臨床微生物檢驗(yàn)課件

臨床微生物檢驗(yàn)聰明出于勤奮，天才在于積累臨床微生物檢驗(yàn)臨床微生物檢驗(yàn)聰明出于勤奮，天才在于積累臨床微生物檢驗(yàn)臨床微生物檢驗(yàn)是人體的各種物質(zhì)進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)，為臨床診斷和治療提供依據(jù)。整個(gè)檢驗(yàn)過程包括病人樣品的采集、運(yùn)送、處理，樣品中致病微生物的分離、培養(yǎng)、鑒定，藥物敏感試驗(yàn)，出具檢驗(yàn)報(bào)告。1.常見病原菌種類病原菌G+球菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌、草綠色鏈球菌、腸球菌G+桿菌結(jié)核分枝桿菌、產(chǎn)單核李斯特菌、陰道加特納菌G-球菌腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布蘭漢菌G-桿菌大腸埃希菌、銅綠假單胞苗、克雷伯桿菌、腸桿菌、變形桿菌、沙雷菌、沙門菌、不動(dòng)桿菌、嗜肺軍團(tuán)菌、嗜血桿菌真菌念珠菌、曲霉菌、隱球菌、球孢子菌厭氧菌擬桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌2.血液標(biāo)本的病原菌的檢驗(yàn)3.病原菌的檢驗(yàn)程序

1.標(biāo)本采集2.標(biāo)本直接檢查(1)直接顯微鏡檢查;(2)抗原檢測(cè);(3)核酸檢測(cè);3.分離培養(yǎng)與鑒定(1)培養(yǎng)基選擇;(2)分離培養(yǎng)與鑒定;4.抗體檢測(cè)常用ELISA、間接免疫熒光技術(shù)等方法;5.藥物敏感性試驗(yàn)4.臨床意義

1.葡萄球菌菌血癥由耐甲氧西林金黃色萄球菌(MRSA)及凝固酶陰性葡萄球菌引起的逐年增多，占10％～15％。2.腸球菌菌血癥約占10％,常見泌尿生殖道、消化道和腹腔感染的病人。3.G-桿菌菌血癥主要侵犯免疫功能低下的病人。4.L型菌感染菌血癥使用抑制細(xì)胞壁的抗生素，由缺損細(xì)胞壁的細(xì)菌感染所致。5．厭氧菌菌血癥常合并需氧菌感染，癥狀重而復(fù)雜。6．真菌血癥常由條件致病性真菌引起，有念珠菌、曲霉和毛霉等。7．醫(yī)院感染菌血癥近年來明顯增多，占30％—60％。二、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染1.常見病原體G+菌葡萄球菌，肺炎鏈球菌，B群、A群鏈球菌，消化鏈球菌，結(jié)核分枝桿菌，產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌、炭疽芽胞桿菌;G-菌腦膜炎奈瑟菌，大腸埃希菌，銅綠假單胞菌，卡他布蘭漢菌，類桿菌，不動(dòng)桿菌，肺炎克雷白桿菌;病毒乙型腦炎病毒,柯薩奇病毒AB,脊髓灰質(zhì)炎病毒,新腸道病毒68～71,狂犬病毒;真菌及其他新生隱球菌,白假絲酵母菌,鉤端螺旋體2.微生物檢驗(yàn)程序

對(duì)嬰幼兒不能腰穿時(shí)，用PCR技術(shù)檢測(cè)外周血，對(duì)腦膜炎條瑟菌感染者的陽(yáng)性率為100％，且不受抗生素藥物治療的影響；涂片和結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性率有限，且時(shí)間長(zhǎng)，用PCR技術(shù)檢測(cè)腦脊液中結(jié)核分枝桿菌DNA，檢出率高，快速靈敏和特異，但要嚴(yán)格操作規(guī)程，避免假陽(yáng)性。3.抗體檢測(cè)

為病毒檢測(cè)的快速診斷方法，較常用。(1)中和試驗(yàn)：主要檢測(cè)中和抗體lgG，此抗體持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)有診斷意義，陽(yáng)性率和特異性均高。雙份血清效價(jià)4倍增高。(2)特異性IgM抗體測(cè)定：此抗體在病后4天即可出現(xiàn)，2周可達(dá)高峰，常用于早期診斷。用ELISA、間接免疫熒光法等檢測(cè)，敏感性和特異性較高。(3)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：補(bǔ)體結(jié)合抗體為lgG抗體，常在病后第二周出現(xiàn)，5—6周達(dá)高峰，單份血清1：4為陽(yáng)性，雙份血清效價(jià)增高4倍為陽(yáng)性，用于回顧性診斷或流行病學(xué)調(diào)查。(4)血凝抑制試驗(yàn)：可用于臨床診斷及流行病學(xué)調(diào)查。血凝抑制抗體在病后5天出現(xiàn)，2周時(shí)達(dá)高峰，雙份血清抗體效價(jià)增高4倍以上有診斷價(jià)值，陽(yáng)性率高于補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，但可出現(xiàn)假陽(yáng)性。4.臨床意義

1．細(xì)菌性腦膜炎是常見類型，其中以流行性腦脊髓膜炎為常見，結(jié)核性腦膜炎呈回升趨勢(shì)，為防治重點(diǎn)。肺炎球菌、鏈球菌腦膜炎仍常見，流感嗜血桿菌腦膜炎以及其他G-桿菌性腦膜炎有增多趨勢(shì)。2．真菌性腦膜炎最常見是隱球菌腦膜炎，其他真菌性腦膜炎如白假絲酵母菌、球孢子菌漸增多，免疫功能低下患者易并發(fā)。3．流行性乙型腦炎是人獸共患的自然疫源性疾病。4．腸道病毒對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的危害性已逐漸引起人們的關(guān)注和重視。還不斷發(fā)現(xiàn)新腸道病毒68-71型引起的腦膜炎及腦炎。三、創(chuàng)傷和外科感染

1.常見病原菌種類革蘭陽(yáng)性革蘭陰性球菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌、消化鏈球菌腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌桿菌結(jié)核分枝桿菌、非結(jié)核分枝桿菌、破傷風(fēng)桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、炭疽芽胞桿菌大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、擬桿菌、梭桿菌、肺炎克雷白桿菌、變形桿菌其他衣氏放線菌、諾卡菌2.微生物檢驗(yàn)程序

見第一節(jié)血液感染或有關(guān)章節(jié)。取創(chuàng)傷分泌物和膿液作標(biāo)本；放線菌首先要檢出標(biāo)本中的硫磺顆粒；檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌作抗酸染色鏡檢；檢測(cè)厭氧菌要作厭氧培養(yǎng)。由創(chuàng)傷、手術(shù)、侵人性器械操作等外科治療引起的感染最為常見，并日漸增多。四、上呼吸道感染(一)常見病原體

1.革蘭陽(yáng)性金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、結(jié)核分枝桿菌、白喉棒狀桿菌、厭氧菌、炭疽芽胞桿菌、白假絲酵母菌、放線菌、奮森螺旋體;2.革蘭陰性腦膜炎奈瑟菌、大腸埃希菌、肺炎克雷白桿菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、腸桿菌、不動(dòng)桿菌、百日咳桿菌、軍團(tuán)菌、肺炎支原體

(二)細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)程序1.細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)見第一節(jié)血液感染及有關(guān)章節(jié)。2.病原體檢測(cè)只對(duì)某些疾病診斷具有意義。由于菌群復(fù)雜，正常寄生菌和種類繁多，一份咽拭子分離出來的細(xì)菌不一定與疾病有關(guān)，另外由于接受藥物治療，使某些細(xì)菌受到抑制，可影響陽(yáng)性檢出率。因此，在分析結(jié)果時(shí)應(yīng)緊密結(jié)合臨床。3.鼻咽拭子標(biāo)本的檢測(cè)有助于猩紅熱、風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎病人的臨床診斷；還可檢出化膿鏈球菌、奮森螺旋體、腦膜炎奈瑟菌、麻風(fēng)桿菌等以協(xié)助診斷；對(duì)白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的診斷有意義，應(yīng)結(jié)合臨床。

4.呼吸道還可見病毒感染，常見普通感冒或流行性感冒，咽炎和扁桃腺炎等，均應(yīng)結(jié)合臨床進(jìn)行診斷。五、下呼吸道感染(一)常見病原體1.革蘭陽(yáng)性金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、A群鏈球菌、腸球菌、結(jié)核分枝桿菌、白喉棒狀桿菌、炭疽芽胞桿菌、白假絲酵母菌、毛霉、曲霉;

2.革蘭陰性腦膜炎奈瑟菌、黃色球菌、大腸埃希菌、克雷白桿菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、百日咳桿菌、軍團(tuán)菌、支原體(二)病原學(xué)檢驗(yàn)程序(1)要嚴(yán)格無菌操作,收集晨起第一次清潔中段尿標(biāo)本，其結(jié)果才可靠。(2)標(biāo)本直接顯微鏡檢查可用1滴尿涂片作染色鏡檢是有意義的方法。如平均每個(gè)視野≥1個(gè)細(xì)菌(表示細(xì)菌定量培養(yǎng)≥105／ml)率達(dá)90％以上。(3)尿細(xì)菌定量培養(yǎng)診斷標(biāo)準(zhǔn)是以細(xì)菌數(shù)≥105／ml為真性細(xì)菌尿,104-105／ml為可疑陽(yáng)性，需再?gòu)?fù)查?？咕幬锩舾行栽囼?yàn)

（AST）近年來，由于抗菌藥物的廣泛使用，導(dǎo)致耐藥菌株不斷出現(xiàn)，尤其濫用抗生素造成抗藥突變菌株的大量出現(xiàn)。加強(qiáng)抗菌藥物的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)，測(cè)定細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感程度，是擺在臨床醫(yī)生和微生物工作者面前的一項(xiàng)艱巨任務(wù)，對(duì)于臨床治療中合理選擇用藥、避免濫用藥物、及時(shí)有效的控制感染，以及細(xì)菌鑒定具有重要的意義。一、意義①可預(yù)測(cè)抗菌治療的效果，“敏感”治療可能有效；“耐藥”肯定失敗；②指導(dǎo)醫(yī)生選擇使用抗生素，AST的結(jié)果為“耐藥”，即應(yīng)更換藥物；③提供所選擇藥物的依據(jù)；④監(jiān)測(cè)耐藥性，分析耐藥菌變遷，掌握耐藥菌感染病流行病學(xué)，控制和預(yù)防耐藥菌感染發(fā)生和流行。二、試驗(yàn)常規(guī)抗菌藥物選擇

所選用的藥物是根據(jù)各類細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感性和臨床用藥的具體情況決定。通常同類藥物只選擇一到兩種代表藥物。三、紙片瓊脂擴(kuò)散法

將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中水分溶解后不斷向紙片周圍擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測(cè)試菌的生長(zhǎng)被抑制，從而形成無菌生長(zhǎng)的透明圈即為抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，并與該藥對(duì)測(cè)試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。四、肉湯稀釋法

將抗菌藥物作不同濃度的定量稀釋，然后與被測(cè)菌作用，測(cè)定抗菌藥物對(duì)細(xì)菌的最小抑制濃度（MIC）或最小殺菌濃度（MBC)?？咕幬镒罡呦♂尪热阅芤种萍?xì)菌生長(zhǎng)者，該管含藥濃度即為被測(cè)菌株的敏感度。五、藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果解釋

“敏感”即表示測(cè)試菌可被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制；“耐藥”即表示測(cè)試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制，臨床治療無效。“中介”者提示該細(xì)菌對(duì)常規(guī)用藥體液或組織中的藥物濃度的反應(yīng)率低于敏感株，使用高于正常給藥量有療效。當(dāng)細(xì)菌對(duì)多種藥物敏感時(shí)，應(yīng)根據(jù)感染部位、病情、藥物抗菌作用、及藥物動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)選擇抗菌藥物。謝謝！21、要知道對(duì)好事的稱頌過于夸大，也會(huì)招來人們的反感輕蔑和嫉妒?！?/p>