電針對(duì)雌雄實(shí)驗(yàn)性老鼠脂代謝的影響

電針對(duì)雌雄實(shí)驗(yàn)性老鼠脂代謝的影響

本文作者：孫東云孫立虹梁玉磊張書義肖紅玲吳中秋李文麗李新華馬紅利單位：河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院針灸系北京市豐臺(tái)區(qū)興隆中醫(yī)院中醫(yī)科河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心

單純性肥胖癥患者脂肪組織攝取能量的效應(yīng)增強(qiáng)會(huì)使甘油三酯的合成和儲(chǔ)存增加，同時(shí)高密度脂蛋白膽固醇的含量下降，其清除膽固醇的能力減弱，使機(jī)體內(nèi)呈現(xiàn)高ＴＣ血癥狀態(tài)；ＴＣ含量的增加又可抑制肝臟合成低密度脂蛋白膽固醇受體，從而使ＬＤＬ－Ｃ含量升高。這種脂類代謝的異常不僅可引起肥胖，還是動(dòng)脈粥樣硬化產(chǎn)生的重要因素之一［１］。大量研究證明，針刺減肥除了可以加快局部脂肪細(xì)胞分解代謝的速度［２］，還具有較好的降血脂作用［３－４］，但目前關(guān)于針刺對(duì)雌雄兩性脂代謝影響差異的研究還相對(duì)缺乏。由于雌雄兩性在激素分泌、新陳代謝、免疫調(diào)節(jié)等方面都存在顯著差異［５－６］，故本實(shí)驗(yàn)以雌雄兩性單純性肥胖大鼠為研究對(duì)象，電針干預(yù)后觀察其血脂含量的變化異同，探討電針刺激對(duì)雌雄兩性大鼠肥胖調(diào)節(jié)機(jī)制的異同，以期為臨床治療不同性別單純性肥胖癥提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

１材料與方法

１．１實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出生１ｄ的清潔級(jí)ＳＤ大鼠８窩，雌雄各半，體質(zhì)量６～９ｇ，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處置經(jīng)河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

１．２試劑與儀器谷氨酸鈉注射液；ＴＧ、ＴＣ試劑盒；ＬＤＬ－Ｃ試劑盒；ＨＤＬ－Ｃ試劑盒；一次性無(wú)菌針灸針；韓氏電針儀ＷＱ１００２Ｆ型；Ｈｕｍａｌｙｚｅｒ２０００型生化分析儀；ＭＳＥ－２５型高速冷凍離心機(jī)。

１．３造模及分組將８窩大鼠置于室溫為２５℃左右、明暗各１２ｈ的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，適應(yīng)性喂養(yǎng)１ｄ后造模。隨機(jī)從每窩乳鼠中抽取雌、雄各３～４只按每只０．２ｍＬ／１０ｇ在頸部皮下注射１５％谷氨酸鈉０．９％氯化鈉溶液，其余乳鼠注射０．９％氯化鈉溶液作為對(duì)照，連續(xù)５ｄ。２１ｄ齡斷乳，雌雄分籠飼養(yǎng)，經(jīng)Ｌ－ＭＳＧ處理的大鼠均喂高脂飼料，未經(jīng)Ｌ－ＭＳＧ處理的大鼠喂普通飼料。３６ｄ后測(cè)量模型大鼠和正常大鼠體重、體長(zhǎng)，并計(jì)算其體質(zhì)量指數(shù)［Ｌｅｅ’ｓ指數(shù)＝體質(zhì)量１／３×１０３／體長(zhǎng)［７］，其數(shù)值大小反映大鼠體脂含量］，模型大鼠Ｌｅｅ’ｓ指數(shù)大于正常大鼠３０以上為造模成功［８］。將造模成功的肥胖大鼠隨機(jī)分為模型雌、模型雄、電針雌及電針雄４組，每組１０只，繼續(xù)喂高脂飼料；注射０．９％氯化鈉溶液的雌、雄大鼠各１０只作為正常組，繼續(xù)喂普通飼料。普通飼料和高脂飼料均由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

１．４針刺方法電針雌、雄組大鼠：不做麻醉，將其固定于自制束鼠器上，按照《中國(guó)獸醫(yī)針灸學(xué)》的方法取穴，并參照人體有關(guān)穴位，以動(dòng)物比較學(xué)方法定位［９］。取大鼠“曲池”“后三里”“豐隆”“三陰交”“中脘”和“關(guān)元”穴，常規(guī)消毒后針刺，平補(bǔ)平瀉捻轉(zhuǎn)手法行針１ｍｉｎ。后在同側(cè)“后三里”與“三陰交”及雙側(cè)“豐隆”接通韓氏電針儀，頻率２Ｈｚ，強(qiáng)度１～２ｍＡ，３０ｍｉｎ后停針。每日治療１次，連續(xù)針刺２８ｄ。模型雌、雄兩組及正常雌、雄兩組：用上述方法將實(shí)驗(yàn)大鼠在自制束鼠器上固定３０ｍｉｎ，每日１次，連續(xù)２８ｄ，不施加其它干預(yù)措施。

１．５觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法大鼠的體質(zhì)量、體長(zhǎng)及Ｌｅｅ’ｓ指數(shù)的計(jì)算：由專人分別在治療前后測(cè)量各組大鼠的體質(zhì)量、體長(zhǎng)，每只大鼠測(cè)２次，如果２次所測(cè)值相近則取其平均值，如果相差很大，測(cè)量第３次，取相近兩值的平均值作為測(cè)量結(jié)果，計(jì)算其Ｌｅｅ’ｓ指數(shù)。血漿ＴＧ、ＴＣ、ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ含量的測(cè)定：治療結(jié)束后各組大鼠禁食１２ｈ，用１０％水合氯醛腹腔注射麻醉后股動(dòng)脈采血６ｍＬ，加入預(yù)冷的加有１％肝素和抑肽酶的塑料試管中，４℃、３０００ｒ／ｍｉｎ離心５ｍｉｎ，提取上清液測(cè)定血脂各項(xiàng)指標(biāo)。于生化分析儀上用甘油磷酸氧化酶－過(guò)氧化物酶法測(cè)ＴＧ含量，膽固醇氧化酶法測(cè)ＴＣ含量，直接一步法測(cè)ＨＤＬ－Ｃ和ＬＤＬ－Ｃ含量。１．６統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)處理運(yùn)用ＳＰＳＳ１３．０統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用方差分析和ｑ檢驗(yàn)法，Ｐ＜０．０５為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

２結(jié)果

２．１電針對(duì)雌雄兩性肥胖大鼠Ｌｅｅ’ｓ指數(shù)的影響圖１結(jié)果顯示，造模后，模型雌、雄兩組和電針雌、雄兩組大鼠的Ｌｅｅ’ｓ指數(shù)均高于正常雌、雄兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明造模成功。治療４周后，模型雌、雄兩組大鼠Ｌｅｅ’ｓ指數(shù)均高于正常雌、雄兩組；電針雌、雄兩組大鼠Ｌｅｅ’ｓ指數(shù)較模型雌、雄兩組均有明顯降低，且電針雄組較電針雌組下降明顯。圖３結(jié)果顯示，模型雌、雄兩組血漿ＬＤＬ－Ｃ含量較正常組升高，ＨＤＬ－Ｃ含量較正常組降低；電針雌、雄兩組血漿ＬＤＬ－Ｃ含量較模型雌、雄兩組均有下降，ＨＤＬ－Ｃ含量較模型雌、雄兩組均有升高；電針雄組與雌組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

３討論

脂代謝異常是引起肥胖的重要因素，主要包括ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ和ＨＤＬ－Ｃ的代謝異常。ＴＣ可合成某些激素，參與機(jī)體如糖類等物質(zhì)的代謝，對(duì)維持人體正常的生理功能有重要意義。但長(zhǎng)期大量攝入ＴＣ，會(huì)形成高膽固醇血癥，對(duì)人體不利。ＴＧ在肝臟和脂肪等組織中合成，主要儲(chǔ)存在脂肪組織中，分解可供給機(jī)體能量，體內(nèi)ＴＧ的合成速度加快，可導(dǎo)致體質(zhì)量增加。ＨＤＬ－Ｃ是將各組織中的ＴＣ運(yùn)回肝臟代謝，清除血液循環(huán)中游離ＴＣ，同時(shí)它還能夠競(jìng)爭(zhēng)性地與ＬＤＬ－Ｃ受體結(jié)合，阻斷ＬＤＬ－Ｃ進(jìn)入動(dòng)脈壁細(xì)胞，清除血管壁中的極低密度脂蛋白和乳糜微粒。肥胖者體內(nèi)的高ＴＧ血癥，使ＴＧ由乳糜顆粒、ＶＬＤＬ過(guò)多轉(zhuǎn)移到ＨＤＬ－Ｃ上，使ＨＤＬ－Ｃ濃度降低，從而導(dǎo)致ＨＤＬ－Ｃ清除ＴＣ能力減弱，內(nèi)源性ＴＣ合成增加，同時(shí)抑制ＶＬＤＬ異化及循環(huán)中ＴＧ的降解，使脂肪沉積體內(nèi)。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病病機(jī)為脾腎陽(yáng)虛為本，痰濕瘀停聚為標(biāo)［１０］，故以“健脾益腎、祛濕化痰、通腑泄?jié)帷睘榉?，取足?yáng)明胃經(jīng)合穴足三里及足三陰經(jīng)交會(huì)穴三陰交，二穴相合具有健脾祛濕，化痰降濁的作用?，F(xiàn)代研究也表明針刺“足三里”等穴可以使肥胖大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核自發(fā)放電頻率顯著升高，使飽中樞興奮水平升高，抑制了饑餓中樞的活動(dòng)，從而降低食欲［１１］。取胃之募穴中脘及小腸募穴關(guān)元，二者相配具有健脾和胃，分清泌濁，祛濕化痰之功效。此外，胃經(jīng)絡(luò)穴豐隆與手陽(yáng)明大腸經(jīng)合穴曲池同用可健脾除濕，通利腸腑，降濁消脂。六穴合用共達(dá)減脂減肥之效。針刺能通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體紊亂的脂代謝達(dá)到減肥的目的，在臨床應(yīng)用中取得較好療效。目前認(rèn)為，針刺可通過(guò)影響下丘腦單胺類介質(zhì)［１２］、瘦素、神經(jīng)肽Ｙ［１３］、神經(jīng)－體液系統(tǒng)［１４］以及炎性因子表達(dá)［１５］等方式調(diào)節(jié)脂代謝，但針刺對(duì)不同性別脂代謝影響差異的報(bào)道較少，本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)觀察電針刺激對(duì)雌雄兩性實(shí)驗(yàn)性肥胖大鼠血脂含量的影響，探討電針刺激對(duì)不同性別肥胖者調(diào)節(jié)異同的可能機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，電針刺激上述穴位可以降低雌雄兩性肥胖大鼠的Ｌｅｅ’ｓ指數(shù)，調(diào)節(jié)血漿ＴＧ、ＴＣ、ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ的異常水平，起到減肥的作用。電針刺激在降低Ｌｅｅ’ｓ指數(shù)方面，對(duì)雄性肥胖大鼠的作用優(yōu)于雌性，可能是由于雄性大鼠受電針刺激后能更加敏感地調(diào)節(jié)交感－腎上腺系統(tǒng)和下丘腦－垂體－腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)及甲狀腺系統(tǒng)的功能，從而增加能量消耗，促進(jìn)脂肪的動(dòng)員與分解［１６］。在降低血漿ＴＧ、ＴＣ的含量方面，電針刺激對(duì)雌性肥胖大鼠的作用優(yōu)于雄性，可能由于電針刺激可更好地調(diào)節(jié)雌性大鼠飽食中樞，抑制饑餓中樞的興奮性［１７］及下丘腦室旁核的放電頻率，并抑制下丘腦神經(jīng)肽的合成和分泌，同時(shí)增強(qiáng)交感神經(jīng)功能，抑制亢進(jìn)的副交感神經(jīng)功能，進(jìn)而調(diào)節(jié)體內(nèi)異常的瘦素和胰島素含量，糾正異常的脂肪－胰島內(nèi)分泌軸［１８］，改善糖代謝紊亂，從而對(duì)體內(nèi)異常的脂代謝起調(diào)節(jié)作用。在調(diào)節(jié)血漿ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ的含量方面，雌雄大鼠之間差異雖不明顯，但電針對(duì)雌性大鼠的改善趨勢(shì)優(yōu)于雄性，可能是由于樣本量小，觀察時(shí)間短所致，也可能與雌性