平板菌落計數(shù)法水中微生物的檢測課件

水中細菌總數(shù)的測定

——平板菌落計數(shù)法.一、細菌總數(shù)測定的意義水中細菌總數(shù)往往同水中有機物污染的程度呈正相關(guān)，它是評價水質(zhì)污染程度重要指標之一細菌總數(shù)：指水樣在一定條件下培養(yǎng)后，1mL水樣所含菌落的總數(shù)。我國生活飲用水標準（GB5749-85）規(guī)定，細菌總數(shù)不得超過100個/ml含細菌10-100個/ml的水體為極清潔含細菌100-1000個/ml的水體為清潔含細菌1000-10000個/ml的水體為不太清潔含細菌1萬-10萬個/ml的水體為不清潔含細菌多于10萬個/ml的水體為極不清潔.二、基本原理

1、本試驗采用平板菌落計數(shù)法對水樣中的細菌計數(shù)，這是一種測定水中好氧和兼性厭氧細菌密度的方法，由于細菌在水體中，能以單個、成對、鏈狀、成簇或成團的方式存在，另外，沒有單獨的一種培養(yǎng)基或某一環(huán)境條件能滿足一個水樣中所有細菌的生理要求，所以由此法得到的菌落數(shù)，實際上要低于被測水樣中真正存在的活菌數(shù)。.2、平板菌落計數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細胞，取一定量的稀釋液接種到平板上上，經(jīng)培養(yǎng)，由每個單細胞生長繁殖形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落代表樣品中一個單細胞二、基本原理.三、實驗準備器皿：無菌采樣瓶、培養(yǎng)皿、移液管、試管等。儀器：干熱滅菌箱、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱等。試劑：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、無菌水環(huán)境條件：營養(yǎng)瓊脂平板在工作臺上暴露15分鐘，每個平板上生長得到的菌落不超過15個——無菌室.四、實驗步驟1）自來水：先將自來水龍頭用酒精燈火焰灼燒滅菌，再開水龍頭使水流5min，以滅菌采樣瓶接取水樣備用。(2)池水、河水或湖水等地面水源水：在距岸邊5米處，取距水面10—15cm的水樣，先將滅菌的帶塞的采樣瓶，瓶口向下浸入水層中，然后翻轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿后，將平塞蓋好，從水中取出，若不能在2h內(nèi)檢測的，需放入4℃冰箱中保存。1、采樣：代表性：多采幾個部位，液體樣品需經(jīng)過震搖，以獲得均勻稀釋液。.2水樣的10倍稀釋

第一步稀釋水樣第二步：接種平板注意：稀釋度的選擇.平板混合分離法：將菌液分離樣品搖勻，用無菌移液管取1ml的菌液移至無菌培養(yǎng)皿中，然后將融化，涼至45℃左右的培養(yǎng)基，在每個培養(yǎng)皿內(nèi)各倒入約15ml，搖勻，凝固，制成平板。

混合倒平板操作法示意圖.2水樣的10倍稀釋

第一步稀釋水樣第二步：接種平板第三步：培養(yǎng)稀釋度過低，菌落密集無法計數(shù)可以計數(shù)，但數(shù)量過多，費時費力數(shù)量合適，統(tǒng)計計算，作為結(jié)果數(shù)量太少，誤差大，不作計數(shù)注意：稀釋度的選擇10-3

10-4

10-5

10-6

.第四步計數(shù)細菌數(shù)量=？細菌數(shù)量=同一稀釋度的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)例如：10-5的平均菌落數(shù)是125個細菌數(shù)量=125×105=1.25×107個/ml注意:作空白及取平行樣(2-3組)通常細菌、放線菌選擇平均菌落數(shù)在30~300之間者進行計算，霉菌選平均菌落數(shù)在10~100之間。.3菌落計數(shù)及報告方法(實例)不同稀釋度的平均菌落數(shù)

兩稀釋度菌落數(shù)

之比菌落總數(shù)

報告方式

10-1

10-2

10-3

11365

164

20

---22760295461.632890271602.24無法計數(shù)4650513___527115___6無法計數(shù)30512___7無法計數(shù)無法計數(shù)無法計數(shù)___164001.6×104377503.8×104271002.7×1045130005.1×1052702.7×102305003.1×10410-3

無法計數(shù).

1）若只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)在30-300范圍時，則將該菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。菌落計數(shù)方法及原則：.

2）若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30~300之間，則視二者之比值來決定，若其比值小于2應(yīng)報告兩者的平均數(shù)。若大于或等于2則報告其中較小的菌落總數(shù)。

.3）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之.

4）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)以按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之

.5）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30~300之間，則應(yīng)以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之

.6）平板出現(xiàn)大片菌苔不采用，菌苔小于平板的一半，若另一半菌落分布均勻，則菌落數(shù)×2..注意事項:1、樣品充分混勻，稀釋時一個稀釋度要換一支無菌移液管（放菌液時吸管尖不要碰到液面2、由于細菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后應(yīng)盡快倒培養(yǎng)基，立即搖勻；3、傾注平板時的培養(yǎng)基溫度冷卻至45℃左右。4、計數(shù)時，30―300個菌落的稀釋度計算每毫升的菌數(shù)最為合適5、同一稀釋度的三個重復(fù)的菌數(shù)不能相差很懸殊

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平板菌落計數(shù)法的優(yōu)點：是能測出樣品中的活菌數(shù)。此法常用于某些成品和生物制品檢定以及食品、水源的污染程度的檢定等。

缺點：手續(xù)較繁，而且測定值常受各種因素的影響。

.空氣微生物的檢測1m3空氣中細菌的總數(shù)：C=1000×50NAtC——1m3空氣中細菌的總數(shù)N——平皿中平均菌