野生三葉青馴化栽培、種質(zhì)篩選及開發(fā)利用項目可行性研究報告

項目名稱：野生三葉青馴化栽培、種質(zhì)篩選及開發(fā)利用承擔(dān)單位：杭州鴻越生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司合作單位：杭州職業(yè)技術(shù)學(xué)院、浙江大學(xué)

目錄一、項目申請表二、項目可行性研究報告三、承諾書申報單位杭州鴻越生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司項目主持人鄔錫偉項目名稱野生三葉青的馴化栽培、種質(zhì)篩選及開發(fā)利用起止年限2012-05-30——2014-05-30聯(lián)系電目類別農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項目項目擬投入經(jīng)費50萬元項目申報單位上年度銷售收入0萬元技術(shù)依托單位杭州職業(yè)技術(shù)學(xué)院、浙江大學(xué)上繳稅收0萬元技術(shù)開發(fā)費0萬元項目主要研究內(nèi)容及預(yù)期經(jīng)濟效益：三葉青是我國獨有的、極其稀少而珍貴的中草藥，具有抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛與解熱、保肝等作用且毒副作用小，是西藥無法代替的植物抗生素；加上抗瘤藥用價值發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用，臨床上已廣泛用于抗癌、抗腫瘤及抗艾滋病毒等疾病。近年來，我國有多個中藥廠都在使用三葉青作原料生產(chǎn)中成藥，并且其需求量呈大幅度增長趨勢。同時由于環(huán)境的改變及毫無節(jié)制地狂采濫挖，只挖不種，加上三葉青對生長環(huán)境要求苛刻，致使原本就稀有的野生三葉青日漸稀少，瀕臨滅絕，根本不能滿足醫(yī)藥市場需求，更顯現(xiàn)它不可多得的珍貴。本項目的研究旨在為擴大野生三葉青的資源,加速三葉青栽培和開發(fā)提供新技術(shù)，重點進行該物種的遺傳育種和保護生物學(xué)研究，并針對三葉青馴化栽培技術(shù)、生態(tài)復(fù)合間混種及不同條件下的活性成分分析和優(yōu)質(zhì)種質(zhì)篩選與高效栽培進行研究與應(yīng)用示范。一、主要研究內(nèi)容1．三葉青生態(tài)栽培技術(shù)研究與示范推廣研究三葉青引種馴化栽培、種源繁殖、肥料使用、病蟲害防治、采收與加工等標準化栽培技術(shù)規(guī)程。根據(jù)三葉青主要功能性成分變異規(guī)律，對關(guān)鍵技術(shù)進行進一步研究，并進行組裝配套，研究、制定出適宜我市生產(chǎn)管理規(guī)范，從繁殖材料、栽培、收獲、初級加工、商品分級與包裝、貯藏和運輸、人員和設(shè)施、文件檔案管理、質(zhì)量保證等方面對三葉青的生產(chǎn)管理技術(shù)進行全面具體的規(guī)定，并加以推廣應(yīng)用。2．三葉青種質(zhì)資源收集及組織培養(yǎng)技術(shù)

在我市范圍內(nèi)開展三葉青種質(zhì)資源的調(diào)査工作，摸清三葉青種質(zhì)資源的分布情況及產(chǎn)業(yè)發(fā)展概況。在系統(tǒng)調(diào)査研究基礎(chǔ)上，在我省主要分布區(qū)域收集三葉青種質(zhì)資源。經(jīng)過篩選的種質(zhì)進行組織培養(yǎng)擴繁，培育優(yōu)質(zhì)種苗。3.

不同栽培條件三葉青有效成分比較研究及栽培體系的建立開展不同種源、不同栽培方式、不同立地三葉青有效成分對比分析研究，篩選出有效成分含量高、產(chǎn)量高，適應(yīng)山地及平原栽培的三葉青種苗，并建立三葉青復(fù)合間混作高效栽培技術(shù)體系。二、主要技術(shù)指標1、掌握和控制三葉青快速繁殖影響因子技術(shù)。2、篩選出適合三葉青組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，培養(yǎng)小苗的過程中，采用愈傷組織培養(yǎng)及最佳培養(yǎng)基配方的技術(shù)，整個過程時間縮短了6個月，組培苗移栽成活率達90%以上。3、能周年生產(chǎn)三葉青，向人們提供豐富的三葉青藥材，滿足人民用藥需要，同時也為花卉市場提供插花材料和觀葉的盆花，豐富花卉市場的種類。4、大面積地推廣三葉青種植，投入產(chǎn)出比可達1︰2～1︰3以上。5、采用生態(tài)栽培技術(shù)：不使用化學(xué)合成的肥料、農(nóng)藥、生長調(diào)節(jié)劑、添加劑、色素等，也不采用基因工程和離子輻射技術(shù)，而是遵循三葉青的自然生長規(guī)律，培肥、除草、防治病蟲害、采收和初加工，形成三葉青藥材及其產(chǎn)物安全生產(chǎn)體系。三、主要經(jīng)濟指標、社會效益及成果1．制定《三葉青生態(tài)栽培技術(shù)標準》，建立三葉青試驗、示范基地20畝，推廣300畝，投產(chǎn)后年增產(chǎn)值2000萬元，年增利潤400萬元，年增稅收80萬元。2．確定三葉青有效成分總黃酮提取工藝并建立快速檢測技術(shù)。3．揭示三葉青有效成分與栽培條件的變異規(guī)律，為確保三葉青品質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。4．開發(fā)一批適宜賞藥兼用的三葉青生態(tài)栽培產(chǎn)品，滿足市場需要。5．發(fā)表學(xué)術(shù)論文2篇，申請專利1項。

通過本項目建設(shè)，以公司為龍頭，聯(lián)結(jié)廣大農(nóng)戶，通過“公司+基地+農(nóng)戶”的模式發(fā)展優(yōu)質(zhì)三葉青產(chǎn)業(yè)，全面利用高新技術(shù)和新品種與人工栽培生產(chǎn)新工藝等，勞動生產(chǎn)效率和資源的有效利用明顯提高，從而進一步提高三葉青產(chǎn)品的附價值。主管部門或鎮(zhèn)鄉(xiāng)、街道意見：年月日區(qū)科技局意見：年月日余杭區(qū)2012年度農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項目可行性研究報告項目名稱：野生三葉青馴化栽培、種質(zhì)篩選及開發(fā)利用承擔(dān)單位：杭州鴻越生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司合作單位：杭州職業(yè)技術(shù)學(xué)院浙江大學(xué)聯(lián)系人：鄔錫偉聯(lián)系電話子郵箱：664892801@申報日期：2012年7月13日可行性研究報告提綱一、項目概況，國內(nèi)外同類研究情況（包括技術(shù)水平）；二、市場需求、經(jīng)濟、社會、生態(tài)效益分析；三、主要研究內(nèi)容、技術(shù)關(guān)鍵；四、預(yù)期目標（主要技術(shù)、經(jīng)濟指標；應(yīng)用或產(chǎn)業(yè)化前景）；五、已有條件分析（包括原有基礎(chǔ)、技術(shù)力量的投入、科研手段和研究成果的生產(chǎn)或應(yīng)用去向）；六、實施方案（包括技術(shù)路線、進度安排）；七、投資及應(yīng)用（包括經(jīng)費來源及用途）；八、申請單位概況（包括企業(yè)規(guī)模、技術(shù)力量、設(shè)備和配套情況、企業(yè)資產(chǎn)及負債情況）。九、項目負責(zé)人與主要參加人員簡歷一、項目概況，國內(nèi)外同類研究情況（一）項目研究的背景及意義1、項目研究的重要性從新世紀開始，我國進入了全面建設(shè)小康社會加快推進社會主義現(xiàn)代化建設(shè)的新的發(fā)展階段。同時，在社會經(jīng)濟迅速發(fā)展的今天，大量野生植物資源的破壞和野蠻的采集，使野生植物種類和數(shù)量急劇下降，最終導(dǎo)致生態(tài)平衡的破壞，直接威脅著人類的生存與發(fā)展。而研究野生植物的馴化和生態(tài)栽培技術(shù)是維護生物多樣性、維持生態(tài)環(huán)境平衡、挽救瀕于滅絕的植物、保存野生植物種質(zhì)資源與開發(fā)利用的根本保證。浙江省是經(jīng)濟強省，隨著我省經(jīng)濟的迅猛發(fā)展，資源短缺，生態(tài)環(huán)境壓力加大，自然資源利用和經(jīng)濟發(fā)展之間的協(xié)調(diào)關(guān)系將顯得日益重要。我省明確提出了建設(shè)“綠色浙江”的戰(zhàn)略目標，這是全面推進我省現(xiàn)代化建設(shè)和經(jīng)濟、社會、環(huán)境可持續(xù)發(fā)展的戰(zhàn)略選擇。積極建設(shè)“綠色浙江”，推行以資源節(jié)約型、科技先導(dǎo)型、質(zhì)量效益型和清潔生產(chǎn)為特征的可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略，在全國率先建立符合可持續(xù)發(fā)展要求的良性生態(tài)環(huán)境系統(tǒng)已成為浙江省各級政府的一項重要戰(zhàn)略任務(wù)。研究藥用瀕危植物的栽培技術(shù)能正確處理自然資源利用和經(jīng)濟發(fā)展之間的關(guān)系，是實現(xiàn)可持續(xù)性發(fā)展的重要途徑。2、三葉青是我國瀕危珍稀中藥材，毒副作用少，應(yīng)用廣泛、療效確切，具有極大的開發(fā)利用潛力近年來，隨著人們保健意識的增強，對三葉青藥材的需求量日益增大。三葉青為葡萄科崖爬藤屬植物，其塊根稱為蛇附子，又稱三葉扁藤、金絲吊葫蘆等，以塊根或全草入藥，為民間常用的中草藥，具有抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛與解熱、保肝等作用，且毒副作用小、是西藥無法代替的“植物抗生素”，臨床上已廣泛用于抗癌、抗腫瘤及抗艾滋病毒等疾病。三葉青因其藥效顯著，開發(fā)潛力巨大。霍昕（2008）在三葉青塊根乙醚提取物中共分離出21個化合物，檢測出18個組分，其中含量較高的是亞油酸、棕櫚酸、油酸、二苯胺、亞麻酸甲酯和硬脂酸。李瑛琦（2003）從塊根的乙酸乙酯萃取物中分離到7個化合物。毛一亮（2008）分離到4個化合物，鑒定為：β-谷甾醇、山柰酚、槲皮素和山柰酚-3-O-新橙皮糖苷。LiuD（2002）報道從三葉青中得到一種新的黃酮碳苷。劉東（1999）從其地上部分的石油醚萃取物中分離到4個化合物：蒲公英萜酮、蒲公英萜醇、β-谷甾醇和麥角甾醇。槲皮素可誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，又可阻止非腫瘤細胞凋亡；其提取物能通過增強單核-巨噬細胞的吞噬功能而發(fā)揮抗腫瘤功能。以三葉青為主要成分的金絲地甲膠囊，可明顯抑制LEWIS肺腫瘤細胞、SMMC-7721肝腫瘤細胞、HT-60人淋巴母細胞性白血病細胞、SCG-7901胃腫瘤細胞及HCT-116結(jié)腸腫瘤細胞生長。按《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（2003版）“食品安全性毒理學(xué)評價試驗”載：“三葉青無毒，無致突變性”，其提取物對人肝癌細胞HepG2有較強的抑制作用。用三葉青研制出的一種創(chuàng)新中藥，有抑制和清除乙肝病毒，調(diào)整機體免疫、保護肝細胞、阻斷肝纖維化等作用。惡性腫瘤病人口服金芪片（含三葉青），總有效率達78.33%。以清熱解毒為主、健脾行氣活血為輔的中肝合劑（含三葉青），配合西藥治療Ⅲ期原發(fā)性肝癌，可提高患者生活質(zhì)量，延長生存期。鑒于三葉青的良好藥用價值，其進一步開發(fā)利用具有十分廣闊的前景。另外，三葉青可塑性強，三葉青是四季常綠的藤本植物，葉片細小、繁密、光亮，可根據(jù)環(huán)境和觀賞要求進行多樣化栽培和造型。陰濕的室外環(huán)境可鋪地栽植，覆蓋率很高，藤蔓生長速度快。作為盆栽，可做成普通掛盆或中小盆在室內(nèi)擺放，也可培育成特大盆供賓館、辦公大廳裝飾，長期擺放。三葉青庭園栽培表現(xiàn)抗病、少蟲害，十分耐寒。在長江以南地區(qū)，即使在室外越冬，也可完全不用任何防寒措施，室內(nèi)盆栽則可在江北地區(qū)廣泛應(yīng)用。3、三葉青野生資源急劇減少，充分利用優(yōu)良種質(zhì)資源，進行人工栽培是保障三葉青資源可持續(xù)利用、產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的必然途徑。長期以來三葉青藥材一直依賴野生資源，資源的利用方式是非再生性采挖，一方面導(dǎo)致野生三葉青資源蘊藏量急劇下降，許多傳統(tǒng)產(chǎn)區(qū)無藥可采，如不及時收集和保存，有可能導(dǎo)致滅絕；另一方面不同的產(chǎn)地野生藥材有效成分存在顯著的差異，嚴重影響三葉青的質(zhì)量。因此三葉青的馴化栽培是保障三葉青產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的必然途徑。三葉青主要生長在蔭蔽度較高的山谷、灌叢林間等腐殖質(zhì)較高的地方，在陽光直射的地方偶有生長，但生長不良，其生長環(huán)境要求相對嚴格。不同種質(zhì)其生物學(xué)特性有較大的差異，特別是其藥用部位塊莖變異幅度更大，有圓形、橢圓形、長橢圓形、葫蘆形、紡錘形或團塊狀等。三葉青的群落結(jié)構(gòu)復(fù)雜，伴生植物豐富，近年來野生資源遭受人為破壞十分嚴重，在我省的分布地已經(jīng)很狹窄，資源蘊藏急劇減少，據(jù)統(tǒng)計其藥材總蘊藏量僅有約24441.20kg，已遠遠不能滿足市場需求，價格居高不下，近幾年上漲幅度大，且有進一步攀升之趨勢。因此在加強三葉青野生資源種質(zhì)保護的同時進行三葉青馴化栽培、育種、野生撫育等方面的研究，在廣大農(nóng)村地區(qū)進行推廣種植，有利于三葉青資源的持續(xù)利用。本項目的研究旨在為擴大野生三葉青的資源，加速三葉青栽培和開發(fā)提供新技術(shù)；本研究還為開展該物種遺傳育種和保護生物學(xué)等方面的研究提供了良好的試驗基礎(chǔ)，具有廣泛的應(yīng)用前景；利用快繁技術(shù)繁殖三葉青，可以提高土地利用率開辟了新的途經(jīng)，對農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和貧困山區(qū)的經(jīng)濟發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義和長遠的歷史意義；還可以保持自然界生物多樣性向人們提供豐富的三葉青種質(zhì)資源，解決三葉青藥材來源匱乏的問題，滿足人民用藥需要，可實現(xiàn)可持續(xù)性發(fā)展。而且也可以改進市場三葉青的供應(yīng)和提高三葉青藥材的品質(zhì)，以及為相應(yīng)品種的深度系列開發(fā)提供研究基礎(chǔ)。此外，對探討藥用觀賞植物的人工馴化栽培、盆栽培養(yǎng)和快速繁殖均有一定的創(chuàng)新價值，故研究三葉青的生態(tài)栽培和快速繁殖等方面技術(shù)研究有重大的經(jīng)濟和科研價值。二、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢目前國內(nèi)外對三葉青的研究主要集中在化學(xué)成分、藥理以及生藥鑒定等方面，鐘曉明等通過研究三葉青提取物（包括總黃酮、總氨基酸及多糖成分）對CCl4致急性肝損傷小鼠的保護作用，發(fā)現(xiàn)其能夠明顯降低肝損傷小鼠ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)、AST(谷草轉(zhuǎn)氨酶)的增高，減輕肝細胞變性，炎癥浸潤及壞死等病變；降低肝中MDA(丙二醛)生成量。伍昭龍等同時開展了三葉青水煎液對CCl4致大鼠急性肝損傷的保護作用研究，研究結(jié)果表明，該中藥除能降低肝損傷大鼠血清ALT、AST及MDA水平外，還能降低ALP(堿性磷酸酶)水平；而SOD水平明顯升高?；阽姇悦鞯妊芯炕A(chǔ)，黃真和毛慶秋深入研究了三葉青總氨基酸對CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的保護作用，研究結(jié)果顯示，其能夠明顯降低急性肝損傷小鼠ALT和AST活性升高，同時還能降低肝臟指數(shù)及肝中MDA生成量，提高肝中SOD活性，減輕肝細胞變性、炎癥浸潤及壞死等病變。楊雄志采用小鼠尾靜脈注射BCG和LPS方法成功造出免疫性肝損傷模型，該模型小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶和LDH(乳酸脫氫酶)顯著升高，肝勻漿MDA的含量也顯著升高，但SOD水平明顯降低；對照病理模型組，楊雄志發(fā)現(xiàn)不同劑量的三葉青提取液給藥組小鼠血清ASTALTLDH的水平降低肝損傷不同程度減輕，研究結(jié)果表明，三葉青提取液對BCG和LPS誘導(dǎo)的小鼠免疫性肝損傷具有良好的防護作用。惡性腫瘤的治療目前在醫(yī)學(xué)界尚無理想的藥物和方法，且此類疾病藥物耐受性明顯增高，但同時中醫(yī)中藥及有關(guān)營養(yǎng)支持療法為治療惡性腫瘤開辟了新途徑。據(jù)1998年報道三葉青的乙酸乙酯溶部分主要成分為6’-0－苯甲?；}卜甙(6’－O－benzoyldau－costerol)具有一定的腫瘤抑制和抗病毒作用；丁鋼強等2005年研究發(fā)現(xiàn)，三葉青提取物中乙酸乙酯溶部分對人肝癌細胞HepG2活性具有較強的抑制作用正丁醇部分也有一定的作用，有力支持和驗證了以上研究結(jié)果。研究同時發(fā)現(xiàn)，三葉青提取物對正常原代培養(yǎng)的大鼠肝細胞活性沒有明顯的影響，對LDH活力影響也較對HepG2要小，提示三葉青的各部分提取物對正常細胞影響較腫瘤細胞要小，在此基礎(chǔ)上魏克民等2007年深入進行了三葉青抗惡性腫瘤機制的實驗研究，結(jié)果表明，三葉青提取物對人肝癌細胞HepG2活性具有較強抑制作用，研究結(jié)果再次證實三葉青提取物中乙酸乙酯溶部分的確具有很好的腫瘤細胞毒作用；魏克民等還發(fā)現(xiàn)，三葉青提取物對小鼠HepG2細胞的端粒酶基因表達有抑制作用，并有增強小鼠細胞免疫和體液免疫功能的作用，而對正常原代培養(yǎng)的大鼠肝細胞活性沒有明顯影響。臨床上令人振奮的是魏克民等用三葉青、黃芪、人參皂苷配制而成的金芪片治療惡性腫瘤120例，完全緩解52例，部分緩解42例、穩(wěn)定18例、進展8例，緩解及部分緩解共94例，總有效率78．33％；姜初明和龔黎燕采用清熱解毒為主，健脾行氣活血為輔的中肝合劑，含三葉青配合西藥治療Ⅲ期原發(fā)性肝癌，提高了Ⅲ期原發(fā)性肝癌患者生活質(zhì)量，延長了其生存時間。同時發(fā)現(xiàn)，國內(nèi)外對三葉青的生物學(xué)和栽培繁殖特性上研究的比較少，目前只有沈宗根綜觀國內(nèi)外的藥用植物栽培動態(tài)可以看出，三葉青發(fā)展正呈現(xiàn)出這樣幾個基本趨勢：三葉青生產(chǎn)消費總量在持續(xù)上升；三葉青產(chǎn)業(yè)化、科學(xué)化程度迅速提高；三葉青育種工作加強、質(zhì)量不斷提高；在重視經(jīng)濟效益的同時，兼顧社會效益和生態(tài)效益；注重研究三葉青的生物學(xué)特性，加強三葉青種植、推廣的適應(yīng)性與針對性；形成集團企業(yè)，集三葉青研究、種植、推廣、加工、銷售等等。 因此，針對三葉青馴化栽培技術(shù)研究、標準化栽培技術(shù)制定和推廣，開展三葉青有效成分的分析、三葉青種源收集、優(yōu)良種質(zhì)篩選及高效栽培研究是非常必要的。主要參考文獻：[１]國家中藥管理局《中華本草》編委會．中華本草[Ｍ]．第１３卷上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999：296-298．[２]李瑛琦，陸文超，于治國，等．三葉青的化學(xué)成分研究［J］．中草藥，2003(11):34.[３]丁剛強，鄭軍獻，魏克民，等．三葉青提取物對肝癌細胞HepG-2及原代大鼠肝細胞的體外毒性作用研究［J］．浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，17(9):122.[4]程偉,陸曙梅．三葉青提取物對肺癌A549細胞的體外抑制作用[Ｊ]．中國實驗方劑學(xué)雜志，200713（10）：53-56．[5]汪珍，馮健，王曉華等．三葉青提取物對人結(jié)腸癌細胞系RKO細胞凋亡的影響[Ｊ]．浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2008，32（3）：321-324．[6]楊學(xué)樓，羅經(jīng)，孫松柏，等．三葉青抗病毒作用的研究［J］．湖北中醫(yī)雜志，1989(4):40.[7]鐘曉明，毛慶秋，黃真，等．三葉青提取物對燙傷大鼠腸道局部和全身免疫功能的影響［J］．中藥材，2006，29(9):953.[8]]劉東，楊峻山.中國特有植物三葉青化學(xué)成分的研究.中國中藥雜志，1999，24(10):611-612.[9]魏克民，丁剛強.中草藥三葉青抗腫瘤作用機制實驗研究和臨床應(yīng)用.醫(yī)學(xué)研究雜志，2007.36(11):41一43.[10]馮正權(quán)，倪克鋒，何煜，等．三葉青黃酮誘導(dǎo)SGC-7901胃癌細胞凋亡的實驗研究［J］．中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2006，11(6):669.[11]毛一亮，張佳佳，丁萍月，等．正交設(shè)計法優(yōu)化三葉青中總黃酮的提取工藝［J］．西北藥學(xué)雜志，2008，12(28):369.[12]倪克鋒,金波,蔣福升,等.三葉青黃酮對H22荷瘤小鼠TIMP2mRNA表達的影響[J].中國中醫(yī)藥科技,2009,163:195-196.[13]徐彩菊,白寧寧,孟佳,等.三葉青提取物體內(nèi)抑瘤作用及其機理研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2009,192:278-280.[14]Cai-JuXu,Gang-QingDing,Jian-YunFu,etal.Immunoregula2toryofethyl-acetatefractionofextractsfromtetrastigmahemsleyanumdielset1gilgonimmunefunctionofICRmice[J].1BiomedEnvironSci,2008,21:325-3311.[15]McHughRS,ShevachEM1TheroleofsuppressorTcellsinregulationofimmuneresponses[J].1AllergyClinmmunol,2002,110(5):693-7021.[16]DingGangqiang,YuMing,GongWeiwei,etal1Nutrition-relateddiseaseanddeathinZhejiangProvince[J]1AsiaPacificJofClinNu-tr,2004,13(12):162-1651.二、市場需求、經(jīng)濟、社會、生態(tài)效益分析（一）市場需求分析三葉青是一種用途廣泛的中草藥，含黃酮類如槲皮素及三萜類化合物、蒲公英萜醇等重要有效化學(xué)成分，在臨床上已廣泛用于抗癌及抗艾滋病毒、治療血液病與心腦血管疾病、肝炎、腦膜炎、急性支氣管炎、肺炎、腸炎及咽喉炎、小兒外感高熱等疾病。以三葉青為主要原料成功研發(fā)的中成藥金芪片、金絲地甲膠囊是具有中國特色的新一代防治惡性腫瘤藥物，特別是三葉青的抗癌療效被發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用后，三葉青的價格飛速上漲，在市場上供不應(yīng)求，由下表可知，2006年平均價格只有85元/kｇ到2010年上漲到250元/kｇ，是2006年價格的2.9倍，上漲速度最快的是2009-2010年增長率達28％。目前，國內(nèi)外對三葉青的研究方興未艾，研究不斷深入，其藥用價值不斷被開發(fā)和利用，且野生資源日漸枯竭，栽培資源需要周期長，其價格必然會繼續(xù)攀升。2006-2010年三葉青藥材市場價格年份平均價格元/kg-1增長率/%200685-200712041200815025200918017201025028（二）經(jīng)濟、社會、生態(tài)效益分析1、經(jīng)濟效益分析本項目采用生態(tài)高效栽培，包括容器盆栽及間套種技術(shù)，試驗期間三葉青每畝可獲得凈收益20萬元，150畝三葉青實現(xiàn)凈收益3000萬元。三葉青是多年生常綠植物，一次種植科連續(xù)收獲，隨著栽培技術(shù)的提高，今后單位面積產(chǎn)量還可逐年遞增。因為三葉青高投入、高風(fēng)險、高科技，所以利潤很高，效益非常明顯。如果考慮其深加工的潛力，經(jīng)濟效益更加可觀。該項目的實施可增加產(chǎn)量60%左右，150畝每年可增加凈收益1800萬元。下圖是試驗區(qū)三葉青栽培模式：圖1三葉青高效栽培方式研究圖2三葉青套種技術(shù)研究圖3經(jīng)過篩選的三葉青栽培形成的發(fā)達的塊根2、社會效益分析(1)本項目的實施，能使我市三葉表生產(chǎn)率先實現(xiàn)集約化、標準化，從而改變了目前三葉青種植業(yè)品質(zhì)低下、技術(shù)含量低的傳統(tǒng)模式，促進我市乃至浙江省中藥材產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。(2)本項目建成至少可解決50至60人的勞動就業(yè)，同時直接帶動發(fā)展其他就業(yè)人員140人以上，并通過提供種子種苗、技術(shù)培訓(xùn)、產(chǎn)品訂合同辦證收購等方式帶動周邊中藥材生產(chǎn)基地300-500畝，對當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)增效農(nóng)民增收具有輻射和示范作用。(3)通過本項目建設(shè)，以公司為龍頭，聯(lián)結(jié)廣大農(nóng)戶，通過“公司+基地+農(nóng)戶”的模式發(fā)展優(yōu)質(zhì)三葉青產(chǎn)業(yè)，全面利用高新技術(shù)和新品種與人工栽培生產(chǎn)新工藝等，勞動生產(chǎn)效率和資源的有效利用明顯提高，從而進一步提高三葉青產(chǎn)品的附價值。3、生態(tài)效益分析項目實施后，可開發(fā)山區(qū)部分荒地復(fù)耕，提高土地的綜合利用。從耕地資源的角度看，耕地是一種極為寶貴的、不可再生的資源，這對于緩和及解決日益嚴重的耕地問題，有著深遠的意義。從種質(zhì)資源保護的角度看，公司充分研究利用當(dāng)?shù)氐闹兴幉馁Y源，保護了野生三葉青資源，有助于維護當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)平衡。項目主要研究開發(fā)內(nèi)容、技術(shù)關(guān)鍵（一）進行優(yōu)良品種質(zhì)篩選及品種選育。開展種源與無性系選擇，并篩選可大力推廣的高品質(zhì)優(yōu)良三葉青。項目采用野生種子，篩選原原種，采集種子和外植體進行人工仿野生條件下的栽培。（二）對三葉青的人工組織培養(yǎng)技術(shù)、小苗培養(yǎng)技術(shù)、改進大田栽培技術(shù)等方面進行深入探索研究。1、人工組培育苗篩選用2—3個培養(yǎng)基與原來采用的培養(yǎng)基比較、觀察后，選定最佳培養(yǎng)基進行愈傷組織培養(yǎng)、擴繁。目標要求：組培過程即由原種外植體進行組培——愈傷分裂。培養(yǎng)小苗的過程中，愈傷分裂速度加快，幼苗根系發(fā)達，分葉清爽，整個過程時間縮短7個月。2、小苗擴繁后，通過馴化煉苗達到壯苗出圃的過程中，通過假植基質(zhì)的選用、改進種植方法、嚴格控制肥水管理的同時，采用“脫離凈化條件下的自然光煉苗”的技術(shù)方法。既便于管理，出苗率由原來的70%—80%提高到90%以上，同時又能節(jié)約30%的電能，節(jié)省了成本。在2011年試驗中已得到驗證。（三）壯苗培育、生態(tài)復(fù)合間混栽培安全高效生產(chǎn)技術(shù)。栽后促早發(fā)、減少僵苗、死苗，采用種植基質(zhì)改良，調(diào)整基質(zhì)配比，進行營養(yǎng)土容器栽培。大棚排灌暢通，安裝噴灌、霧噴設(shè)備，夏天防曬防高溫，降溫安全度夏。冬天蓋膜防凍，確保安全過冬。春秋通過保護地栽培法延長三葉青生長最適溫度的時間。成品苗成活率由原來的40%—50%提高到90%。（四）通過一定的栽培環(huán)境和技術(shù)控制，保證三葉青中黃酮類有效成分的含量，達到甚至超過野生三葉青的含量水平，在保證其品質(zhì)的前提下提高單位面積產(chǎn)量，尤其大棚栽培產(chǎn)量，實現(xiàn)批量生產(chǎn)，并達到有機食品生產(chǎn)標準要求。四、預(yù)期目標（要達到的主要技術(shù)經(jīng)濟指標；自主知識產(chǎn)權(quán)申請擁有設(shè)想）（一）技術(shù)經(jīng)濟指標1、掌握和控制三葉青快速繁殖影響因子技術(shù)。2、篩選出適合三葉青組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，培養(yǎng)小苗的過程中，采用愈傷組織培養(yǎng)及最佳培養(yǎng)基配方的技術(shù)，整個過程時間縮短了6個月，組培苗移栽成活率達90%以上。3、能周年生產(chǎn)三葉青，向人們提供豐富的三葉青藥材，滿足人民用藥需要，同時也為花卉市場提供插花材料和觀葉的盆花，豐富花卉市場的種類。4、大面積地推廣三葉青種植，投入產(chǎn)出比可達1︰2～1︰3以上。5、采用生態(tài)栽培技術(shù)：不使用化學(xué)合成的肥料、農(nóng)藥、生長調(diào)節(jié)劑、添加劑、色素等，也不采用基因工程和離子輻射技術(shù)，而是遵循三葉青的自然生長規(guī)律，培肥、除草、防治病蟲害、采收和初加工，形成三葉青藥材及其產(chǎn)物安全生產(chǎn)體系。（二）應(yīng)用和產(chǎn)業(yè)化前景目前三葉青高效栽培技術(shù)已經(jīng)成為三葉青產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的最大障礙，通過本項目的研究，獲取三葉青優(yōu)質(zhì)種質(zhì)利用技術(shù)、三葉青快速繁殖技術(shù)、三葉青容器栽培技術(shù)及三葉青套種生態(tài)栽培技術(shù)，使三葉青產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)成為可能，從而滿足市場對三葉青的需求，同時可減少對其野生資源和環(huán)境的破壞，并且可獲得可觀的經(jīng)濟效益，因而具有廣泛的應(yīng)用前景。（三）預(yù)期獲取自主知識產(chǎn)權(quán)1、獲取自主知識產(chǎn)權(quán)的三葉青繁殖和栽培技術(shù)方面專利1項；2、在核心期刊發(fā)表論文3篇以上。五、項目現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)和條件（一）現(xiàn)有工作基礎(chǔ)項目組對三葉青開展了大量前期研究工作，近四年來已對三葉青種質(zhì)篩選及高效栽培方面進行前期研究，通過物候觀察，包括萌芽期、生長期、開花期、結(jié)果期以及塊根發(fā)育期等；植物學(xué)特性觀察，包括芽、葉、花、塊根習(xí)性等；抗性、耐貯性等。此外，還開展了田間栽培試驗，如培養(yǎng)土配制試驗，間套種試驗及育苗技術(shù)等。通過觀察和試驗，初步明確了三葉青能在山地不同海拔高度馴化栽培，而且隨著海拔的提高，夏季涼爽而春季回暖遲，有利于三葉青種塊根發(fā)育，田間生育期明顯延長，為爭取培育大塊根創(chuàng)造了有利條件；也明確了三葉青培育需要較大的蔭蔽度，需在蔭棚內(nèi)栽培或與喬木木混作，適合套種和間混種。（二）研究支撐條件1、研究隊伍課題組成員共有6人，其中高級職稱有3人，中級職稱3人（專職試驗員1人），對三葉青的種質(zhì)采集與鑒定、影響三葉青生長與塊根發(fā)育的試驗、組織擴繁及相關(guān)栽培實驗都能自行完成。項目組成員表姓名其他信息任全進職務(wù)（職稱）講師出生年月1969-06-13從事專業(yè)園藝工作單位杭州鴻越生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司在本項目中的分工引種馴化與品種篩選、生產(chǎn)管理夏更壽職務(wù)（職稱）高級工程師出生年月1966-05-16從事專業(yè)園藝工作單位杭州鴻越生態(tài)農(nóng)業(yè)生態(tài)有限公司在本項目中的分工生態(tài)栽培研究、田間試驗何國強職務(wù)（職稱）總經(jīng)理出生年月1975-06-18從事專業(yè)園藝工作單位杭州鴻越生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司在本項目中的分工示范基地建設(shè)、產(chǎn)品試驗示范朱巖職務(wù)（職稱）教授出生年月1962-06-20從事專業(yè)化學(xué)分析工作單位浙江大學(xué)在本項目中的分工化學(xué)檢驗與品質(zhì)評價徐明仙職務(wù)（職稱）副教授出生年月1966-03-16從事專業(yè)環(huán)境分析工作單位杭州職業(yè)技術(shù)學(xué)院在本項目中的分工生物產(chǎn)品試驗、水土環(huán)境分析2、研究實驗條件本單位具有以下實驗設(shè)備：擁有面積達5000m2植物生理實驗室和組培實驗室各一個。生物倒置顯微鏡XD101一臺。人工氣候箱SPX-250LC三臺。垂直超凈工作臺SW-CT-2FD四臺。立方式高壓滅菌鍋LDZX-40-1二臺。電子精密天平BS110S二臺。冰箱205L三臺。生化培養(yǎng)箱SPX-2501二臺。普通顯微鏡五十臺。調(diào)溫調(diào)濕箱DR302二臺。培養(yǎng)皿、錐形瓶等玻璃器皿若干。本單位具有以下試驗條件：公司始2010年，前后總投資300余萬元，進行基地建設(shè)，其中按GMP要求建設(shè)20畝的三葉青生產(chǎn)專用基地，搭建鋼架大棚60個，連棟大棚8000平方米，基地水、電、路配套。20畝三葉青基地大棚全部安裝地噴、霧噴、肥、水管網(wǎng)，進行人工智能控制。公司建有500平方米的組培工廠一座，按年生產(chǎn)能力80萬瓶設(shè)計，目前年生產(chǎn)組培苗20萬瓶左右。公司已形成一個以三葉青為重點，其他中藥材種植為輔的特色農(nóng)業(yè)生產(chǎn)基地和中草藥生產(chǎn)的科技型企業(yè)。另外，合作單位的分析測試中心具有許多現(xiàn)代化的儀器設(shè)備，能在實驗室和栽培基地完成所需的各項研究。六、實施方案（包括技術(shù)路線、進度安排）通過嚴謹、先進的實驗手段和方法，獲得可靠的實驗數(shù)據(jù)，篩選出三葉青無菌培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基和環(huán)境條件；運用生態(tài)栽培技術(shù)手段進行三葉青高效栽培，探討三葉青快速繁殖與生態(tài)栽培的環(huán)境條件和栽培基質(zhì)；建立三葉青安全生產(chǎn)及品質(zhì)保證的技術(shù)體系。本項目以三葉青種質(zhì)篩選、快速繁殖、生態(tài)栽培及活性成分分析為主線，按以下技術(shù)路線進行研究。三葉青種質(zhì)收集三葉青種質(zhì)收集種質(zhì)篩選并鑒定三葉青快速育苗技術(shù)研究三葉青高效復(fù)種技術(shù)研究三葉青生態(tài)栽培模式三葉青安全高效栽培體系與示范總結(jié)及推廣應(yīng)用三葉青活性成分分析與對比課題研究采用產(chǎn)學(xué)研結(jié)合，實施課題制管理，在課題責(zé)任人負責(zé)的基礎(chǔ)上，分“課題-子課題”兩級管理，由課題責(zé)任人負責(zé)簽訂課題分級合同，并報歸口部門備案。子課題由課題組成員分工研究。課題分解：1、三葉青種質(zhì)資源收集與優(yōu)質(zhì)種質(zhì)篩選；2、三葉青擴繁與容器栽培關(guān)鍵技術(shù)；3、三葉青復(fù)種高效生態(tài)栽培關(guān)鍵技術(shù)及不同栽培條件下活性成分分析。六、計劃進度安排本項目按照生產(chǎn)要求設(shè)計生產(chǎn)工藝，實行規(guī)范化操作，嚴格，按照科學(xué)選種、科學(xué)培育、科學(xué)用藥、科學(xué)管理等工藝技術(shù)方案，確保項目提供的三葉青品種好、質(zhì)量高、效益好。2012.05—2012.121、進行優(yōu)良種質(zhì)選育。開展種源與無性系選擇，并篩選可大力推廣的高品質(zhì)優(yōu)良三葉青種苗。項目采用野生種子，篩選原原種，采集種子和外植體進行人工仿野生條件下馴化栽培。2、采集種子或外植體進行組織培養(yǎng)，篩選用2—3個培養(yǎng)基進行。觀察后選定最佳培養(yǎng)基進行愈傷組織培養(yǎng)、擴繁。3、中藥材GAP種植準備：選擇周圍無污染源土地，進行大氣、水質(zhì)、土壤的檢測，達到環(huán)保標準。（浙江省無公害蔬菜標準）4、設(shè)計實施三葉青生態(tài)種植模式。2013.1—2013.91、進行脫離凈化條件下的自然光煉苗。2、開展三葉青種植方法和肥水管理的研究。3、人工栽培三葉青與野生三葉青活性成分分析研究，確定優(yōu)質(zhì)三葉青生產(chǎn)和質(zhì)量控制指標。2013.10—2014.51、進行大田栽培，培育管理。2、開展三葉青培養(yǎng)土配比、適應(yīng)的有機肥料和病蟲害防治的研究。3、利用優(yōu)質(zhì)三葉青質(zhì)控指標，于花前、花期和花后等分別測定質(zhì)量變化，使采收更合理。4、三葉青生態(tài)栽培光溫濕度控制研究，確保三葉青最適生長環(huán)境。5、噴滴灌系統(tǒng)設(shè)施安裝，保證供水及時、安全、節(jié)能。6、測土配方施肥。通過設(shè)計理想的配方肥(包括專用復(fù)合肥、系列專用復(fù)合肥)，實現(xiàn)養(yǎng)分的平衡。7、進行重金屬、農(nóng)藥殘留量與微生物檢測。8、三葉青優(yōu)質(zhì)品系栽培生理與光合生理研究，三葉青高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)栽培技術(shù)體系研究。9、項目驗收，課題總結(jié)。七、項目預(yù)算（包括經(jīng)費來源及用途）項目經(jīng)費預(yù)算如下：杭州市科技局經(jīng)費20萬元，經(jīng)費主要用于購買試驗材料、試驗外協(xié)、資料印刷、會議、調(diào)研、人員勞務(wù)、管理等。附表：市級科技計劃項目經(jīng)費概算表項目名稱：金額單位：萬元序號概算科目名稱合計市財政撥款經(jīng)費地方部門配套經(jīng)費自籌經(jīng)費（1）（2）（3）（4）（5）1一、經(jīng)費支出（合計）202021、設(shè)備費03（1）購置設(shè)備費4（2）試制設(shè)備費5（3）設(shè)備租賃費62、材料費6.073、測試化驗加工費2.084、燃料動力費1.095、差旅費1.0106、會議費1.0117、合作、協(xié)作研究與交流費2.0128、出版/文獻/信息傳播/知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)費1.0139、人員勞務(wù)費2.01410、專家咨詢費1.01511、管理費1.01612、其他開支2.01二、經(jīng)費來源（合計）2021、申請市財政經(jīng)費2032、地方、部門配套撥款43、自籌經(jīng)費5（1）單位自有貨幣資金6（2）其他資金八、申請單位概況項目主持單位是一家集科研、生產(chǎn)、銷售、技術(shù)服務(wù)于一體的規(guī)模化專業(yè)型農(nóng)業(yè)科技企業(yè)。公司組建有一批技術(shù)力量雄厚，管理科學(xué)，人才精銳的活力團隊，公司把握現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)展方向，加快科技成果產(chǎn)業(yè)化進程，努力使產(chǎn)品技術(shù)處于同行前列。近年來公司一直致力于藥賞兼用植物資源及其系列產(chǎn)品的研制與開發(fā)工作，并應(yīng)用現(xiàn)代生物工程技術(shù)對三葉青、白背三七等植物進行馴化和培植，逐步形成產(chǎn)業(yè)化規(guī)模。公司已建立了藥賞兼用植物標準化種植基地，全面開展從育種、人工繁育、仿野生有機栽培、肥料比對、現(xiàn)代炮制工藝等一系列研究，在種子收集、精心育種、克隆組培，到生態(tài)有機栽培、性狀鑒定、顯微鑒定，再到產(chǎn)品研發(fā)、質(zhì)量控制、有效成分檢測等各個方面都取得了突破性的成果，實現(xiàn)公司產(chǎn)品培育種植的科學(xué)化、標準化、產(chǎn)業(yè)化，年銷售額在300萬以上。項目合作單位之一是全國優(yōu)秀高等職業(yè)技術(shù)學(xué)院，是集產(chǎn)學(xué)研一體化，為地方經(jīng)濟社會發(fā)展提供科技支撐和人才的場所。近幾年來,該學(xué)院積極承擔(dān)地方多家企業(yè)、科研所等的技術(shù)服務(wù)、技術(shù)指導(dǎo)工作。擁有實驗實訓(xùn)室95個，實訓(xùn)中心7個，校內(nèi)生產(chǎn)性實訓(xùn)基地、校外實訓(xùn)基地100多個，教學(xué)儀器設(shè)備2870多萬元；實驗室擁有完成本項目研究所需的大型儀器，如高效液相色譜儀、氣相色譜儀、原子吸收分光光度計、熒光分光光度計、冷凍高速離心機等一批先進檢測設(shè)備設(shè)施。項目合作單位之二是本省的一所省部共建綜合性大學(xué)，其與本課題相關(guān)的條件基礎(chǔ)包括：建有浙江省新藥創(chuàng)制科技服務(wù)平臺、浙江省制藥科技創(chuàng)新基地（即浙江省重中之重學(xué)科－總建設(shè)經(jīng)費4000萬）、國家中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)（浙江）基地－現(xiàn)代中藥制劑研究中心、擁有浙江省制藥工程重點實驗室、制藥工程省部共建教育部重點實驗室、國家綠色化學(xué)重點實驗室培育基地（藥物綠色合成方向）等良好的學(xué)科及科研平臺。擁有“制藥工程”、“生物化工”和“環(huán)境工程”等3個浙江省“重中之重”學(xué)科，擁有“生物化工”、“藥物化學(xué)”等3個博士點。目前已投入建設(shè)經(jīng)費2000萬元，現(xiàn)有實驗用房1300多平方。擁有系列先進的儀器設(shè)備，如傅立葉變換紅外光譜儀、液-質(zhì)聯(lián)用儀、400兆核磁共振儀、高效液相色譜儀、氣相色譜儀、旋光光度儀、紫外分光光度計、數(shù)字式熔點儀等；擁有較完備的用于中藥分離制備和衍生化研究的各種儀器材料，并擁有了各型常規(guī)制備色譜、中壓制備色譜、各型葡聚糖凝膠色譜（DEAE、Sephdex）、反相制備色譜（RP-4、RP-18），高效液相色譜、逆流色譜和組合快速制備色譜；制劑實驗室擁有的儀器設(shè)備如智能溶出試驗儀、片劑硬度計、粉碎機、片劑脆碎檢查儀、濕法混合制粒機、微型顆粒機、單沖壓片機、無級變速包衣機等，藥理實驗室擁有的儀器設(shè)備如熒光酶標儀、Uv1601分光光度計、高速離心機、超速離心機、CO2培養(yǎng)箱、超凈工作臺等。九、項目負責(zé)人及主要參加人員的簡歷課題組成員為老中青年學(xué)者，年齡結(jié)構(gòu)合理。其中高級職稱3人，中級3人，有豐富的研究經(jīng)歷，對野生資源的調(diào)查與收集、引種栽培、種源對比試驗，有效成分分析及推廣等均能自行完成。項目負責(zé)人，高級工程師。從事中藥化學(xué)研究與生物制藥工作。主要從事藥用植物中生物活性成分的提取分離等基礎(chǔ)研究工作。主持、參加?。ú浚?、市(廳)級等科研項目3項，發(fā)表論文20余篇，其中在國外雜志上發(fā)表論文三篇，被SCI收錄五篇、EI收錄一篇、一級期刊二篇。項目主要參加人員之一已經(jīng)從事20余年的色譜分離研究工作，已經(jīng)發(fā)表相關(guān)的論文一百五十多篇，其中五十余篇被SCI收錄（30余篇論文影響因子大于3），大部分是第一作者或通訊作者，研究成果曾獲得日本化學(xué)會離子色譜成就獎，化工部科技進步三等獎，浙江省科技進步三等獎和浙江省青年科技獎，2006年入選“浙江省新世紀151人才工程”第二層次，現(xiàn)為中國分析儀器學(xué)會常務(wù)理事，離子色譜專業(yè)委員會副主任委員、浙江省微量元素與健康研究會副理事長，《色譜》、《生命科學(xué)儀器》雜志編委，也是《JournalofChromatographyA》、《Talanta》、《JournalofSeparationScience》、《AnalyticaChimicaActa》國際知名分析化學(xué)刊物等的審稿人。項目主要參加人員之二農(nóng)藝師，從事作物栽培科研工作三十余年，先后主持和參加了《全年三熟高產(chǎn)綜合配套技術(shù)研究》、《黑麥草引種及推廣》等項目，獲省、市（地）科研成果、推廣成果、星火獎等3項，在省級以上專業(yè)刊物發(fā)表論文多篇，近年來，開展中藥材——三葉青的引種、試驗及推廣工作。承諾書申報單位承諾：1、本項目申請書中所填寫的各欄目內(nèi)容真實、準確。2、提供的技術(shù)文件和資料真實、可靠，未侵犯他人的知識產(chǎn)權(quán)。若發(fā)生與上述承諾相違背的事實，由本項目申報單位及申報人承擔(dān)全部法律責(zé)任。項目負責(zé)人簽字：申報單位（蓋?。?012年7月13日

目錄TOC\o"1-2"\h\z第1章總論 11.1項目提要 11.2可行性研究依據(jù) 41.3主要技術(shù)經(jīng)濟指標 4第2章項目背景 -6-2.1項目背景 -6-2.2項目必要性分析 -8-2.3項目可行性分析 -11-第3章建設(shè)單位與技術(shù)依托單位概況 133.1建設(shè)單位基本情況 133.2技術(shù)依托單位基本情況 13第4章項目點布局與建設(shè)條件 154.1項目點選址原則 154.2項目點布局 154.3項目建設(shè)條件 16第5章項目建設(shè)方案 185.1建設(shè)目標 185.2建設(shè)原則 185.3建設(shè)內(nèi)容與規(guī)模 195.4項目建設(shè)實施進度 20第6章投資估算與資金籌措 226.1投資估算依據(jù) 226.2投資估算 22第7章效益分析 257.1經(jīng)濟效益 257.2社會效益 257.3生態(tài)效益 267.4風(fēng)險評估 26第8章環(huán)境保護與安全生產(chǎn) 288.1環(huán)境保護 28HYPERLINK"file:///F:\\準備修改傳百度文檔\\項目書4