共患病病毒性疾病疾病病原媒介動(dòng)物人類臨床癥狀傳染途徑猴皰疹病毒感染(B-Virusinfection)cercopithecineHerpesvirusType1獼猴類肌痛、發(fā)熱、頭痛；迅速發(fā)展的上行性麻痹；感覺異常、復(fù)視、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、潴尿、抽搐、吞咽困難，直至死亡唾液(咬傷)、抓傷馬爾堡病毒癥

(Marburg-Viresdisease)Marburg-Virus

非洲綠猴、

肌痛、發(fā)熱、頭痛、器官壞死、出血性休克、眼結(jié)膜溢血、惡心、嘔吐、嚴(yán)重下痢、白細(xì)胞減少，急性死亡接觸、空氣傳染；人類之間可經(jīng)由血液、分泌物或精液傳染

痘病毒癥

(PoxMrusdisease)Poxvirus其他靈長類

類似天花癥狀，如發(fā)熱、皮疹、頭痛、咽喉痛、虛脫、偶有腹痛，嚴(yán)重致死接觸傳染或呼吸道感染猴痘(Monkeypox)Poxvirus獼猴類

眼瞼、臉部、身體或生殖器有局部的卵圓形或圓形隆起紅斑接觸傳染本文檔共48頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分續(xù)表疾病病原媒介動(dòng)物人類臨床癥狀傳染途徑

麻疹(Measles；Rubeola)Paramyxovirus

自然宿主為人群，靈長類患病后可感染人類發(fā)熱、結(jié)膜炎、鼻炎、咳嗽、有紅暈小白點(diǎn)于頰部黏膜，在臉部及其他部位出現(xiàn)皮疹空氣傳染、呼吸道分泌物接觸能傳染甲型肝炎(HepatitisA)HepatitisAvirus

黑猩猩、械猴、石蟹獼猴、梟猴

發(fā)熱、身體不適、厭食、惡心、腹部不適、黃疸糞便排毒、經(jīng)口或胃腸道外途徑感染出血熱(Koreanhemorrhagicfever)

HantaanVirus

大鼠、小鼠肌痛、咳嗽，發(fā)熱、腹瀉、出血、蛋白尿、腎臟損害，嚴(yán)重致死吸入感染、嚙齒類動(dòng)物咬傷、傷口污染淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染癥(Lyphocyticchoriomeningitisvirusinfection)

Lyphocyticchoriomeningitisvirus

小鼠、倉鼠類似流行性感冒的癥狀，頭痛、肌痛、發(fā)熱、惡心、嘔吐、喉痛、畏光。接觸感染(接觸小鼠糞便和尿液)；吸入；咬傷，或由節(jié)肢動(dòng)物如蚊子、蟑螂傳播狂犬病

(Rabies)Rhabdovirus

所有哺乳類頭痛、肌痛、發(fā)熱、恐水、狂妄、抽搐、昏厥、死亡

咬傷、皮膚傷口或黏膜感染含狂犬病毒的唾液

本文檔共48頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分細(xì)菌性疾病

疾病病原媒介動(dòng)物人類臨床癥狀傳染途徑全身性感染(Systemicinfections)

布氏桿菌病

(Brucellosis)犬BrucdlaCanis、豬Brucellasuis

犬、牛、豬、羊發(fā)熱、頭痛、惡心、體重減輕。有可能發(fā)生菌血癥，睪丸炎、不育等由接觸感染，可經(jīng)口、皮膚、呼吸道、尿液、黏膜感染鉤端螺旋體病(Leptospirosis)Leptospirosisinterro-gans各種脊椎動(dòng)物的哺乳類、兩棲類、爬行類

精神萎靡、體重減輕、嘔吐、下痢、發(fā)熱、黃疸、突發(fā)性死亡接觸感染動(dòng)物的尿液，由創(chuàng)傷、皮膚或口腔感染鼠疫(Plague)Yersinia(Pasteurella)pestis

鼠類、貓、犬、兔、山羊

淋巴結(jié)型鼠疫：發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大與發(fā)炎?；撔褪笠撸喝硇杂绕涫欠巍⒛X膜化膿由蚤傳染。另外，接觸受感染的動(dòng)物，或吸入帶菌的空氣感染。皮膚傷口或黏膜亦可感染鸚鵡熱

(Psittacosis)Chlamydiapsittaci

多種鳥類(鸚鵡科、火雞、鴿、鴨等)

呈急性或隱性感染，包括發(fā)熱、厭食、肌痛、干咳。與帶病原的滲出物、分泌物、排泄物接觸傳染，或經(jīng)呼吸道感染鼠咬熱(Rat-BiteFever)Streptobacillusmonili-fonnisspirillumminus

大鼠等嚙齒類

發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大、發(fā)抖、頭痛、肌痛

被帶菌的大鼠、小鼠、犬、貓咬傷，由空氣、灰塵或飲用污染的牛乳感染

本文檔共48頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分續(xù)表疾病病原媒介動(dòng)物人類臨床癥狀傳染途徑呼吸道感染(Respiratorylnfections)結(jié)核病(Tuberculosis)Mycobacteriumtu-berculosis犬、貓、猴

咳嗽、生痰、咳血、體重減輕、無力疲倦、發(fā)熱、發(fā)冷、惡病質(zhì)

吸入傳染，或經(jīng)口腔、傷口及消化道感染

腸道感染

(Entericlnfections)沙門氏菌病

(Salmonellosis)Salmonellatyphimu-riumS．enteritidis鼠類、犬、貓、靈長類急性腸胃炎，腹痛、腹瀉、惡心、發(fā)熱、厭食經(jīng)由食物、飲水感染

志賀氏菌病

(Shigellosis)S．flexneri，S．Sonnei，及S．dysenteriae

豚鼠、鼠類、犬、靈長類

急性下痢、發(fā)熱、惡心、有時(shí)伴有嘔吐、先急后重、痛經(jīng)與毒血癥

接觸或口腔感染

腸道耶氏癥

(EntericYersiniosis)YersiniaEnterocolitica犬、貓、豚鼠、兔、靈長類發(fā)熱、下痢、腹痛。后遺癥有關(guān)節(jié)炎，虹膜炎、皮膚潰瘍、肝脾膿腫

接觸感染動(dòng)物或其糞便，亦可經(jīng)口感染

本文檔共48頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分三、動(dòng)物烈性傳染病疾病病原癥狀傳播方式控制小鼠脫腳病(ectromelia)Mousepoxvirus腳、尾、鼻出現(xiàn)皮疹和潰瘍，嚴(yán)重出現(xiàn)尾壞死脫落。皮膚傷口、呼吸道、消化道兔出血癥RabbithemorrhagicdiseaseRabbithemorrhagicdiseasevirus本文檔共48頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分第三節(jié)清潔級(jí)動(dòng)物與無特定病原體動(dòng)物一、概念Cleananimal:

除普通動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶對(duì)動(dòng)物危害大和對(duì)科學(xué)研究干擾大的病原。來源于SPF動(dòng)物或剖腹產(chǎn)動(dòng)物。血清病毒抗體檢測可檢測出一定滴度的抗體，病理切片應(yīng)無病變。小鼠病原菌應(yīng)排除10種，病毒5種；大鼠病原菌應(yīng)排除10種，病毒2種。本文檔共48頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分Specificpathogenfree(SPF)animal:

指動(dòng)物體內(nèi)無特定的微生物、寄生蟲存在，但帶有非特定的微生物、寄生蟲的動(dòng)物。主要指不攜帶潛在感染、條件致病和對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原。來源于剖腹產(chǎn)動(dòng)物。小鼠病原菌應(yīng)排除16種，病毒11種；大鼠病原菌應(yīng)排除16種，病毒7種。本文檔共48頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分二、應(yīng)用CL動(dòng)物國際上認(rèn)為僅適合短期或部分科研實(shí)驗(yàn)；我國認(rèn)為適用于大多數(shù)科研實(shí)驗(yàn)，可用于生物醫(yī)學(xué)研究的各領(lǐng)域。SPF動(dòng)物適用于所有科研實(shí)驗(yàn)，是目前國際標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。本文檔共48頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分本文檔共48頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分三、微生物、寄生蟲潛在感染對(duì)實(shí)驗(yàn)研究的干擾實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒對(duì)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)的干擾鼠痘病毒實(shí)驗(yàn)性結(jié)核、X射線、化學(xué)毒素、組織移植、腫瘤、運(yùn)輸可使隱性感染病毒激活。大量內(nèi)毒素或切除脾臟可改變吞噬細(xì)胞功能，而增加小鼠對(duì)病毒的易感性。本文檔共48頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分仙臺(tái)病毒飼養(yǎng)條件惡化、氣溫驟變或呼吸道細(xì)菌感染，可導(dǎo)致呼吸道疾病流行。嚴(yán)重影響體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答：抑制大鼠淋巴細(xì)胞對(duì)綿羊紅細(xì)胞的抗體應(yīng)答。減弱植物血凝素、刀豆素對(duì)淋巴細(xì)胞的促有絲分裂。致瘤作用的干擾：感染后的組織學(xué)改變酷似浸潤性肺癌；對(duì)化學(xué)致癌作用具有很強(qiáng)的影響。生殖影響：妊娠4-5天感染，胚胎被吸收；11-12天感染，妊娠期延長，新生鼠死亡率升高。本文檔共48頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分小鼠肝炎病毒在應(yīng)激條件下，引起小鼠致死性肝炎、腦炎、腸炎改變機(jī)體各種免疫應(yīng)答參數(shù)：降低血清免疫球蛋白水平；影響吞噬細(xì)胞數(shù)目。改變酶系統(tǒng)：增高或降低一些肝臟的酶活性。本文檔共48頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分乳酸脫氫酶病毒污染生物材料和移植腫瘤，影響機(jī)體免疫。嚙齒類動(dòng)物病毒對(duì)生物材料、細(xì)胞系及可移植腫瘤的污染是一個(gè)不容忽視的問題。抑制細(xì)胞免疫應(yīng)答，延緩?fù)N異體排斥，抑制移植物對(duì)宿主的反應(yīng)。對(duì)腫瘤研究的影響：病毒慢性感染，抑制或延緩腫瘤的形成。對(duì)酶系統(tǒng)：小鼠感染后，一些血清酶活性升高。本文檔共48頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分本文檔共48頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌對(duì)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)的干擾動(dòng)物致病菌鼠棒狀桿菌、泰澤氏菌、鼠肺炎霉形體可引起動(dòng)物嚴(yán)重疾病，使實(shí)驗(yàn)中斷。條件致病菌綠膿桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、葡萄球菌在某些誘因作用下，機(jī)體抵抗力下降，導(dǎo)致動(dòng)物疾病發(fā)生，干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。發(fā)病誘因包括免疫抑制劑、射線、營養(yǎng)失調(diào)、潮濕、擁擠、氨濃度過高、實(shí)驗(yàn)處理等一切使動(dòng)物處于應(yīng)激狀態(tài)的因素。耐受過感染的長期帶菌者，在實(shí)驗(yàn)中受試驗(yàn)因素刺激使動(dòng)物發(fā)生不規(guī)律死亡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。本文檔共48頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分正常菌群正常菌群受內(nèi)外環(huán)境變化發(fā)生菌群失調(diào)，將產(chǎn)生數(shù)量和位置的改變，由非致病菌變?yōu)橹虏【?。真菌感染?duì)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)的干擾病原真菌大多為人獸共患病原，病原性弱，為慢性過程，以慢性增生性炎癥為主。真菌孢子飛揚(yáng)，污染環(huán)境，威脅動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)、飼養(yǎng)人員。本文檔共48頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分寄生蟲感染對(duì)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)的干擾掠奪宿主的營養(yǎng)因種類、數(shù)量、寄生部位不同，對(duì)動(dòng)物影響不同?；紫x寄生小腸，以半消化物質(zhì)為食，導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)育緩慢、體重下降營養(yǎng)不良。螨皮下吸血，鉤蟲移位吸血導(dǎo)致動(dòng)物慢性貧血。體表寄生蟲對(duì)宿主的干擾

虱、螨吸血的同時(shí)分泌有毒素的唾液，刺激宿主神經(jīng)末梢產(chǎn)生騷癢。本文檔共48頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分對(duì)宿主產(chǎn)生機(jī)械損傷蟲體移行可對(duì)組織、臟器造成損傷?；紫x幼蟲移行，損傷腸壁、肺毛細(xì)血管和肺泡壁。腸道中，與粘液混合形成栓塞，引起腸梗阻或破裂。產(chǎn)生毒性作用

即寄生蟲分泌物、排泄物的毒性。如肝片吸蟲導(dǎo)致膽管纖維變性，肝臟萎縮硬化。對(duì)生理、生化、免疫的影響本文檔共48頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分一、概念悉生生物學(xué)(gnotobiology)：

1885年pasteur認(rèn)為宿主動(dòng)物沒有腸道菌群參與，生命難以維持。無菌動(dòng)物的問世，證明腸道菌群的存在，并非完全是哺乳動(dòng)物生存所必需。悉生生物學(xué)是以無菌隔離技術(shù)提供的各種動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身以及各種動(dòng)物與微生物之間相互依存和制約關(guān)系的一門綜合科學(xué)。第四節(jié)無菌動(dòng)物與悉生動(dòng)物本文檔共48頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分無菌動(dòng)物（germfreeanimalGF）：指用現(xiàn)有檢測技術(shù)在動(dòng)物體內(nèi)外的任何部位均檢不出任何活的微生物和寄生蟲的動(dòng)物。來源于剖腹產(chǎn)或無菌卵孵化，飼養(yǎng)于隔離系統(tǒng)中。悉生動(dòng)物(gnotobioticanimalGN)：或稱已知菌動(dòng)物，廣義上把無菌動(dòng)物、已知菌動(dòng)物、無特定病原體動(dòng)物統(tǒng)稱悉生動(dòng)物；狹義上指已知菌動(dòng)物。本文檔共48頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分二、無菌動(dòng)物的特點(diǎn)形態(tài)學(xué)改變消化系統(tǒng):盲腸膨大，腸壁菲薄，易發(fā)生盲腸扭轉(zhuǎn)，導(dǎo)致破裂。循環(huán)系統(tǒng)：心臟變小。免疫系統(tǒng)：胸腺上皮細(xì)胞變大，胞漿泡狀結(jié)構(gòu)和溶酶體變小。生理學(xué)改變免疫功能：免疫應(yīng)答慢，過敏反應(yīng)、對(duì)異體移植物的排斥反應(yīng)以及自身免疫現(xiàn)象消失或減弱。對(duì)微生物感染非常敏感。生長率：豚鼠、兔生長率降低，大、小鼠改變不大。代謝：水分代謝周期延長，腸管對(duì)水的吸收率低。營養(yǎng)：體內(nèi)不能合成VitB、VitK。抗輻射能力：增強(qiáng)。壽命：長于普通動(dòng)物。本文檔共48頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分本文檔共48頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分本文檔共48頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分本文檔共48頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分本文檔共48頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分本文檔共48頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分三、悉生動(dòng)物的特點(diǎn)GN動(dòng)物是動(dòng)物與微生物的共生復(fù)合體。腸道存在能合成維生素和氨基酸的細(xì)菌，不會(huì)出現(xiàn)維生素缺乏癥。生活力、抵抗力明顯增強(qiáng)，易于飼養(yǎng)。本文檔共48頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分四、GF動(dòng)物的應(yīng)用微生物研究GF是研究微生物與宿主相互作用，即微生生物與宏生生物相互關(guān)系，微生物與微生物的共生與拮(jie)抗關(guān)系的最佳動(dòng)物?？诜魜y弧菌使幼齡GF豚鼠死亡，口服前感染梭狀芽胞桿菌，動(dòng)物不發(fā)生死亡；口服福氏痢疾桿菌使幼齡GF豚鼠死亡，口服前接種大腸桿菌，動(dòng)物不發(fā)生死亡。炎癥涉及細(xì)菌感染的多因素作用，GF可把多因素變成單因素，整體反應(yīng)變成局部反應(yīng)。本文檔共48頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分本文檔共48頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分老年學(xué)研究

GF大鼠壽命比CV大鼠延長1/3。雌性GF壽命比雄性動(dòng)物短，雌性CV動(dòng)物比雄性長。

2-3年的GF大鼠臟器均未呈現(xiàn)同齡CV大鼠所具有的各種衰老變化。本文檔共48頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分腫瘤學(xué)研究在致癌因素中，微生物引起癌變的比重較大。有些病毒可通過胎盤傳播。GF動(dòng)物口服蘇鐵素不出現(xiàn)腫瘤，但CV動(dòng)物口服蘇鐵素出現(xiàn)腫瘤。本文檔共48頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分第五節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物及寄生蟲監(jiān)測監(jiān)測程序：1.微生物檢測程序分離血清，檢查病毒抗體或其它病原的抗體

氣管分泌物，腸內(nèi)容物，臟器分離細(xì)菌

真菌檢查動(dòng)物編號(hào)外觀檢查麻醉皮膚取樣取血無菌解剖檢測檢測報(bào)告本文檔共48頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分2.寄生蟲檢測程序弓形蟲檢測

體外寄生蟲檢測體內(nèi)寄生蟲檢測

體外寄生蟲檢測動(dòng)物編號(hào)外觀檢查麻醉拔毛或梳毛取血擠壓或刀片刮取皮層物取樣檢測檢測報(bào)告解剖、臟器、腸內(nèi)容物、糞便取樣本文檔共48頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分取樣要求與監(jiān)測規(guī)則：1.普通動(dòng)物、清潔級(jí)動(dòng)物和無特定病原體動(dòng)物每三個(gè)月至少檢測一次。2.無菌動(dòng)物每年至少檢測一次。3.每2-4周檢測一次糞便標(biāo)本。本文檔共48頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同生產(chǎn)繁殖單元取樣數(shù)量群體大小，只取樣數(shù)量<100100—150>500>5只>10只>20只

每個(gè)隔離器檢測2只本文檔共48頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分監(jiān)測方法：1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒檢測：1）血清學(xué)診斷：血凝抑制試驗(yàn)（HI）；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。2）病原學(xué)檢查：接種細(xì)胞培養(yǎng)物觀察CPE出現(xiàn)（鼠痘、鼠肝炎）；血吸附試驗(yàn)（仙臺(tái)病毒）；免疫酶試驗(yàn)（LCM病毒）。連續(xù)三次傳代未有病毒跡象為陰性。接種敏感動(dòng)物，觀察發(fā)病、抗體產(chǎn)生、病理改變、接種動(dòng)物病毒再分離。動(dòng)物組織細(xì)胞傳代培養(yǎng)。本文檔共48頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期二\1點(diǎn)19分3）病毒顆粒、抗原和核酸的檢出光鏡檢查病理改變或包涵體的存在。電鏡檢查組織內(nèi)或排泄物中的病毒顆粒。PAGE、PCR檢查病毒核酸。免疫法檢查組織內(nèi)、排泄物中的病毒抗原。