免疫酶組織化學技術課件整理

免疫酶組織化學技術聰明出于勤奮，天才在于積累免疫酶組織化學技術免疫酶組織化學技術聰明出于勤奮，天才在于積累第三章免疫酶組織化學技術免疫酶組織化學技術酶辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶.酶標記已知Ab(或Ag)+組織細胞內相應的Ag(或Ab)抗原抗體復合物(酶標)底物有色沉淀定位;圖像分析儀半定量“和諧教育”課堂模式要求在教學過程中，教師和學生積極互動，共同發(fā)展。注重培養(yǎng)學生的獨立性和自主性，引導學生質凝、調查、探究。同時教師應尊重學生的人格，關注個體差異，激發(fā)學生的學習積極性，使每個學生得到充分的發(fā)展?！昂椭C教育”的課堂模式應抓住以下三個環(huán)節(jié)。一、和諧的課堂導入課堂導入是創(chuàng)設優(yōu)良教學情境的一個不可忽視的重要方面，課堂教學要體現(xiàn)“引人入勝”的藝術魅力，首先必須從引入教學開始。著名特級教師于漪說：“在課堂教學中要培養(yǎng)、激發(fā)學生的興趣，首先應抓住導入新課的環(huán)節(jié)，開始就把學生牢牢地吸引住?！彼跃脑O計導入，為完成整堂教學作好準備是十分重要的。那么如何進入優(yōu)質的課堂導入呢？1.通過問題引入一個好的問題引入要有藝術性、趣味性、啟發(fā)性，能激發(fā)學生的思維興趣。實踐證明：疑問是思維的啟動機，它可以讓學生的求知欲望從潛伏狀態(tài)轉入活躍狀態(tài)，有力地調動學生的思維興趣。例如在教學《端午的鴨蛋》時，一開始便提問：祖國有哪些傳統(tǒng)節(jié)日？這些節(jié)日都有些什么傳統(tǒng)習俗？在學生暢所欲言之后，引入到本文――今天大家學習的課文中作者就寫了端午時節(jié)家鄉(xiāng)的一些習俗。2.以小故事形式引入一個好的故事里應該有事、有趣、有理，使事、趣、理融為一體，具有藝術的感染力。學生比較喜歡，在引入教學時如應用得當，就能起到很好的效果。3.創(chuàng)設教學情境引入指教師在開始教學時采用多媒體等手段，從一開始就吸引學生的注意力，啟發(fā)學生對課堂學習的積極情感和樂趣，如教學《羅布泊，消逝的仙湖》時，為了讓學生對羅布泊有一個整體上的印象感知，在課件中首先為學生收集了一些羅布泊以前的圖片，讓學生感受到這一仙湖的美麗，也由此自然而然地引發(fā)學生對這一美麗仙湖消逝原因的思考。二、和諧的教學過程有了良好的教學引入，怎樣保持學生高昂的學習熱情，做到課堂教學過程的和諧統(tǒng)一，是決定一堂課成效的關鍵。1.激勵學生積極參與到教學中來“和諧教學”是關注全體同學的教學，因此教學中要鼓勵各個層次的學生積極參與使每個學生都有所獲，德國著名教育家第斯多惠說得好：“我們認為教學的藝術不在于傳授本領，而在于激勵、喚醒、鼓舞?！闭n堂上教師激勵學生參與，是創(chuàng)設教學高潮的重要手段，例如在課堂上多為下層次的學生創(chuàng)設回答問題的機會，在學生回答正確的情況下及時評點表揚，并多鼓勵他們參與課堂活動。教學高潮的“勝”境，與主導者的激勵、點拔、啟導是分不開的，一個啟發(fā)有方、善于激活學生思維的教師，總是能夠抓住時機，創(chuàng)設出教學的高潮。2.師生互動，情感交流“和諧教育”的課堂，就像一列快樂的列車，駕駛員是教師，學生就是乘客。有一位作家說過：“感人的歌聲留給人的記憶是長遠的。”同樣，教師在教學中感人的語言、感人的動作，留給學生的記憶將是長久的，甚至終身難忘，所以教師在和諧課堂上盡量多與學生進行情感交流，哪怕是一個小小的提示，一個小小的動作，都會拔動學生的心弦。三、和諧的課堂結尾一個引人入勝的新課導入，對于激發(fā)學生學習興趣、提高求知欲有著十分重要的作用。而一個耐人尋味的結尾，對于幫助學生理清知識脈絡、掌握知識重點更有意義?！昂椭C教育”的課堂結尾一定是耐人尋味，感人至深的。留下懸念，讓人遐想，從而展現(xiàn)出教師高超精湛、揮灑自如的教學藝術和風格。四、延伸式結課法有些課文講完后，把課尾作為課堂內外的紐帶，引導學生向課外延伸，開辟第二課堂，引導學生去思考，加深對所學知識的理解和聯(lián)系，理論聯(lián)系實際，從生活中獲取感受，這樣課內指導課外，聯(lián)系生活實際，既有利于培養(yǎng)學生分析問題、解決問題的能力，也有利于開闊學生的視野，激發(fā)濃厚的學習興趣。每一位教師都應從教學的實際需要出發(fā)，重視并進行課堂教學結課藝術的學習與研究，不斷總結創(chuàng)造與運用課堂結課方式，創(chuàng)建“和諧教育”的課堂結構模式。對農村初中學生而言，文言文學習是一大難點，老師和學生在平時教與學中都花了很多功夫，但初中生的文言文學習現(xiàn)狀依然不盡如人意。學生背誦文言文困難，或者能背誦課文卻不理解其意思；用現(xiàn)代漢語翻譯文言句子，難以字字落實、準確到位；導致初三總復習時對文言文手忙腳亂。學生能大致知道一些常見實詞虛詞的義項，在課外文言文閱讀的具體語境中卻不知做何解釋；能大致理解文言文內容卻難以準確把握作者要表達的主旨，有些甚至連基本意思都看不懂。這樣就導致學生在考試時無法下筆，失分嚴重。初中生的文言文學習低效有主客觀兩方面的原因：客觀方面是文言文與學生所處年代相隔較遠，學生對古代文化、人物等不了解也不感興趣；古代漢語與現(xiàn)代漢語相差較大。主觀方面是農村初中生語言基礎薄弱，積累量少，處于被動接受的狀態(tài)。教師的文言文教學模式不理想，這些都在一定程度上造成了農村初中生文言文學習的低效。培養(yǎng)農村初中生文言文自主學習的指導策略應包括以下幾個方面。（一）激發(fā)學生自主閱讀興趣瑞士心理學家皮亞杰曾說：“所有智力方面的工作都要依賴于興趣?！睂W生學習文言文也是如此，只有從內心對文言文學習產生了興趣，才會以積極認真的態(tài)度去自主學習，才會想法設法努力解決學習中的疑難，取得良好的學習效果。教師要加強自身的文學修養(yǎng)，經常組織學生開展文言詩文故事演講、古詩文朗誦、文言文改寫習作展示等活動。讓學生感受到求知的樂趣，也能有機會展示自己的所得，得到同學、老師的贊許，得到成功的滿足感。（二）提高學生自主學習的意識現(xiàn)在許多文言課堂老師講解過多，留給學生思考的空間很少，且過高地估計了初中學生的接受能力。這樣一來，學生的自主學習意識就會淡化。而且教師課堂上越“包辦”，學生進步的可能性越小。我們要切實把學生作為學習的主體，真正將課堂還給學生，當學生理解有偏頗時，或“找”得不全面時，老師再適當引導一下。這樣會更有效地推動學生的文言文學習。（三）創(chuàng)設自主學習的環(huán)境筆者在教學中曾在兩個班嘗試過不同的教學模式，一種是以帶領學生逐字逐句翻譯、講解為主，一種則主要讓學生自主翻譯、解讀，找出疑問后，先小組探討解決，小組探討后解決不了的，老師才帶領全班一起探討。顯然后一種教學模式課堂氣氛更活躍，學生學習積極性更高，尤其是對一些較長的文言課文還能縮短教學時間。而從學后的檢測效果來看，后一種教學模式的效果要明顯好過前一種，因為學生是主動自主學習質疑釋疑的，印象深刻，也能為后續(xù)文言文學習打下良好基礎。（四）教給學生自主學習的方法一是反復誦讀培養(yǎng)語感。古人說“讀書百遍，其義自見”，就是針對文言文的。所以應重視指導學生一些文言文朗讀技巧，讓學生能在反復誦讀中讀準字音、讀清停頓、讀通思路、讀出情感。學生在反復的朗讀中，漸漸培養(yǎng)起文言語感，而且熟讀后能加深對內容的理解和把握。二是利用工具書進行自學。筆者讓每個學生準備一本《古漢語常用字字典》，先教會他們使用，以后他們遇到不認識不理解的字詞不再等著老師來解說，能自行查閱工具書，而自主尋求答案的快感又推動了他們文言文學習的積極性。三是梳理歸納文言知識。文言文學習中文章是一篇一篇地教，知識點是一個一個地積累，但學生腦子里的文言知識還是零散的，一些基礎薄弱的農村初中生腦子里更是如一團亂麻。筆者在教學中，運用計算機培訓中學習的畫思維導圖的方法，將文言文課文中紛亂的知識點清晰地梳理歸納，成倍地提高了學習效率，還增進了學生的理解和記憶能力。四是鼓勵學生進行多形式的文言創(chuàng)作和互相評測。筆者在教學中喜歡讓學生選擇一些簡短的文言文進行擴寫、續(xù)寫或改寫，并要求學生寫好后互評互改，然后挑一些全班展示。從他們的習作中看，可以發(fā)現(xiàn)學生的想象力真是豐富，習作展現(xiàn)的似乎是一幕幕電影場景，哪怕是基礎很薄弱的一些學生，也擴寫得有模有樣，可知學生不僅理解了文言語義，文章的主旨也理解透了。這類的學習活動能真正提高學生文言文閱讀興趣和能力，也能提高作文水平，可謂一舉兩得。《為學》中說：“天下事有難易乎，為之，則難者亦易矣；不為，則易者亦難矣。”雖然目前文言文學習現(xiàn)狀不盡如人意，但筆者相信通過師生的共同努力，教學相長，農村中學生文言文學習也會迎來它的春天的！第三章免疫酶組織化學技術免疫酶組織化學技術酶辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶.酶標記已知Ab(或Ag)+組織細胞內相應的Ag(或Ab)抗原抗體復合物(酶標)底物有色沉淀定位;圖像分析儀半定量免疫組化方法酶標抗體免疫組織化學直接法間接法◆非酶標抗體免疫組織化學酶橋法PAP法、APAAP法酶標抗體免疫組織化學染色法(一)原理直接法和間接法直接法是將酶標記在第一抗體上,直接檢測細胞內特異性抗原。間接法一兩步法抗:是細胞組織內抗原的特異性抗體;二抗:是抗一抗的抗體,并且已用酶標記(注意:第二抗體與第一抗體須是不同種屬動物制備的,因為第二抗體往往是用第一種動物的IgG所制備。)酶標抗體法-直接法原理:將酶直接標記在一抗上過氧化粉然后直接與相應抗原特異地結合。形成抗原一抗體_酶復合物,最后用底物顯色劑顯色第一體優(yōu)點:簡便、快速、特異性強非特異性背景反應低缺點:浪費抗體、敏感性極低圍》1兔組化直法依靠化學連接(共價鍵)對酶及抗體活性有影響。每種抗原必須分別用其抗體的酶標記物。酶標抗體法-間接法二抗原理:將酶標記在二抗上,先將一抗與相應的抗原結合,形成抗過化原抗體復合物,再用二抗(酶標抗體)與復合物中的特異抗體結合,第一抗形成抗原-抗體-酶標抗體復合物最后用底物顯色劑顯色優(yōu)點:只需一種酶標抗體即可?！鳌饕籱E塊:教感性低,但優(yōu)于直接法圍22免疫組化國接法依靠化學連接對酶及抗體活性有影響。令免疫酶組織化學方法最終的生成物是帶有酶標記的抗原抗體復合物,再依據酶與底物作用生成不溶性的有色產物沉積在抗原抗體反應原位,并借此確定該抗原的性質、存在的部位和含量。令顯色反應:令酶+底物=不溶性的色素標記酶:辣根過氧化物酶(HRP)堿性磷酸酶(ALP)葡萄糖氧化酶(GOD)β-D-半乳糖苷酶.1辣根過氧化物酶HRP顯色:產物棕褐色HRP與底物過氧化氫和DAB作用產物棕褐色,有嗜鋨性DAB性質:電子供體,較敏感,室溫時較穩(wěn)定,顯色后切片可長期保存?？芍掳?可將DAB制成10倍濃度儲存液,分裝后-20℃貯存注意事項:孵育時間和配置方式易產生背景著色濃縮的DAB—按照說明書;注意校正蒸餾水的PH值;粉劑DAB—溶解時濾去不溶性顆粒;現(xiàn)用現(xiàn)配保存時可產生氧化物沉積在切片上,形成斑點。臨用前加H2O21辣根過氧化物酶HRP:3344492堿性磷酸酶ALP顯色:產物藍色或紅色令以磷酸萘酚ASMX為底物,被ALP水解后生成萘酚AS-MX,再與孵育液內的堅牢藍B鹽或堅牢紅TR鹽等偶聯(lián)生成不溶性染料(堅牢藍或堅牢紅)而成令優(yōu)點:細胞和組織內的內源性堿性磷酸酶很容易被抑制和破壞,而不會產生內源性酶顯色,從