泌尿系細(xì)菌L型感染及其對(duì)常用抗生素的耐藥性檢測(cè)

泌尿系細(xì)菌L型感染及其對(duì)常用抗生素的耐藥性檢測(cè)【摘要】目的探討泌尿系細(xì)菌L型感染情況及其對(duì)常用抗生素的耐藥性，為臨床診治提供科學(xué)依據(jù)。方法用改良Kagan培養(yǎng)基對(duì)臨床疑為泌尿系感染者的尿液分離培養(yǎng)，并對(duì)分離獲得的細(xì)菌L型進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。結(jié)果泌尿系L型細(xì)菌感染率為%(35/83)，其中大腸埃希氏菌L型占%(13/35)。分離出的細(xì)菌L型對(duì)丁胺卡那霉素、慶大霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、青霉素G等耐藥性較高。結(jié)論臨床對(duì)疑為泌尿系感染者應(yīng)同時(shí)檢測(cè)細(xì)菌及其L型，并根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果聯(lián)合用藥，以殺菌并阻止其變?yōu)長型。

【關(guān)鍵詞】泌尿系感染細(xì)菌L型藥物敏感試驗(yàn)

細(xì)菌L型只有在高滲環(huán)境中才能存活和增殖，在普通培養(yǎng)基上不能生長或生長不良；臨床對(duì)疑為泌尿系感染的患者采用普通培養(yǎng)基不能分離L型病原菌，導(dǎo)致漏診或誤診[13]。此外，由于L型細(xì)菌的細(xì)胞壁缺陷，因而對(duì)作用于細(xì)胞壁的抗生素呈現(xiàn)不同程度的耐藥，給臨床合理用藥造成困難。本文對(duì)我院83例泌尿系感染患者進(jìn)行細(xì)菌L型分離鑒定，并測(cè)定其對(duì)常用抗生素的耐藥性。

1材料與方法

菌株來源2005年11月至2006年5月我院住院及門診患者尿培養(yǎng)為陰性，但有尿頻、尿急、尿痛等刺激癥狀，且伴發(fā)低熱、乏力、腰痛，臨床疑為泌尿系感染者83例，其中男37例，女46例。

試劑用L型平板，改良Kagan培養(yǎng)基：蛋白胨20g、牛肉膏6g、氯化鈉45g、瓊脂10g、蒸餾水800mL，加熱溶解，調(diào)整pH至，/cm215min滅菌后冷至56℃，加入滅活人血漿200mL，混勻傾注平板。

檢驗(yàn)方法囑患者清洗外陰，取中段尿約5mL送檢，2000r/min離心5min，倒掉上清液，將沉渣接種于血平板和L型平板各一個(gè)，血平板置37℃、5%(體積分?jǐn)?shù))CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，低倍顯微鏡觀察。若在培養(yǎng)基上觀察到油煎蛋或G型菌落時(shí)，即將培養(yǎng)物作直接涂片，革蘭氏染色，細(xì)胞壁染色。有完整細(xì)胞壁的細(xì)菌胞漿不著色，周邊呈紫色；細(xì)胞壁缺陷菌體的胞漿有不同程度的濃染，后者用L型平板傳代，并用藥物紙片擴(kuò)散法(KB法)對(duì)10種常用抗生素的最低抑菌濃度進(jìn)行分析。抗生素紙片包括丁胺卡那霉素、慶大霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、頭孢唑啉、頭孢三嗪、頭孢哌酮、紅霉素、青霉素G。采用銅綠假單胞菌ATCC27853、金黃色葡萄球菌ATCC29212進(jìn)行質(zhì)控，結(jié)果判斷參照美國臨床標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

2結(jié)果

泌尿系感染細(xì)菌L型分離鑒定結(jié)果從83例泌尿系感染患者尿液中分離培養(yǎng)出細(xì)菌46例，檢出率為%；其中細(xì)菌型11例，L型13例，細(xì)菌和L型混合存在22例，故泌尿系L型細(xì)菌感染率為%(35/83)(表1)。表135例L型細(xì)菌種類分布(株數(shù))

泌尿系感染細(xì)菌L型的藥敏結(jié)果分離出的L型細(xì)菌對(duì)丁胺卡那霉素、慶大霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、青霉素G等耐藥率較高；對(duì)頭孢唑啉、頭孢三嗪、頭孢哌酮及紅霉素等耐藥率偏低，多數(shù)菌株敏感(表2)。

3討論

細(xì)菌、真菌、放線菌、螺旋體、立克次體和衣原體等病原微生物進(jìn)入機(jī)體后，在抗生素、抗體、補(bǔ)體和溶菌酶等體內(nèi)外因素的作用下可被誘導(dǎo)為L型。細(xì)菌成為L型后，由于細(xì)胞壁缺失使抗原結(jié)構(gòu)變化，致使由細(xì)菌型誘導(dǎo)的體液或細(xì)胞免疫不能有效地作用于L型，逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的攻擊，形成免疫耐受狀態(tài)而在宿主體內(nèi)存活，此時(shí)泌尿生殖道感染的癥狀可暫時(shí)緩解或消失。一旦阻止細(xì)胞壁合成的因素消除，如停止用藥，其仍可返祖為原菌，重新對(duì)人體致病，引起臨床癥狀。因此，細(xì)菌L型的存在是泌尿生殖道感染反復(fù)發(fā)作、遷延不愈的重要原因[13]。

細(xì)菌L型表面抗原成分丟失，使生化反應(yīng)能力減弱，在普通等滲培養(yǎng)基上生長不良或不生長，是泌尿系感染者細(xì)菌檢出率低的主要原因。本文收集83例疑為泌尿系感染者的中段尿標(biāo)本，用普通培養(yǎng)基和L型平板同時(shí)培養(yǎng)，結(jié)果細(xì)菌的檢出率為%，其中L型的檢出率為%。如不使用L型平板，其檢出率僅為%。因此，臨床上非常有必要對(duì)疑為泌尿系感染者進(jìn)行L型細(xì)菌培養(yǎng)。本組35例患者尿液中分離出L型細(xì)菌，其中大腸桿菌13例，占%，居于首位。關(guān)于大腸桿菌對(duì)泌尿系的致病，以往文獻(xiàn)報(bào)道其侵入尿道上皮可導(dǎo)致菌尿癥，侵入膀胱或腎臟黏膜可引起細(xì)胞死亡，也可致膀胱炎或腎盂腎炎。表2泌尿系感染L型細(xì)菌耐藥結(jié)

抗生素的廣泛應(yīng)用是誘導(dǎo)細(xì)菌L型形成的重要因素，患者有可能開始僅為普通細(xì)菌感染，經(jīng)抗生素治療后形成L型，導(dǎo)致細(xì)菌型和L型混合存在。如本組資料46例患者尿培養(yǎng)分離出細(xì)菌，其中細(xì)菌和L型混合存在者22例，占%。由于L型細(xì)菌的細(xì)胞壁存在不同程度的缺陷，其藥物敏感性與原菌多存在差異，因此臨床治療用藥，不僅要考慮原細(xì)菌的藥敏，也要考慮L型的藥敏。我們采用KB法對(duì)分離獲得的L型菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其對(duì)作用于細(xì)胞壁的頭孢唑啉、頭孢三嗪、頭孢哌酮等以及作用于核酸和蛋白質(zhì)合成的紅霉素等較為敏感，而對(duì)抑制肽聚糖合成的青霉素、β內(nèi)酰胺抗生素等耐藥性較高。有學(xué)者認(rèn)為頭孢菌素除可影響細(xì)胞壁的合成外，對(duì)細(xì)胞膜也有一定作用；也有學(xué)者認(rèn)為頭孢菌素對(duì)L型的β內(nèi)酰胺酶較為穩(wěn)定，所以不易遭受破壞。

綜上，臨床對(duì)疑為泌尿系感染者應(yīng)同時(shí)采用普通培養(yǎng)基和高滲培養(yǎng)基分離細(xì)菌，并同時(shí)考慮二者的藥物敏感情況，根據(jù)所分離到的細(xì)菌及L型藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果決定用藥，可以聯(lián)合使用作用于細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)的抗生素，以達(dá)到殺菌并阻止其變?yōu)長型的目的。

【參考文獻(xiàn)】

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