實(shí)驗(yàn)動物染色體標(biāo)本的制備課件

實(shí)驗(yàn)7

動物染色體的制備

--牛蛙骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備、觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解制備中期染色體標(biāo)本的原理。2.熟悉并初步掌握制備骨髓染色體的操作方法。2023/7/11

染色體是生物遺傳基因的載體。在物種進(jìn)化、作物育種、性別鑒定、基因定位以及癌癥和遺傳性疾病的診斷中，有時(shí)需要制備染色體標(biāo)本。動物的骨髓中存在大量活躍的進(jìn)行有絲分裂的細(xì)胞，是染色體制備的理想材料。給動物注射了特異作用于微管系統(tǒng)的秋水仙素后，可以抑制紡錘體的形成，使分裂細(xì)胞阻斷于有絲分裂中期。收集骨髓細(xì)胞，低滲處理，使細(xì)胞質(zhì)膜破裂，以利染色體的分散。細(xì)胞經(jīng)固定后，于預(yù)冷的載玻片上滴片，使染色體散開，再用姬姆薩染色，便可以制成染色體標(biāo)本。二、實(shí)驗(yàn)原理2023/7/122023/7/13人外周血淋巴細(xì)胞染色體（Giemse染色）2023/7/142023/7/15三、實(shí)驗(yàn)用品試劑：0.65％生理鹽水，甲醇—冰醋酸(3:1)固定液,蒸餾水，Giemsa染液。器材：顯微鏡，離心機(jī)，搪瓷盤，剪刀，骨剪，離心管，注射器，染色缸。材料：肉用成體牛蛙2023/7/16動物的藥物處理（課前已經(jīng)完成）

牛蛙稱重，按每克體重2

μg的劑量腹腔注射秋水仙堿溶液(用0．65％生理鹽水配制)。注射后3.5-4小時(shí)，雙毀髓法處死牛蛙。四、實(shí)驗(yàn)步驟2023/7/171．每組同學(xué)取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和脛腓骨等長骨。剪去骨兩端膨大部的半透明軟骨，程度以剛剛露出骨髓組織為宜。每組保證有1根后肢長骨，或者2根前肢長骨。

2．在小燒杯中加入3ml的0.65％生理鹽水，取帶針頭的注射器，吸入1ml0.65％生理鹽水，將針頭沿骨的長軸方向從骨的一端刺入骨中，緩慢推動注射器活塞，將骨髓細(xì)胞沖洗到10ml離心管中。注意：沖洗時(shí)動作要徐緩，以免溶液噴出，損失骨髓細(xì)胞。此3ml的生理鹽水要反復(fù)使用，直到把所有材料中的骨髓沖出為止。將骨髓沖出物中大塊白色脂肪組織用針頭挑出棄去。四、實(shí)驗(yàn)步驟2023/7/18四、實(shí)驗(yàn)步驟2023/7/19取后肢：剪開牛蛙后肢與軀干接合部的肌肉，可看到膨大的關(guān)節(jié)部。四、實(shí)驗(yàn)步驟2023/7/110取后肢2：用剪刀順著關(guān)節(jié)外圍剪開。四、實(shí)驗(yàn)步驟2023/7/111取后肢3：剪開后的后腿關(guān)節(jié)。四、實(shí)驗(yàn)步驟2023/7/112取前肢1：找到關(guān)節(jié)所在。四、實(shí)驗(yàn)步驟2023/7/113取前肢2：剪開肌肉，順著關(guān)節(jié)外圍剪開。四、實(shí)驗(yàn)步驟2023/7/114四、實(shí)驗(yàn)步驟2023/7/1153.在載玻片上滴1滴蒸餾水，然后滴加2滴第2步獲得的骨髓細(xì)胞懸液。輕輕晃動載玻片，使液體混勻，并在載玻片上鋪展開。18-20℃下靜置，低滲處理20-30分鐘。注意防止水分蒸發(fā)。4.在培養(yǎng)皿中放入兩根竹簽，將滴有骨髓細(xì)胞

的載玻片放在竹簽上，緩慢向培養(yǎng)皿中加入

固定液I（無水乙醇:冰醋酸:蒸餾水=1:2:3）

室溫下利用揮發(fā)的蒸汽固定100-120min。5.吸走固定液，換入無水乙醇，蒸汽固定10-20分鐘。6.取出載玻片，緩緩倒去低滲液，用吸管將

固定液II(無水乙醇:冰醋酸=1:2)自載玻片

的一端緩慢滴下形成水幕，固定3-4次，直

立載玻片空氣干燥。注意，每組做2片45°蒸汽固定法四、實(shí)驗(yàn)步驟2023/7/1167.在干凈的培養(yǎng)皿中放入兩垛蓋玻片（每垛3片），將固定并充分干燥的載玻片有細(xì)胞的一面向下，放置于蓋玻片上，將Giemsa染料用吸管注入載玻片和培養(yǎng)皿底的間隙中，扣染20-30分鐘。8.用蒸餾水稍洗使脫去浮色，吸水紙吸干載玻片底面和周圍的水分，空氣干燥后在顯微鏡下觀察。不使用油鏡的情況下不需要蓋玻片。Giemsa染色改良苯酚品紅染色蒸汽固定法四、實(shí)驗(yàn)步驟2023/7/117注意事項(xiàng)

1.骨髓染色體標(biāo)本的制備成敗決定于取材，若抽取的骨髓太少或太稀，細(xì)胞數(shù)目過少，不易獲得較多的中期分裂相。

2.低滲處理極為重要，低滲不夠，則染色體聚在一起，分散不好。太過，則造成細(xì)胞破碎，染色體丟失。2023/7/118五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1．找出最好的幾個(gè)分裂相，數(shù)出染色體條數(shù).2.畫出兩個(gè)好的分裂相的顯微圖