固定化酶與固定化細(xì)胞

固定化酶與固定化細(xì)胞1第1頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月本章講授①固定化生物催化劑的概念以及吸附法、包埋法、共價(jià)結(jié)合法、無載體固定化酶的基本技術(shù)和原理；②細(xì)胞固定化的基本技術(shù)和原理；③簡(jiǎn)要介紹固定化酶基本性質(zhì)的影響及輔因子的固定化方法和輔酶的再生體系。2第2頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月3第3頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月1.酶是蛋白質(zhì)，穩(wěn)定性差（熱、酸堿、有機(jī)溶劑對(duì)其有影響）。2.不能回收，使用成本高。3.酶在游離體系中更容易自水解4.分離純化困難，也使產(chǎn)物中混雜酶蛋白

游離酶的缺點(diǎn)：4第4頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月固定化酶（定義）：用物理或化學(xué)手段定位在限定的空間區(qū)域，并使其保持催化活性，可重復(fù)利用的酶。（1971年在美國(guó)召開的第一屆國(guó)際酶工程會(huì)議）固定化細(xì)胞（定義）：將具有一定生理功能的生物細(xì)胞（如微生物細(xì)胞、植物細(xì)胞或動(dòng)物細(xì)胞等），用一定的方法將其固定，作為固體生物催化劑而加以利用的一門技術(shù)。固定化細(xì)胞意義：用完整的細(xì)胞作為生物催化劑，以充分有效地利用生物細(xì)胞內(nèi)的特定酶或多酶系統(tǒng)。5第5頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)點(diǎn)①省去對(duì)酶的提取過程，使酶的損失和生產(chǎn)成本降到最低程度；②可以利用細(xì)胞的多酶系統(tǒng)直接生產(chǎn)有價(jià)值的產(chǎn)物。6第6頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)酶和細(xì)胞的固定化一、固定化酶和細(xì)胞的定義及特點(diǎn)二、固定化方法三細(xì)胞的固定化方法四原生質(zhì)體的固定化方法7第7頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月一、固定化酶和細(xì)胞的定義及特點(diǎn)

1.固定化酶(immobilizedenzyme)

通過化學(xué)或物理的手段將酶定位于限定的空間區(qū)域內(nèi)，使其保持活性并可反復(fù)利用。

8第8頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月什么是固定化酶？水溶性酶水不溶性載體水不溶性酶（固定化酶）固定化技術(shù)9第9頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月酶固定化方法要求①不破壞酶活性中心的構(gòu)象：酶的固定化不能破壞酶活性中心的構(gòu)象，盡量防止活性部位的氨基酸殘基受到影響；②載體要求：a.固定化的載體應(yīng)與酶結(jié)合較為牢固。B.載體不能與底物、產(chǎn)物等發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。C.載體必須有一定的機(jī)械強(qiáng)度，防止因機(jī)械攪拌而破碎。③位阻應(yīng)該較?。罕M可能不妨礙酶與底物的接近。④成本低：酶固定化的成本要盡可能的低。10第10頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)點(diǎn)：(1)可提高穩(wěn)定性。(2)能回收，易與產(chǎn)物分離，可反復(fù)使用。缺點(diǎn)：(1)存在擴(kuò)散限制。適于催化小分子物質(zhì)。(2)酶活性下降。11第11頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

2.固定化細(xì)胞（immobilizedcell）固定在載體上并在一定空間范圍內(nèi)進(jìn)行生命活動(dòng)（生長(zhǎng)、繁殖、新陳代謝）的細(xì)胞。12第12頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)越性：(1)降低成本，省去酶的分離純化工作;(2)既可作為單一酶，也可作為復(fù)合酶系完成部分代謝過程。局限性：(1)細(xì)胞內(nèi)多種酶的存在，會(huì)形成不需要的副產(chǎn)物。(2)細(xì)胞膜、細(xì)胞壁和載體都存在著擴(kuò)散限制作用。13第13頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月3.固定化原生質(zhì)體意義：(1)固定化原生質(zhì)體去除了細(xì)胞壁的擴(kuò)散障礙，有利于氧的傳遞，營(yíng)養(yǎng)成分的吸收和胞內(nèi)產(chǎn)物的分泌。(2)原生質(zhì)體不穩(wěn)定，容易破裂，固定化后，由于載體的保護(hù)作用，穩(wěn)定性提高。14第14頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

二、固定化方法固定化方法（一）酶的固定化方法吸附法共價(jià)偶聯(lián)法交聯(lián)法包埋法網(wǎng)格型微囊型離子交換吸附物理吸附法15第15頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月依據(jù)帶電的酶或細(xì)胞和載體之間的靜電作用，使酶吸附于惰性固體的表面或離子交換劑上。1.吸附法（adsorption）16第16頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月根據(jù)吸附劑的特點(diǎn)分:1）物理吸附法（physicaladsortion）作用力：氫鍵、疏水鍵常用載體：氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅膠、羥基磷灰石、纖維素等。2）離子結(jié)合法（ionbinding）作用力：離子鍵常用載體：DEAE-纖維素、DEAE-葡聚糖凝膠、CM-

纖維素17第17頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)點(diǎn)：條件溫和，操作簡(jiǎn)便，酶活力損失少。缺點(diǎn)：結(jié)合力弱，易解吸附。18第18頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

借助共價(jià)鍵將酶的活性非必需側(cè)鏈基團(tuán)和載體的功能基團(tuán)進(jìn)行偶聯(lián)。2.共價(jià)偶聯(lián)法（covalentbindingorcovalentcoupling）

19第19頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月1）載體：親水載體優(yōu)于疏水載體

如:天然高分子衍生物:

纖維素葡聚糖凝膠親和性好，機(jī)械性能差瓊脂糖

合成聚合物：聚丙烯酰胺 聚苯乙烯機(jī)械性能好，但有疏水結(jié)構(gòu)尼龍20第20頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月2）偶聯(lián)方法：偶聯(lián)成功與否取決于： 載體：功能基團(tuán)：芳香氨基，羧基，羧甲基等。酶分子:側(cè)鏈非必需基團(tuán)：羧基，巰基，羥基，酚基，咪唑基。 21第21頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月常用的偶聯(lián)反應(yīng)有：重氮化法、疊氮法、溴化氰法、烷基化法等。22第22頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)點(diǎn)：酶與載體結(jié)合牢固，不會(huì)輕易脫落，可連續(xù)使用。缺點(diǎn)：反應(yīng)條件較激烈，易影響酶的空間構(gòu)象而影響酶的催化活性。

23第23頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月3.交聯(lián)法（crosslinking）借助雙功能試劑使酶分子之間發(fā)生交聯(lián)的固定化方法。雙功能試劑：

常用的是戊二醛

O

O H—C—CH2—CH2—

CH2—

C—H24第24頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

戊二醛有兩個(gè)醛基，均可與酶或蛋白質(zhì)的游離氨基反應(yīng),使酶蛋白交聯(lián)。

此法與共價(jià)偶聯(lián)法利用的均是共價(jià)鍵，不同之處：交聯(lián)法不使用載體。25第25頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

交聯(lián)反應(yīng)既能發(fā)生在分子間，也可發(fā)生在分子內(nèi)。酶濃度低時(shí)，交聯(lián)發(fā)生在分子內(nèi)，酶仍保持溶解狀態(tài)。酶濃度高時(shí)，交聯(lián)發(fā)生在分子間，酶變?yōu)椴蝗軕B(tài)。26第26頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月缺點(diǎn)：(1)反應(yīng)條件激烈，酶分子的多個(gè)基團(tuán)被交聯(lián)，酶活力損失大。(2)制備的固定化酶顆粒較小，給使用帶來不便。

27第27頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月4.包埋法（entrapment）

將酶用物理的方法包埋在各種載體（高聚物）內(nèi)。分為：網(wǎng)格型：將酶包埋在高分子凝膠細(xì)微網(wǎng)格中。微囊型：將酶包埋在高分子半透膜中。28第28頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月1）網(wǎng)格型包埋法（gel(lattic)entrapment）又稱凝膠包埋法凝膠包埋條件酶活性強(qiáng)度天然凝膠瓊脂、海藻酸鈣、角叉菜膠、明膠溫和不變差合成凝膠聚丙烯酰胺、光交聯(lián)樹脂聚合反應(yīng)部分失活高使用的多孔載體及其特點(diǎn)29第29頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月海藻酸鈣凝膠包埋法：滴至海藻酸鈉溶液＋E(orcell)CaCl2溶液中IE(orIC)

角叉菜膠包埋法：滴至角叉菜膠＋E(orcell)KCl

溶液中IE(orIC)聚丙烯酰胺凝膠包埋法：

APAcr+Bis+E(orcell)IE(orIC)TEMED30第30頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月2）微囊型包埋法（microencapsulation）又稱半透膜包埋法將一定量酶液包在半透性的高分子微孔膜內(nèi)。

半透膜：直徑幾十微米到幾百微米，厚約25nm。半透膜孔徑<酶分子孔徑，小于半透膜孔徑的小分子底物和產(chǎn)物可以自由進(jìn)出，被稱為“人工細(xì)胞”。31第31頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月與網(wǎng)格型包埋法相比，微囊型包埋法的優(yōu)點(diǎn)：1）固定化酶顆粒小，有利于底物和產(chǎn)物擴(kuò)散。2）半透膜能阻止蛋白質(zhì)分子滲漏和進(jìn)入，注入體內(nèi)既可避免引起免疫過敏反應(yīng)，也可使酶免遭蛋白水解酶的降解，具有較大的醫(yī)學(xué)價(jià)值。

缺點(diǎn)：反應(yīng)條件要求高,制備成本也較高。

32第32頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

包埋法是目前應(yīng)用最多的一種較理想的方法，與其它固定化方法相比：優(yōu)點(diǎn)：不與酶蛋白氨基酸殘基反應(yīng)，很少改變酶的高級(jí)結(jié)構(gòu)，酶活回收率高。缺點(diǎn)：只適合作用于小分子底物和產(chǎn)物的酶。33第33頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

吸附法共價(jià)偶聯(lián)法交聯(lián)法包埋法

酶的四種固定化方法34第34頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月35第35頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月36第36頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月固定化方法吸附法包埋法共價(jià)結(jié)合法交聯(lián)法物理吸附法離子吸附法制備難易易易較難難較難結(jié)合程度弱中等強(qiáng)強(qiáng)強(qiáng)活力回收高，酶易流失高高低中等再生可能可能不能不能不能費(fèi)用低低低高中等底物專一性不變不變不變可變可變各種固定化方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較37第37頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月三細(xì)胞的固定化方法1.固定化細(xì)胞的分類2.固定化方法38第38頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月分類方式固定化細(xì)胞分類方式固定化細(xì)胞細(xì)胞類型微生物植物動(dòng)物生理狀態(tài)死細(xì)胞:完整細(xì)胞,細(xì)胞碎片,細(xì)胞器活細(xì)胞:增殖細(xì)胞,靜止細(xì)胞,饑餓細(xì)胞1.固定化細(xì)胞的分類39第39頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

1)直接固定法

不使用載體，借助物理（如加熱、冰凍）、化學(xué)方法（如檸檬酸、各種絮凝劑）將細(xì)胞直接固定。一般只用于單酶或少數(shù)幾種酶催化的反應(yīng)。

2)吸附法

3)包埋法

2.固定化方法40第40頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

例如：葡萄糖異構(gòu)酶(白色鏈霉菌)，是一種胞內(nèi)酶。在50--80℃加熱10分鐘，使菌體自溶作用的酶失活，而葡萄糖異構(gòu)酶仍然保持活性，長(zhǎng)期使用酶活力不減少。41第41頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

微生物細(xì)胞植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞

吸附法吸附力較弱，細(xì)胞易脫落包埋法42第42頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月實(shí)驗(yàn)：

2.4%左右的卡拉膠，70℃溶解,再冷卻到42℃,+10%左右的細(xì)菌菌體(預(yù)熱到42℃）

迅速混合均勻

4℃冰箱放置大約30min

取出后切成3×3mm的小顆粒

43第43頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

一般采用網(wǎng)格包埋法（即凝膠包埋法）。常用凝膠：瓊脂凝膠，海藻酸鈣凝膠，角叉菜膠和光交聯(lián)樹脂。注意：一般要加滲透壓穩(wěn)定劑，以防止原生質(zhì)體破裂。四原生質(zhì)體的固定化方法44第44頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

第二節(jié)

固定化酶和固定化細(xì)胞的性質(zhì)與表征一、固定化酶的性質(zhì)二、固定化細(xì)胞的性質(zhì)三、固定化酶（細(xì)胞）的評(píng)價(jià)指標(biāo)45第45頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月一、固定化酶的性質(zhì)影響酶催化活性的因素

1.構(gòu)象改變或立體屏蔽以及微擾

2.分配效應(yīng)和擴(kuò)散限制效應(yīng)（一）酶的活性（二）酶的穩(wěn)定性（三）酶的最適溫度（四）酶的最適pH（五）酶的動(dòng)力學(xué)特征（六）酶的作用專一性46第46頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月47第47頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月48第48頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

（一）酶的活性：

通常低于天然酶（有例外）。

（二）酶的穩(wěn)定性酶的耐熱性、對(duì)變性劑、抑制劑、蛋白酶的抵抗力增加。49第49頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

可能的原因：①固定化增加了酶活性構(gòu)象的牢固程度，可防止酶分子伸展變形；②抑制酶的自身降解。③固定化部分阻擋了外界不利因素對(duì)酶的侵襲。50第50頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月如：氨基?；?，70℃，15分鐘，酶失去活性。而固定化后，70℃，15分鐘，有>80%活性。51第51頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

（三）酶的最適溫度

最適溫度與酶穩(wěn)定性有關(guān)。多數(shù)酶固定化后熱穩(wěn)定性上升，最適溫度也上升（有例外）。

（四）酶的最適pH

帶負(fù)電荷載體：最適pH向堿性偏移。帶正電荷載體：最適pH向酸性偏移。52第52頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月53第53頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

固定化酶的表觀米氏常數(shù)Km隨載體的帶電性能變化。固定化載體與底物電荷相反,固定化酶的表觀Km值降低。固定化載體與底物電荷相同,固定化酶的表觀Km值顯著增加。（五）酶的動(dòng)力學(xué)特征54第54頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

與自然酶基本相同。但大分子底物難于接近酶分子，導(dǎo)致酶的專一性發(fā)生改變。（六）酶的作用專一性

55第55頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

與固定化酶相比，固定化細(xì)胞的情況比較復(fù)雜。（1）有活性升高的現(xiàn)象。（2）穩(wěn)定性的增加。（3）最適溫度和最適pH常保持不變。二、固定化細(xì)胞的性質(zhì)

56第56頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

(一)酶(細(xì)胞)的活力

固定化酶通常呈顆粒狀，一般用于測(cè)定自然酶活力的方法改進(jìn)后才能用于測(cè)定固定化酶。

(二)蛋白總量

1.雙辛可寧酸法(BCA法)2.考馬斯亮藍(lán)法

三、固定化酶（細(xì)胞）的評(píng)價(jià)指標(biāo)

57第57頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

(三)偶聯(lián)率及相對(duì)活力

偶聯(lián)率=(加入蛋白活力一上清液蛋白活力)/加入蛋白活力×100%活力回收=固定化酶總活力/加入酶的總活力×100%相對(duì)活力=固定化酶總活力/(加入酶的總活力-上清液中未偶聯(lián)酶活力)×100%58第58頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

(四)半衰期

在連續(xù)測(cè)定條件下，固定化酶(細(xì)胞)的活力下降為最初活力一半所經(jīng)歷的連續(xù)工作時(shí)間，以t1/2表示。是衡量穩(wěn)定性的一項(xiàng)重要指標(biāo)。59第59頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月不同固定化方法的比較carriersRecoveryofenzymeactivity(%)Agar54.0po1yacrvlamldel5.24Gelatin40.77carragheenan69.13Glutaraldehyde060第60頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)固定化酶與固定化細(xì)胞的應(yīng)用一、在工業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用二、固定化酶在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用三、在分析檢測(cè)中的應(yīng)用61第61頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月乙酰-DL—AlaL—Ala+乙酸 乙酰-D—Ala

一、在工業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用

1.氨基酰化酶（Aminoacylase）世界上第一種工業(yè)化生產(chǎn)的固定化酶62第62頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月泵儲(chǔ)罐反應(yīng)產(chǎn)物離心機(jī)消旋反應(yīng)器固定化酶柱子晶體L-AlaL-AlaA-D-AlaA-L-AlaA-D-Ala63第63頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

2.葡萄糖異構(gòu)酶世界上生產(chǎn)規(guī)模最大，應(yīng)用最為成功的一種固定化酶。64第64頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月二、固定化酶在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用

1.消血栓：纖溶酶是異源蛋白質(zhì)，在人體內(nèi)引起免疫反應(yīng)，無法長(zhǎng)期使用。酶的不穩(wěn)定性使其在較短的時(shí)間內(nèi)失活。用包埋法制備的酶固定化技術(shù)可克服上述弊端，酶在囊中不能漏出，小分子物質(zhì)能自由進(jìn)出。65第65頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月2.人工腎：原理：將病人血液中的尿素經(jīng)脲酶水解成氨，再用活性炭吸附。即：用固定化脲酶和微膠囊活性炭組成人工腎。66第66頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月67第67頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月酶?jìng)鞲衅?/p>

固定化酶和電化學(xué)傳感器的結(jié)合。優(yōu)點(diǎn)：①既有不溶性酶體系的優(yōu)點(diǎn)，又具有電化學(xué)電極的高靈敏度；②酶的專一反應(yīng)性，使其具有較高的選擇性，能夠直接在復(fù)雜試樣中進(jìn)行測(cè)定。三、在分析檢測(cè)中的應(yīng)用68第68頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月SensitiveandspecificRapidSimpleBiosensor69第69頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

1967年Updike等采用酶的固定化技術(shù)，將葡萄糖氧化酶固定在疏水膜上，然后再和氧電極結(jié)合，組裝成了世界上第一個(gè)生物傳感器——葡萄糖氧化酶電極。70第70頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

葡萄糖酶電極

酶電極示意圖?－D－葡萄糖＋O2 D－葡萄糖酸－1，5－內(nèi)酯＋H2O2半透膜酶膠層感應(yīng)電極71第71頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月GlucoseGluconicacidGlucoseoxidaseOxygenHydrogenperoxideMembraneElectrode

根據(jù)反應(yīng)中消耗的O2、生成的葡萄糖酸和H2O2的量，可以用氧電極、pH電極和H2O2電極來測(cè)定葡萄糖的含量。72第72頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月繼酶?jìng)鞲衅鳎╡nzymesensor）后，又出現(xiàn)：細(xì)胞器傳感器（cellorganellesensor）組織傳感器（tissuesensor）微生物傳感器（microbesensor）免疫傳感器（immunosensor）73第73頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月1）酶?jìng)鞲衅鞯脑砩飩鞲衅?/p>

由生物識(shí)別單元（如酶、微生物、抗體等）和物理轉(zhuǎn)換器相結(jié)合所構(gòu)成的分析儀器。74第74頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月75第75頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月生物識(shí)別元件

(Biologicalrecognitionelement)

是酶、抗原(體)、細(xì)胞器、組織切片和微生物細(xì)胞等生物分子經(jīng)固定化后形成的一種膜結(jié)構(gòu)，對(duì)被測(cè)定的物質(zhì)有選擇性的分子識(shí)別能力。76第76頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月

換能器(Transducer)

將識(shí)別元件上進(jìn)行的生化反應(yīng)中消耗或生成的化學(xué)物質(zhì)，或產(chǎn)生的光或熱等轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，并呈現(xiàn)一定的比例關(guān)系。77第77頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月78第78頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月酶?jìng)鞲衅鞴ぷ髟硎疽鈭D酶?jìng)鞲衅髦饕晒潭ɑ改ず妥儞Q器組成：固定化酶膜：選擇性地“識(shí)別”并催化被檢測(cè)物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；變換器：把催化反應(yīng)中底物或產(chǎn)物的變量轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，通過儀表顯示出來。

79第79頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月80第80頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月2）酶?jìng)鞲衅鞯膽?yīng)用

水質(zhì)監(jiān)測(cè)

用化學(xué)法測(cè)定酚時(shí)，硫化物、油類等可干擾其測(cè)定。從馬鈴薯中提純、經(jīng)吸附交聯(lián)得到的固定化多酚氧化酶與氧電極構(gòu)成酚傳感器，可檢測(cè)大多數(shù)酚類化合物。81第81頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年2月德國(guó)研發(fā)的環(huán)境廢水BOD分析儀82第82頁，課件共91頁，創(chuàng)作于2023年