有機(jī)試劑熒光試劑

有機(jī)試劑熒光試劑第1頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光產(chǎn)生的理論基礎(chǔ)基態(tài)和激發(fā)態(tài)單重態(tài)（S)和三重態(tài)(T)第2頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜λem>λex

斯托克斯（stokes）位移第3頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光強(qiáng)度、熒光量子產(chǎn)率和熒光壽命熒光強(qiáng)度

F=2.3ФFIoεbc

F—熒光強(qiáng)度；ФF—熒光量子產(chǎn)率，Io—照射到被測物質(zhì)上的光強(qiáng)度；ε—該物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)；b—檢測池厚度；c—物質(zhì)濃度

第4頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光量子產(chǎn)率第5頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光量子產(chǎn)率與熒光強(qiáng)度的區(qū)別熒光量子產(chǎn)率是熒光物質(zhì)的固有屬性其與物質(zhì)濃度無關(guān)熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度有密切關(guān)系同濃度下，熒光量子產(chǎn)率高的熒光越強(qiáng)（排出外界條件影響）第6頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第7頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光壽命熒光壽命（τ）

lnFo-lnFτ=-t/τFo和Fτ分別代表t=0和t=τ時的熒光強(qiáng)度，通過實(shí)驗(yàn)測量不同時間的Ft值，確定lnFt—t的關(guān)系曲線，應(yīng)為直線直線斜率就是熒光壽命用式子τ=10-5/εmax估計(jì)熒光壽命，εmax為最大吸收波長下的摩爾吸光系數(shù)，如S0-S1躍遷的ε值一般為103，估計(jì)熒光壽命是10-8s.第8頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月影響有機(jī)化合物熒光的有機(jī)試劑結(jié)構(gòu)因素分子共軛體系共軛大π鍵共平面程度及其剛性.取代基影響雜原子影響分子離子化對熒光的影響立體結(jié)構(gòu)第9頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月分子共軛體系大小對熒光的影響

有機(jī)熒光團(tuán)能發(fā)射出熒光的共軛π鍵的基團(tuán)（-CH=CH-）n（n>2），苯，萘，對苯二醌，苯并雜環(huán)、吡喃酮以及占噸酮基團(tuán)共軛體系越大，熒光量子強(qiáng)度越高第10頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第11頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月對于稠環(huán)芳烴，具有相同芳香環(huán)數(shù)的化合物，芳環(huán)的連接和排列順序不同，化合物的有關(guān)熒光性能也不同芳環(huán)直線性排列的化合物的熒光發(fā)射波長比非線性排列的波長要長芳香環(huán)數(shù)越多，共軛體系越大，熒光越強(qiáng)芳香環(huán)或共軛體系增加到一定程度，只是熒光發(fā)射波長向長波紅移，ФF不再增加，還可能降低第12頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第13頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月共軛大π鍵共平面及其剛性的影響

有機(jī)分子具有共軛平面結(jié)構(gòu)才顯示出熒光特性分子的共軛體系必須具備共平面性共軛體系的平面結(jié)構(gòu)還要有一定程度的剛性第14頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第15頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第16頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第17頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月取代基的影響

取代基種類的影響取代基有推電子取代基和吸電子取代基推電子取代基：-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR（R=-CH3、-C2H5等吸電子取代基：C=O、-NO2，-COOH，-CHO、-COR（R=-CH3，-C2H5等）、-N=N-、鹵素（-F，Cl，Br，I）等推電子取代基增強(qiáng)熒光第18頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月推電子取代基增強(qiáng)熒光取代基中O或N上的孤對電子參與有機(jī)熒光分子的共軛大π鍵，擴(kuò)大共軛體系波長紅移，熒光強(qiáng)度明顯增加極性溶劑中易形成氫鍵，強(qiáng)酸中易質(zhì)子化，堿性介質(zhì)中可離解出H質(zhì)子化試劑分子帶正電，使熒光減弱離解出H試劑分子帶負(fù)電荷，熒光增強(qiáng)第19頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第20頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月

吸電子取代基減弱熒光類取代基中的n電子躍遷到π*屬于禁阻躍遷，激發(fā)態(tài)分子數(shù)較少

S1－T1的體系間跨越占優(yōu)勢，激發(fā)態(tài)分子放出光子的數(shù)大為減少，使熒光減弱－CN氰基（-C≡N）是不飽和取代基，它應(yīng)使取代的化合物熒光減弱，但實(shí)際結(jié)果是表現(xiàn)出推電子的效果—熒光增強(qiáng)－F雖是吸電子取代基，但增強(qiáng)熒光第21頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第22頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月磺酸基含有不飽和鍵，表現(xiàn)出吸電子性能，應(yīng)減弱熒光但它易離解出H帶負(fù)電荷，又體現(xiàn)出推電子的行為，使熒光增加增減相低，磺酸根的引入一般無顯著熒光變化，最明顯的是試劑水溶性的增加第23頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月取代基數(shù)量及其所處位置的影響

對于不同的發(fā)光母體，同類取代基所處位置不同所表達(dá)的熒光強(qiáng)弱變化規(guī)律也不相同小體積取代基所貢獻(xiàn)的共軛效應(yīng)小只是體現(xiàn)出其電荷影響大的取代基如苯或乙炔基苯，其共軛效應(yīng)大，取代后擴(kuò)大共軛體系，熒光增強(qiáng)的效應(yīng)大于其吸電子使熒光減弱的效應(yīng)結(jié)果是取代后的熒光強(qiáng)度不是減弱而是大大增強(qiáng)第24頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第25頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第26頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月兩類取代基共同作用推電子基和吸電子基共存時，推電子基結(jié)合在對于吸電子基共振電子密度減小的原子上，構(gòu)成熒光性7-羥基香豆素（ФF=0.37）6-和8-羥基取代香豆素?zé)o熒光4-甲基-7-羥基香豆素則因甲基的超共軛效應(yīng)使熒光增強(qiáng)（ФF=0.41）第27頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月兩個以上推電子基同時取代，化合物的熒光會受到抑制如甲氧基苯的ФF是0.291，4-二甲氧基苯的ФF是0.21，再如甲苯的ФF是0.17

對甲酚的ФF等于0.09，第28頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月（取代基）加重效應(yīng)對熒光的影響

加重效應(yīng)減弱熒光第29頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第30頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月ФF是0.22，ФP（磷光量子產(chǎn)率）是0.14ФF等于10-5，ФP變?yōu)?.43第31頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月芳香環(huán)中雜原子的影響

增強(qiáng)或減弱熒光，看雜原子化合物結(jié)構(gòu)吡咯、噻吩及呋喃熒光量子產(chǎn)率很小，苯并后的吲哚、硫茚及苯并呋喃熒光大大增強(qiáng)n——π*躍遷變?yōu)棣小?躍遷問題：從分子結(jié)構(gòu)和光譜特性討論有機(jī)顯色劑和熒光試劑的聯(lián)系與區(qū)別。第32頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第33頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月ФF0.86ФF約1.0ФF0.90第34頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月.分子離子化對熒光的影響分子離子化對熒光影響很大*熒光試劑在不同酸度下離子化產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度大小不同*選擇適宜條件，使試劑有最大熒光強(qiáng)度，以便于高靈敏檢測

第35頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月分子的立體結(jié)構(gòu)也影響熒光1，2-二苯乙烯反式具有較強(qiáng)的熒光，順式則無熒光第36頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月無機(jī)離子的主要有機(jī)熒光試劑鈣黃綠素類似物第37頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第38頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第39頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第40頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第41頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月2，2-ˊ二羥基偶氮苯同系物第42頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第43頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月

西夫堿和腙類.2-羥基-1-萘甲醛縮氨基硫脲0.03-0.7μgGa/ml，λex/λem=412nm/470nm第44頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月3-羥基皮考啉醛縮-2-吡啶腙（38）在pH4.7熒光測定Al3+，檢測限小于2ng芐基-2-吡啶酮-2-喹啉腙（37）可以熒光測定10ng的鋅第45頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月8-羥基喹啉（HQ）和8-羥基喹啉-5-磺酸（HQS

第46頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月β-二酮類

第47頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月黃酮類

第48頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第49頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月蒽醌類第50頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月三苯甲烷占噸酮類酸性化合物

1.熒光素同系物曙紅和二溴熒光素

2.苯芴酮同系物堿性化合物羅丹明6G>丁級羅丹明B>羅丹明4G>羅丹明3B>羅丹明B還有卟啉第51頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月某些無機(jī)陰離子和小分子的熒光試劑測定亞硝酸根2，3-二氨基萘1，2-二氨基-5，7-萘二磺酸

λex/λem=298nm/429nm，不需萃取，檢測限達(dá)到0.09ng/ml2，3-二氨基萘與Se（IV）形成硒唑測硒，λex/λem=366nm/520、560nm，測定范圍0.4-6.0ng/ml第52頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月與NO形成熒光素三氮唑檢測生物體內(nèi)的NO，檢測限為5nmol/L檢測限1μmol/L第53頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月2-苯乙酰-1，3-茚滿二酮-1-腙（2-DBIH）測定溴氧（O3）的熒光試劑，基于在三氯甲烷中溴氧與1，2-二-（4-吡啶基）乙烯反應(yīng)生成4-甲?；拎?，4-甲?；拎づc2-DBIH反應(yīng)生成熒光產(chǎn)物，λex/λem=468nm/536nm，檢測限0.02μg第54頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月*在過氧化酶的存在下，過氧化氫（H2O2）氧化7-羥基-6-甲氧基香豆素（莨菪亭，58）并使其熒光下降，據(jù)此可以測定H2O2，檢測限