生長激素實(shí)驗(yàn)室檢測

關(guān)于生長激素實(shí)驗(yàn)室檢測第1頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三生長激素概述結(jié)構(gòu)：含有191個(gè)氨基酸殘基的單鏈，由兩個(gè)二硫鍵連接的蛋白質(zhì)。分子量：22KD。分泌：垂體前葉(腺垂體)嗜酸細(xì)胞分泌,是腺垂體中含量最多的激素,約占腺垂體激素的50%。脈沖分泌，晝夜波動(dòng)大，深睡眠分泌最旺盛。GH的半衰期為半小時(shí)左右；皮下注射和肌肉注射的半衰期分別為1.75和3.4小時(shí)。第2頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三生長激素概述第3頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三一、促進(jìn)組織生長骨骼生長：GH及其介導(dǎo)IGF-1促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖和代謝，促進(jìn)線性增長。骨骺閉合后GH對(duì)維持骨礦物質(zhì)及骨密度仍然有重要作用。細(xì)胞生長：如骨骼肌細(xì)胞數(shù)量及其體積的增加，增加紅細(xì)胞數(shù)量。器官增長：增加內(nèi)臟器官的體積和功能。二、促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成GH促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，這體現(xiàn)在：細(xì)胞對(duì)氨基酸的攝取以及氮潴留的增加。生長激素的生理作用第4頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三三、促進(jìn)脂肪燃燒GH對(duì)脂肪細(xì)胞溶脂速率有重要調(diào)節(jié)作用；體外研究表明，GH可提高脂解速率，抑制游離脂肪酸重新酯化。臨床上GH缺乏病人皮下脂肪增多，尤其在腹部。而GH治療后腹脂明顯減少。四、減少對(duì)葡萄糖的利用GH可減少外周組織對(duì)葡萄糖利用，亦可降低細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性，可致血糖上升。生長激素的生理作用第5頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三五、促進(jìn)水、礦物質(zhì)代謝GH促進(jìn)生長及合成代謝，使體內(nèi)鈉、鉀、磷酸鹽正平衡。GH參與對(duì)體液的調(diào)節(jié)，尤其對(duì)細(xì)胞外液，可促進(jìn)腎小管鈉回吸收，激活腎上腺素、血管緊張素、醛固酮系統(tǒng)，引起水、鈉滯留增加。生長激素的生理作用六、其它：還有抗衰老、促進(jìn)腦功能、增強(qiáng)心肌功能、提高免疫功能等作用。第6頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三高級(jí)神經(jīng)中樞下丘腦垂體前葉生長激素GHRH(+)SRIF(-)IGFs(亦稱生長介素)直接作用甲狀腺性腺生長激素的分泌、調(diào)節(jié)生長激素釋放激素

生長激素釋放抑制激素促進(jìn)骨的縱向生長促進(jìn)骨的成熟加速骨骺融合第7頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三生長激素的分泌、調(diào)節(jié)脈沖式分泌，晚9點(diǎn)至第二天凌晨1點(diǎn)，特別是晚上10點(diǎn)前后，生長激素的分泌量達(dá)到最高，可以達(dá)到白天的5-7倍。另外，早上6點(diǎn)前后的一兩個(gè)小時(shí)，生長激素也有一個(gè)分泌小高峰。與年齡相關(guān)，青春發(fā)育中期分泌脈沖幅度最大，分泌量最多。頻率：間隔約3～5小時(shí)第8頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三生長激素的分泌、調(diào)節(jié)一天中生長激素分泌的不平衡性。人體生長激素的分泌一天24小時(shí)內(nèi)是不平衡的，其分泌量睡眠時(shí)高于清醒時(shí)。80%的生長激素在人睡眠時(shí)分泌，特別是處于快速生長期的孩子，這個(gè)階段是生長激素分泌的高峰，晚上分泌的生長激素特別多。所以,才有“人在睡中長”的說法。夜間生長激素分泌的不平衡性。生長激素在前半夜分泌比較多，這時(shí)是“睡眠黃金期”，而到了后半夜，相對(duì)分泌要少些。生長激素分泌受睡眠質(zhì)量影響。生長激素在入睡初期的深度睡眠時(shí)分泌最多，血液中生長激素的濃度達(dá)到最高峰。如果睡眠受到干擾，睡眠質(zhì)量不高的話，生長激素的分泌就會(huì)減少，身高的增長也有可能受到影響。第9頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三生長激素的檢測隨機(jī)采血：GH不像甲狀腺激素，平時(shí)在血液中濃度是基本恒定的，隨時(shí)采血就可以檢查。它在體內(nèi)呈峰值分泌，基礎(chǔ)值很低（0～5ng/ml都是正常），主要在夜間深睡眠時(shí)出現(xiàn)3～5個(gè)較高的分泌峰，但是夜間采血孩子可能會(huì)醒，且時(shí)間長采血次數(shù)需更多，因而不采用。GH激發(fā)試驗(yàn)：通過藥物促使GH分泌增加，以觀察血中GH動(dòng)態(tài)變化，從而了解下丘腦、垂體合成和分泌GH的能力。第10頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三生長激素激發(fā)試驗(yàn)以往曾應(yīng)用的運(yùn)動(dòng)、睡眠等生理性篩查試驗(yàn)，由于準(zhǔn)確度低，目前已很少應(yīng)用，多數(shù)都直接采用藥物刺激試驗(yàn)：清晨不運(yùn)動(dòng)及空腹。激發(fā)實(shí)驗(yàn)前一晚22點(diǎn)后開始禁食，可以適量喝水，但不能喝飲料，于第二天清晨8點(diǎn)前空腹進(jìn)行化驗(yàn)，全過程不能吃東西，可少喝水，最好孩子進(jìn)入睡眠狀態(tài)。按照生長激素缺乏癥的診療規(guī)范，必須是分別做兩種藥物的生長激素激發(fā)試驗(yàn)（避免一種藥物做激發(fā)試驗(yàn)有15%的假陽性）。激發(fā)試驗(yàn)藥物：胰島素、可樂定、精氨酸、左旋多巴、吡定斯的明、GHRH等藥物中選兩種。激發(fā)試驗(yàn)給藥途徑:口服和靜脈，分別采用口服和靜脈兩種用藥方式，可減少因消化吸收原因影響口服藥迅速起作用的可能。衛(wèi)生部《矮小癥臨床路徑》中要求，靜脈用藥方式必選一種。取血時(shí)間：0min、30min、60min、90min、120min。第11頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)室常用檢測方法化學(xué)發(fā)光免疫測定（CLIA）：采用一步酶免夾心法測定。將樣品添加到含有抗GH-堿性磷酸酶結(jié)合物、蛋白緩沖液和包被著抗GH單克隆抗體的順磁性磁珠的反應(yīng)管中。樣品中的GH與固定在磁珠上的抗GH單克隆抗體結(jié)合，而抗GH-堿性磷酸酶結(jié)合物和GH上不同的抗原位點(diǎn)反應(yīng)。將這種抗體-抗原-抗體復(fù)合物置于磁場內(nèi)，復(fù)合物被吸附住，而未結(jié)合的物質(zhì)被沖洗除去。隨后將化學(xué)發(fā)光底物添加到反應(yīng)管中，它在ALP的作用下迅速發(fā)光，所產(chǎn)生的光的量與樣品中GH的濃度成正比，通過多點(diǎn)校準(zhǔn)曲線確定樣品中GH的量。第12頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三電化學(xué)發(fā)光免疫測定（ECLIA）:是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫、化學(xué)發(fā)光免疫測定以后的新一代標(biāo)記免疫測定技術(shù)，是電化學(xué)發(fā)光（ECL）和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物。其檢測原理：將待測樣品、釕復(fù)合體標(biāo)記的抗GH單克隆抗體和生物素抗GH單克隆抗體同時(shí)加入一個(gè)反應(yīng)杯中孵育,反應(yīng)生成“三明治”樣抗原-抗體復(fù)合物。實(shí)驗(yàn)室常用檢測方法第13頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三電化學(xué)發(fā)光法第14頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三將被鏈霉親和素包被的磁珠加入反應(yīng)杯中，再次孵育，使生物素通過與親和素的結(jié)合將磁珠與反應(yīng)復(fù)合物連接為一體。

電化學(xué)發(fā)光法第15頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三電化學(xué)發(fā)光法第16頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三蠕動(dòng)泵將形成的釕標(biāo)記抗體－GH－生物素化抗體－磁珠復(fù)合體吸入流動(dòng)測量室，此時(shí)，磁珠被工作電極下面的磁鐵吸附于電極表面。同時(shí)，游離GH被吸出測量室。電化學(xué)發(fā)光法第17頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三電化學(xué)發(fā)光法第18頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三蠕動(dòng)泵加入含三丙胺（TPA）的緩沖液，同時(shí)電極加電壓，啟動(dòng)ECL反應(yīng)過程。反應(yīng)過程中產(chǎn)生許多光子，光強(qiáng)度與釕標(biāo)記復(fù)合物的濃度呈線性關(guān)系,通過光電倍增管檢測光強(qiáng)度，可測出待測GH的含量。電化學(xué)發(fā)光法第19頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三電化學(xué)發(fā)光法第20頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三結(jié)果判斷生長激素激發(fā)試驗(yàn)結(jié)果判斷：整個(gè)激發(fā)試驗(yàn)過程中，只要有一次任一次生長激素（GH）峰值≥10ng/ml為正常；5ng/ml<GH峰值<10ng/ml為部分缺乏；GH峰值<5ng/ml為完全缺乏（不代表體內(nèi)完全沒有生長激素，主要是為了與部分性相區(qū)別）。第21頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三其他相關(guān)激素第22頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三生長激素通過直接作用于骨骼或通過IGF-1介導(dǎo)作用于骨骼，促進(jìn)骨骼的線性增長。抗GH抗體阻礙GH與受體結(jié)合，從而抑制IGF-1的產(chǎn)生，進(jìn)而抑制其促生長效果。Comparativestudyofbiosynthetichumangrowthhormoneimmunogenicityingrowthhormonedeficientchildren.RougeotC,MarchandP,DrayF,etal.HormRes.1991;35(1):76-81.