白前苷B對肝損傷保護(hù)作用及機(jī)理研究

白前苷B對肝損傷保護(hù)

作用及機(jī)理的研究答辯人：梁爽專業(yè)：藥理學(xué)導(dǎo)師：李沛波講師本文檔共55頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期三\7點37分學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明

本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。本文檔共55頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期三\7點37分目錄總結(jié)白前苷B對D-GalN/LPS誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷保護(hù)作用及機(jī)制研究

白前苷B對GCDC誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡保護(hù)作用及機(jī)制研究白前苷B提取分離及檢測研究目的、研究內(nèi)容背景

創(chuàng)新點

展望

本文檔共55頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期三\7點37分一、背景—肝損傷的研究概況指標(biāo)影響分類機(jī)理模型肝損傷本文檔共55頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期三\7點37分一、背景—肝損傷概況

肝損傷引發(fā)的肝臟疾病已成為常見病、多發(fā)病。肝損傷可導(dǎo)致肝纖維化，肝硬化,是肝癌發(fā)生的重要始動因素。發(fā)病率和死亡率高，極大地威脅著人類的健康。我國現(xiàn)有各類型肝病患者已超過2億之眾，其中乙肝病毒攜帶者約9300萬，每年新增病例超過100萬人，治療費用達(dá)1000億人民幣以上。對肝臟疾病的治療已成為研究熱點，但迄今尚無治療肝病的特效藥物，因此需要尋找一種有效預(yù)防和治療肝損傷的藥物。本文檔共55頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期三\7點37分藥物性肝損傷感染性肝損傷酒精性肝損傷缺血再灌注肝損傷膽汁淤積性肝損傷急性肝損傷慢性肝損傷免疫性肝損傷化學(xué)性肝損傷一、背景—肝損傷的分類發(fā)病速度發(fā)病原因發(fā)病機(jī)理本文檔共55頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期三\7點37分一、背景—肝損傷的機(jī)理質(zhì)膜損害線粒體功能障礙胞內(nèi)離子濃度改變降解酶被激活自由基損害

免疫性肝損傷化學(xué)性肝損傷細(xì)胞因子作用NO作用補(bǔ)體系統(tǒng)激活細(xì)胞間的協(xié)作

免疫變態(tài)反應(yīng)

細(xì)胞凋亡

受體介導(dǎo)途徑顆粒-排粒途徑通過基因調(diào)控本文檔共55頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期三\7點37分一、背景—肝損傷實驗?zāi)Ｐ褪中g(shù)造成肝損傷模型5酒精性肝損傷模型4黃疸性肝損傷模型

3免疫性肝損傷模型

2化學(xué)性肝損傷模型

1本文檔共55頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期三\7點37分CCl4誘導(dǎo)肝損傷

PAPA誘導(dǎo)肝損傷

其它

DMN誘導(dǎo)肝損傷

TTA誘導(dǎo)肝損傷

D-GalN誘導(dǎo)肝損傷

化學(xué)性肝損傷模型最早，最廣泛的選擇性肝毒性物質(zhì)。與病毒性肝炎所造成的損傷類似常見的致肝癌劑

急性藥物肝功能損傷模型

接近人類肝硬化

乙硫氨酸甲基偶氮苯黃曲霉素

本文檔共55頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期三\7點37分BCG/LPS誘導(dǎo)法

異種血清法

D-GalN/LPS

誘導(dǎo)法

conA誘導(dǎo)法

免疫性肝損傷模型肝炎免疫性肝損傷機(jī)制相似常用于肝纖維化模型，以豬血清最為常用

本文檔共55頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期三\7點37分

此方法誘發(fā)的動物肝損傷模型被公認(rèn)為與臨床上急性重癥肝炎（急性肝壞死）病情相似。其損傷機(jī)制為：D-GalN為特異性肝細(xì)胞損傷藥物，可促使肥大細(xì)胞釋放組胺，引發(fā)結(jié)腸水腫，腸源性內(nèi)毒素吸收增加。因此，經(jīng)D-GalN處理后的動物,接受很小劑量的外源性LPS即可以引起以肝臟細(xì)胞凋亡為主要特征的急性肝損傷。其損傷過程中產(chǎn)生大量的炎癥因子，與濕熱黃疸發(fā)病機(jī)制最相似。

D-GalN/LPS

誘導(dǎo)法

本文檔共55頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期三\7點37分膽汁酸及其鹽誘導(dǎo)黃疸性肝損傷ANIT所致小鼠黃疸性肝損傷

膽管結(jié)扎致梗阻性黃疸

ABC黃疸性肝損傷模型本文檔共55頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期三\7點37分

膽汁在細(xì)胞內(nèi)的堆積是導(dǎo)致黃疸性肝細(xì)胞損傷的主要原因之一。GCDC是人體內(nèi)作用最強(qiáng)的膽汁酸。其作用機(jī)理包括：

1.對細(xì)胞產(chǎn)生毒性，誘導(dǎo)肝細(xì)胞壞死

2.誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡3.氧化應(yīng)激作用

4.誘導(dǎo)線粒體功能失調(diào)膽汁酸及其鹽誘導(dǎo)黃疸性肝損傷A本文檔共55頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期三\7點37分1.????其它細(xì)胞活性及凋亡內(nèi)皮細(xì)胞生化指標(biāo)氧化指標(biāo)MDA,SOD,GSH-Px,CAT,LPO

ALT,AST,LDH,血清總膽紅素,甘油三脂

透明質(zhì)酸,ET

MTT，F(xiàn)CM，TUNEL

相關(guān)基因，受體及其酶

組織觀察

HE染色,Masson三色膠原染色,電子透射電鏡檢查

Na-K-ATP酶，Ca-ATP酶，Ca

2+一、背景—肝損傷的實驗檢測指標(biāo)本文檔共55頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期三\7點37分一、背景—中藥抗肝損傷作用研究概況

中藥作為我國的特色藥物，因其副作用低，而且在保肝退黃方面獨具優(yōu)勢，逐漸受到了大家的關(guān)注。對于肝損傷保護(hù)的中藥研究，主要有抗內(nèi)毒素治療及抗自由基、促進(jìn)肝細(xì)胞再生、調(diào)節(jié)免疫功能、改善微循環(huán)和抗細(xì)胞凋亡等。

目前已開發(fā)出很多療效確切的活性物質(zhì)用于肝損傷的治療。其中包括：甘草—甘草酸、苦參–苦參堿、黃芩—黃芩苷等。本文檔共55頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期三\7點37分一、背景—田基黃及白前苷B

田基黃民間用于治療濕熱黃疸，臨床常用于急、慢性肝炎的治療，1977版中國藥典就已收載了以田基黃為原料制成的田基黃注射液?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明田基黃對免疫性、感染性、膽汁淤積性肝損傷具有保護(hù)作用。

本文檔共55頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期三\7點37分一、背景—田基黃及白前苷B研究基礎(chǔ)本實驗室研究表明：（1）田基黃的有效部位為黃酮類化合物，本文檔共55頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期三\7點37分一、背景—田基黃及白前苷B研究基礎(chǔ)（2）白前苷B是黃酮類化合物中含量較高

本文檔共55頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期三\7點37分一、背景—田基黃及白前苷B研究基礎(chǔ)（3）白前苷B提取分離

本文檔共55頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期三\7點37分一、背景—田基黃及白前苷B研究基礎(chǔ)（4）白前苷B對D-GalN、CCl4所致化學(xué)性肝損傷和ANIT、BDL所致黃疸性肝損傷具有顯著保護(hù)作用。

本文檔共55頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期三\7點37分二、研究目的

本文的研究目的是：以白前苷B為研究對象，利用體內(nèi)外實驗方法，結(jié)合田基黃的功用（治療濕熱黃疸），對其進(jìn)行肝損傷保護(hù)作用及機(jī)理的研究。本文檔共55頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期三\7點37分三、研究思路田基黃具有清熱利濕解毒之功，用于治療濕熱黃疸（1）黃疸（2）濕熱本文檔共55頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期三\7點37分三、研究思路231白前苷B的提取分離體外實驗，選擇GCDC誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡模型，闡明白前苷B的退黃機(jī)理

動物實驗，選擇D-GalN/LPS誘導(dǎo)小鼠肝損傷模型，對白前苷B保肝的作用及其機(jī)制進(jìn)行研究。

1本文檔共55頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期三\7點37分四、白前苷B的提取分離—方法水提液制備白前苷B分離含量測定水提醇沉法聚酰胺吸附60%乙醇洗脫HPLC本文檔共55頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期三\7點37分四、白前苷B的提取分離—結(jié)果圖2-1白前苷B對照品HPLC圖譜圖2-2提取物HPLC圖譜名稱供試品濃度（mg/ml）峰面積含量樣品0.5629623.8098.30%白前苷B含量計算結(jié)果本文檔共55頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期三\7點37分四、白前苷B的提取分離及檢測—小結(jié)

本實驗中主要采用了水提醇沉、聚酰胺柱層析、重結(jié)晶，獲得一個單體化合物，經(jīng)過HPLC與對照品比較，其保留時間一致。從紫外光譜圖上看，此樣品UVI（nm）為257.8；UVII（nm）分別為376.5，與白前苷B對照品一致。因此，故推斷該單體化合物為白前苷B，計算其純度達(dá)到98.3%。

本文檔共55頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—方法細(xì)胞內(nèi)鈣離子：激光共聚焦顯微鏡線粒體膜電位：RH123染色氧化相關(guān)指標(biāo)：ROS，GSH細(xì)胞活性：MTT，細(xì)胞凋亡：HOE33258染色

AnnexinV/pI染色白前苷B抗凋亡作用機(jī)制白前苷B對凋亡保護(hù)作用白前苷B安全范圍檢測肝損傷模型的建立MTT法檢測細(xì)胞活性

GCDC誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡本文檔共55頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果1、GCDC對L-02肝細(xì)胞活性的影響

注：與空白對照組比較：*p<0.05,**P<0.01。細(xì)胞存活率與GCDC呈劑量依賴關(guān)系

本文檔共55頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果2、Hoechst33258染色注：與空白對照組比較：*p<0.05,**P<0.01。隨著GCDC的給藥劑量增加，凋亡小體明顯增多，凋亡率增加，結(jié)果與MTT一致。本文檔共55頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果

注：圖中以AnnexinV為橫軸，PI為縱軸；左上象限為機(jī)械性損傷細(xì)胞；右上為晚期凋亡細(xì)胞或者壞死細(xì)胞；左下為陰性正常細(xì)胞；右下為早期凋亡細(xì)胞。注：與空白對照組比較：*

p<0.05,**P<0.01。3、GCDC對L-02細(xì)胞凋亡率的影響

隨著GCDC給藥劑量增加，細(xì)胞凋亡（Q4區(qū)）明顯增加。

本文檔共55頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果4、線粒體膜電位變化

如圖所示，隨GCDC給藥劑量增加，熒光強(qiáng)度逐漸減少，證明線粒體膜電位逐漸下降，細(xì)胞凋亡增加。本文檔共55頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果

Ca2+被認(rèn)為與細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)和抑制的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。隨著GCDC給藥量增加，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度逐漸增加，細(xì)胞凋亡增加。注：與空白對照組比較：**P<0.01。5、細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化本文檔共55頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果

6、細(xì)胞內(nèi)ROS變化注：與空白對照組比較：*p<0.05,**P<0.01。ROS產(chǎn)物的增多檢測是細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的重要指標(biāo)，隨著GCDC給藥量的增加，ROS釋放量增加。本文檔共55頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果7、細(xì)胞內(nèi)GSH變化注：與空白對照組比較：**P<0.01。

隨著GCDC的給藥量增加，細(xì)胞內(nèi)的GSH有明顯的降低。細(xì)胞內(nèi)ROS升高，是造成細(xì)胞內(nèi)GSH降低的原因之一。

本文檔共55頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—小結(jié)

本實驗根據(jù)文獻(xiàn)報道及細(xì)胞凋亡相關(guān)機(jī)理，選用線粒體膜電位、鈣離子濃度及氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)檢測，確定GCDC誘導(dǎo)L-02肝細(xì)胞凋亡最佳濃度為100μmol/L。本文檔共55頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果

1、白前苷B安全濃度范圍

注：本實驗中選擇白前苷B的最大作用濃度為250μmol/L為含有1%DMSO溶劑所能溶解的最大劑量。本文檔共55頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果2、白前苷B對GCDC處理的肝細(xì)胞的存活率影響

注：與空白對照組比較：##P<0.01;與GCDC組比較:*P<0.05,**P<0.01。

白前苷B對GCDC誘導(dǎo)的肝細(xì)胞存活率降低有保護(hù)作用，并且有劑量依賴性。

GCDC100μM本文檔共55頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果3、Hoechst33258染色檢測對細(xì)胞凋亡的保護(hù)注：與空白對照組比較：##P<0.01;

與GCDC組比較:*P<0.05,**P<0.01。隨著白前苷B的給藥劑量增加，凋亡小體明顯減少，細(xì)胞凋亡率降低，高濃度時與正常相似。說明白前苷B細(xì)胞凋亡有保護(hù)作用。正常對照GCDC100μM本文檔共55頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果

注：與空白對照組比較：##P<0.01;與GCDC組比較:

**P<0.01。4、白前苷B對細(xì)胞凋亡率的影響

隨著白前苷B給藥劑量增加，細(xì)胞凋亡（Q4區(qū)）明顯減少，證明白前苷B對GCDC誘導(dǎo)的早期肝細(xì)胞凋亡有明顯的保護(hù)作用。

注：圖中以AnnexinV為橫軸，PI為縱軸；左上象限為機(jī)械性損傷細(xì)胞；右上為晚期凋亡細(xì)胞或者壞死細(xì)胞；左下為陰性正常細(xì)胞；右下為早期凋亡細(xì)胞。GCDC100μM本文檔共55頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果

5、細(xì)胞線粒體膜電位白前苷B對肝細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用與線粒體途徑相關(guān)。本文檔共55頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果6、白前苷B對細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響

注：與空白對照組比較：##P<0.01;與GCDC組比較:**P<0.01。GCDC100μM白前苷B給藥組可以逆轉(zhuǎn)GCDC誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高。證明其保護(hù)肝細(xì)胞凋亡機(jī)理與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度相關(guān)。

本文檔共55頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果

7、白前苷B肝細(xì)胞內(nèi)ROS的影響注：與空白對照組比較：##P<0.01;與GCDC組比較:*P<0.05，**P<0.01。

說明白前苷B對GCDC造成的肝細(xì)胞凋亡有明顯的保護(hù)作用，其保護(hù)作用機(jī)制與抗細(xì)胞氧化作用相關(guān)。GCDC100μM本文檔共55頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—結(jié)果8、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)GSH的影響

注：與空白對照組比較：##P<0.01;與GCDC組比較:**P<0.01。GCDC100μMGCDC可以產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激作用，使GSH降低，對肝細(xì)胞造成損傷，而白前苷B則對此產(chǎn)生保護(hù)作用。綜合上述ROS檢測，充分證明白前苷B保護(hù)肝細(xì)胞凋亡作用機(jī)制與抗細(xì)胞氧化應(yīng)激作用相關(guān)。本文檔共55頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期三\7點37分五、白前苷B對GCDC誘導(dǎo)人正常肝細(xì)L-02凋亡保護(hù)作用及機(jī)理研究—小結(jié)

本實驗結(jié)果表明：白前苷B在50—200μmol/L劑量范圍內(nèi)對GCDC誘導(dǎo)的黃疸性肝細(xì)胞凋亡有保護(hù)作用，并有明顯的劑量依賴性。研究證明白前苷B抑制肝細(xì)胞凋亡的作用機(jī)理是：降低細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位、抑制細(xì)胞內(nèi)Ca2+的釋放增多以及保護(hù)細(xì)胞氧化應(yīng)激作用。本文檔共55頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期三\7點37分六、白前苷B對D-GalN/LPS誘導(dǎo)的肝損傷保護(hù)作用及機(jī)制的研究—方法肝細(xì)胞凋亡的檢測

mRNA及蛋白水平TNF-α

、IL-6

的表達(dá)肝組織結(jié)構(gòu)HE染色血清及肝組織相關(guān)生化指標(biāo)檢測

抑制小鼠死亡的量效關(guān)系實驗

對小鼠肝損傷保護(hù)作用及機(jī)理研究

抑制小鼠死亡的時效關(guān)系實驗

血清：ALT、AST、總膽紅素肝組織：MDA、GSH、NO本文檔共55頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期三\7點37分六、白前苷B對D-GalN/LPS誘導(dǎo)的肝損傷保護(hù)作用機(jī)制的研究—結(jié)果1、量效關(guān)系及時效關(guān)系研究ED50=4.01（）mg/kg本文檔共55頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期三\7點37分六、白前苷B對D-GalN/LPS誘導(dǎo)的肝損傷保護(hù)

作用及機(jī)制的研究—結(jié)果（n=10）組別ALT（卡門氏）AST（卡門氏）總膽紅素（μmol/L）空白對照39.49±10.1551.69±14.517.64±2.60D-GalN/LPS263.91±4.86##297.64±48.92##32.33±2.85##白前苷B低劑量239.45±6.81**188.84±24.55**20.44±1.81**白前苷B中劑量196.63±22.34**132.19±18.45**17.83±2.74**白前苷B高劑量100.94±19.35**66.43±15.7**11.54±1.61**（n=10）

組別NO（umol/gprot）MDA（nmol/mgprot）GSH（mgGSH/gprot）空白對照1.27±0.101.16±0.172.37±0.59D-GalN/LPS1.95±0.17##2.47±0.25##0.38±0.06##白前苷B低劑量1.71±0.26*1.93±0.16**0.60±0.06**白前苷B中劑量1.52±0.02**1.60±0.11**0.80±0.13**白前苷B高劑量1.37±0.10**1.33±0.24**1.43±0.39**注：與空白對照組比較：##P<0.01;與GCDC組比較:

*P<0.05,**P<0.01。

白前苷B具有保肝降酶、退黃作用。

白前苷B能提高肝臟抗氧化能力。2、血清及組織生化指標(biāo)本文檔共55頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期三\7點37分六、白前苷B對D-GalN/LPS誘導(dǎo)的肝損傷保護(hù)作用及機(jī)制的研究—結(jié)果3、HE染色觀察肝組織結(jié)構(gòu)

肝組織結(jié)構(gòu)清楚，肝索排列整齊，細(xì)胞核較大，核仁明顯，結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞無變性、壞死、出血。肝索排列紊亂，細(xì)胞核明顯不等，呈不同程度的固縮，細(xì)胞界限不清，并可見點狀壞死。肝小葉周邊肝細(xì)胞出現(xiàn)中至重度脂肪變性，細(xì)胞脂質(zhì)，呈空泡狀。

治療各組，隨給藥劑量增加，肝組織結(jié)構(gòu)逐漸清晰，高劑量組肝索結(jié)構(gòu)排列與空白對照組相似，細(xì)胞碎片減少，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)恢復(fù)。本文檔共55頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期三\7點37分六、白前苷B對D-GalN/LPS誘導(dǎo)的肝損傷保護(hù)作用及機(jī)制的研究—結(jié)果4、HOE33342染色圖

細(xì)胞核彌散均勻藍(lán)色熒光

細(xì)胞核則出現(xiàn)濃染致密顆粒塊狀熒光，染色不均勻，核呈固縮圓珠狀，有大量碎片存在，染色質(zhì)邊聚。

隨給藥劑量增加，核固縮數(shù)量減少，染色質(zhì)邊聚和碎片也逐漸減少，高劑量組細(xì)胞核形態(tài)恢復(fù)與正常對照組相似。本文檔共55頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期三\7點37分六、白前苷B對D-GalN/LPS誘導(dǎo)的肝損傷保護(hù)作用及機(jī)制的研究—結(jié)果（

n=10）組別TNF-α（ng/L）IL-6（pg/ml）空白對照30.88±10.4042.07±9.26D-GalN/LPS437.99±50.97##324.49±13.27##白前苷B低劑量253.01±20.64**197.39±22.55**白前苷B中劑量177.52±8.01**132.46±19.25**白前苷B高劑量93.04±28.27**67.97±12.71**注：與空白對照組比較：##P<0.01;與GCDC組比較:

*P<0.05,**P<0.01。

ABCDE

TNF-α

IL-6

β-actinA空白組B造模組C低劑量組D中劑量組E高劑量組5、TNF-α和IL-6蛋白及mRNA水平表達(dá)

白前苷B對D-GalN/LPS所致的小鼠急性肝損傷起到保肝護(hù)肝作用機(jī)理與調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答有關(guān)，通過調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)細(xì)胞因子而實現(xiàn)。

白前苷B可能通過下調(diào)TNF-α和IL-6的表達(dá)，使肝細(xì)胞炎癥和壞死得以減輕，凋亡減少，從而對急性肝損傷起保護(hù)作用。本文檔共55頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期三\7點37分六、白前苷B對D-GalN/LPS誘導(dǎo)的肝損傷保護(hù)作用及機(jī)制的研究—小結(jié)

本實驗通過對生化指標(biāo)、組織切片、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞因子的檢測，結(jié)果表明白前苷B對D-GalN/LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型有保護(hù)作用。