牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制與滅菌

一、復(fù)習(xí)本文檔共55頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期二\2點53分1本文檔共55頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期二\2點53分2《微生物培養(yǎng)與檢驗》主要課程內(nèi)容1.微生物營養(yǎng)需求2.微生物形態(tài)3.微生物純化、分離4.微生物培養(yǎng)、篩選與保存5.微生物檢驗本文檔共55頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期二\2點53分3課程內(nèi)容微生物吃什么？1微生物長的什么樣？2如何得到微生物？3如何保存微生物？4我很愛吃熟食（豬頭肉），但是聽說熟食微生物超標(biāo)，這是怎么檢測的？54本文檔共55頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期二\2點53分規(guī)則：1.上課不遲到：第1、5節(jié)課，提前10min到教室

2.下課前，自己的實驗物品歸類，該清洗的清洗，該收拾的收拾

3.值日生負(fù)責(zé)擦黑板、掃地、擦桌；為大家做好服務(wù)工作

4.上課時間請不要玩手機(jī)

本文檔共55頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期二\2點53分5安全操作與標(biāo)準(zhǔn)操作本文檔共55頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期二\2點53分6（一）微生物培養(yǎng)基的制備（二）微生物的消毒滅菌（三）認(rèn)識微生物培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備微生物吃什么？1本文檔共55頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期二\2點53分7（一）微生物培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基：是人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)物質(zhì)。滿足微生物生長發(fā)育的水分、C，N，生長因子，P，S，Na，Ca等適宜的酸堿度、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位，合適的滲透壓本文檔共55頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期二\2點53分8根據(jù)物理狀態(tài)劃分培養(yǎng)基分液體、半固體和固體3種液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)；半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細(xì)菌固體培養(yǎng)基含15%~20%瓊脂，主要用于分離細(xì)菌本文檔共55頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期二\2點53分9培養(yǎng)基的配制原則1.選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)實驗室中常用：不同微生物所需培養(yǎng)基各不同牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基細(xì)菌高氏一號放線菌麥芽汁培養(yǎng)基酵母菌察氏培養(yǎng)基霉菌本文檔共55頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期二\2點53分102.營養(yǎng)物質(zhì)的濃度及配比合適3.控制pH條件細(xì)菌和放線菌：pH7.0~7.5酵母菌和霉菌：pH4.5~6.04.控制氧化還原電位5.原料來源的選擇盡量利用廉價且易獲得的原料作為培養(yǎng)基成分本文檔共55頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期二\2點53分116.滅菌處理避免雜菌污染，要對所用器械及工作場所進(jìn)行消毒與滅菌培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基0.1MPa，121.3℃15~30min本文檔共55頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期二\2點53分12（二）微生物的消毒滅菌滅菌指利用物理和化學(xué)的方法殺滅或除去物料及設(shè)備中一切生命物質(zhì)的過程。消毒是指用物理或化學(xué)的方法殺死物料、容器、器具內(nèi)外的病原微生物，一般只能殺死營養(yǎng)細(xì)胞而不能殺死芽孢。消毒不一定能達(dá)到滅菌的要求，而滅菌則可達(dá)到消毒的目的無菌本文檔共55頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期二\2點53分13消毒滅菌方法：（一）干熱滅菌法（二）濕熱滅菌法（三）過濾除菌（四）紫外線殺菌（五）藥物殺菌本文檔共55頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期二\2點53分14（一）干熱滅菌法1.火焰滅菌法2.熱空氣滅菌法140~160℃2~3h本文檔共55頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期二\2點53分15（二）濕熱滅菌法1.高壓蒸汽滅菌法121℃20~30min2.常壓蒸汽滅菌法3.常壓間歇滅菌法本文檔共55頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期二\2點53分16（三）過濾除菌薄膜濾菌器0.22μm和0.45μm本文檔共55頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期二\2點53分17（四）紫外線殺菌240~280nm波段紫外線殺菌力較強(qiáng)多以253.7nm作為紫外線殺菌波長特點：穿透力弱超凈工作臺：本文檔共55頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期二\2點53分18（五）藥物殺菌1.酒精2.新潔爾滅本文檔共55頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期二\2點53分19（三）認(rèn)識微生物培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備1.培養(yǎng)平板本文檔共55頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期二\2點53分202.試管與棉塞本文檔共55頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期二\2點53分213.接種環(huán)，涂布棒本文檔共55頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期二\2點53分224.高溫高壓蒸汽滅菌鍋本文檔共55頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期二\2點53分23p42高壓蒸汽滅菌請回顧滅菌鍋的操作方法本文檔共55頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期二\2點53分241）用之前檢查水位及水質(zhì)。若水質(zhì)不好，需換水2）放置滅菌物品，勿過滿；瓶子滅菌，瓶蓋擰松3）蓋上鍋蓋，相對的兩個螺帽一起擰4）啟動加熱，同時打開放氣閥；檢查安全閥是否關(guān)上。調(diào)整溫度時間121℃15min。5）待排氣閥冒出大量熱氣并持續(xù)約2~5min后排盡冷空氣后，再將其關(guān)閉；6）滅菌結(jié)束，待壓力下降至0，可打開放氣閥，之后開蓋。注意防止?fàn)C傷7）固體物品可進(jìn)行干燥；液體物品冷卻后擰緊。盡量避免二次污染。本文檔共55頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期二\2點53分255.鼓風(fēng)干燥箱本文檔共55頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期二\2點53分266.超凈工作臺本文檔共55頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期二\2點53分27每次使用前，先用75%酒精（或新潔爾滅）擦洗臺面，并提前用紫外線滅菌燈照射15~30min處理凈化工作區(qū)內(nèi)積存的微生物；關(guān)閉滅菌燈后應(yīng)啟動風(fēng)機(jī)使之運(yùn)轉(zhuǎn)2min后再進(jìn)行培養(yǎng)操作；工作區(qū)內(nèi)不應(yīng)存放不必要的物品，以保持潔凈氣流流型不受干擾；使用完畢應(yīng)及時清理工作臺面上的物品并用酒精擦拭臺面使之始終保持潔凈。本文檔共55頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期二\2點53分287.微量移液器的使用本文檔共55頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期二\2點53分29今天的工作：1.固體物品的滅菌2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌3.學(xué)習(xí)倒平板4.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作5.超凈臺的準(zhǔn)備6.劃線接種7.滅菌效果檢查本文檔共55頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期二\2點53分30開始實驗1.固體物品：1）平皿（6只/組）2）試管與棉塞/塑料封口（6只/組）的包扎3）滅菌藍(lán)色、黃色和白色槍頭將以上物品放入滅菌鍋中進(jìn)行滅菌121℃20min本文檔共55頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期二\2點53分312.培養(yǎng)基：培養(yǎng)基分液體、半固體和固體3種液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)；半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細(xì)菌固體培養(yǎng)基含15%~20%瓊脂，主要用于分離細(xì)菌本文檔共55頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期二\2點53分32牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

牛肉膏

3g

蛋白胨

10g

NaCl

5g

瓊脂

15-20gpH7.4-7.6，加水至1000mL；若需分裝，需先融化，搖勻后分于121℃高壓滅菌15~20min備用用途：普通細(xì)菌常用的培養(yǎng)基（1）固體培養(yǎng)基配置本文檔共55頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期二\2點53分33請大家配制：請大家查看“營養(yǎng)瓊脂”的成分與配制說明，每組配置牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基150mL于錐形瓶中請大家先寫出1L的配方，然后再寫出150mL的配方本文檔共55頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期二\2點53分34配制完畢，將配制好的培養(yǎng)基裝入錐形瓶內(nèi)，瓶口塞上棉塞，用牛皮紙/報紙包扎瓶口，標(biāo)注好組別，進(jìn)行高溫高壓蒸汽滅菌本文檔共55頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期二\2點53分35（2）液體培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基中不含瓊脂牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液

牛肉膏

3g

蛋白胨

10g

NaCl

5gpH7.4-7.6，加水至1

000mL于121℃高壓滅菌15~20min備用用途：普通細(xì)菌常用的培養(yǎng)基本文檔共55頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期二\2點53分36請大家查詢LB培養(yǎng)基配方每組配置LB液體培養(yǎng)基50mL于錐形瓶中，包扎好瓶口（紗布+牛皮紙/報紙）后滅菌請大家先寫出1L的配方，然后再寫出50mL的配方本文檔共55頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期二\2點53分371.固體物品的滅菌√2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌√3.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作4.學(xué)習(xí)倒平板5.超凈臺的準(zhǔn)備6.劃線接種7.滅菌效果檢查本文檔共55頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期二\2點53分383.如何倒平板（1）超凈工作臺的準(zhǔn)備將超凈工作臺臺面用酒精棉球擦干凈；關(guān)上門后，紫外燈打開，滅菌15-30min滅菌結(jié)束，打開風(fēng)機(jī)本文檔共55頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期二\2點53分392.加熱融化培養(yǎng)基（若為剛滅菌結(jié)束未凝固的培養(yǎng)基，則略）將培養(yǎng)基放入微波爐內(nèi)加熱融化，注意觀察，不要加熱時間過長或溫度過高，以免液體濺出。本文檔共55頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期二\2點53分404.倒平板超凈工作臺滅菌完畢，關(guān)紫外燈，打開風(fēng)機(jī)；超凈工作臺門不能開太高，約20cm即可；用新潔爾滅棉球擦拭工作臺和手；將酒精燈瓶外擦干凈，轉(zhuǎn)移入工作臺；將已融化的培養(yǎng)基瓶身擦干凈，轉(zhuǎn)移入工作臺；待培養(yǎng)基冷卻至50°C左右（不燙手為原則，但是不可冷卻過度），倒平板。本文檔共55頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期二\2點53分41平板要求：平板平整，無凸起；平板無“掛壁”；培養(yǎng)基布滿整個平皿倒平板操作視頻本文檔共55頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期二\2點53分42平板倒制結(jié)束，靜置，待凝固使用本文檔共55頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期二\2點53分434.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作取無菌試管，倒入1/3高度的培養(yǎng)基，塞上蓋子，斜靠，使得斜面長度3~4cm，待凝固后使用本文檔共55頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期二\2點53分44請大家先制備4個試管的斜面培養(yǎng)基，然后將剩余培養(yǎng)基用于制備平板本文檔共55頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期二\2點53分451.固體物品的滅菌√2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌√3.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作√4.學(xué)習(xí)倒平板√5.超凈臺的準(zhǔn)備√6.滅菌效果檢查7.劃線接種本文檔共55頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期二\2點53分466.滅菌效果檢查本文檔共55頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期二\2點53分47生化培養(yǎng)箱為微生物培養(yǎng)提供恒溫設(shè)備（固體培養(yǎng)基）本文檔共55頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期二\2點53分487.平板劃線法：取一接種環(huán)細(xì)菌，左手持平皿將蓋口微開，用沾有細(xì)菌的接種環(huán)在瓊脂平板上劃直線；接種環(huán)火焰滅菌，待冷卻，再用接種環(huán)在頂端邊緣劃線處沾取標(biāo)本繼續(xù)劃線，如此劃4~5次，劃畢加蓋。并用蠟筆在皿底玻璃上寫明接種菌名。于37℃培養(yǎng)18~24h觀察，注意平皿表面生長各菌落的大小、形態(tài)、邊沿、表面結(jié)構(gòu)、透明度和顏色等特征。本文檔共55頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期二\2點53分49四區(qū)劃線本文檔共55頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期二\2點53分50圓形、突起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤、有光澤，不透明菌落，直徑1～2mm本文檔共55頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期二\2點53分51請大家劃線接種大腸桿菌、金黃色葡萄球菌，置于培養(yǎng)箱16~18h后取出置于4℃冰箱保存本文檔共5