毛細(xì)管電泳分析檢測氨基酸

毛細(xì)管電泳分析檢測氨基酸第1頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere1Contents2概述原理展望54文獻(xiàn)綜述3影響因素第2頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere一概述

毛細(xì)管電泳,又稱高效毛細(xì)管電泳,是近年發(fā)展起來的一種新型分析分離技術(shù),它綜合了高效液相色譜和凝膠電泳共同優(yōu)點(diǎn),具有快速、分辯率高、重復(fù)性好的特點(diǎn),已廣泛用于氨基酸、多膚、蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)的分析。對電中性物質(zhì),經(jīng)過特殊處理也可進(jìn)行分析。第3頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere一概述第4頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere二原理

毛細(xì)管電泳統(tǒng)指以高壓電場為驅(qū)動力，以毛細(xì)管為分離通道，依據(jù)試樣中各組分間淌度(指單位場強(qiáng)下離子的平均電泳速度)和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一類分離技術(shù)。

第5頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere二原理在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子在電場作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反方向遷移的現(xiàn)象叫電泳。而此時雙電層中的溶劑化陽離子引起流體整體向負(fù)極方向移動的現(xiàn)象叫電滲。粒子在電解質(zhì)中的遷移速度等于電泳流和電滲流兩種速度的矢量和。陽離子的移動方向和電滲流一致，最先流出；中性粒子的電泳流速度為零，其遷移速度等于電滲流速度；陰離子的移動方向與電滲流相反，但因電滲流速度一般都大于電泳速度，它將在中性粒子之后流出，從而實(shí)現(xiàn)分離。第6頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere三影響因素毛細(xì)管柱：毛細(xì)管柱是的核心部件,目前毛細(xì)管柱直徑穩(wěn)定在25-75μm之間,以利于最大的降熱和對吸附的控制。其材料可為聚四氟乙烯、玻璃和彈性石英,最常用的為石英。玻璃和石英的硅醇基是構(gòu)成吸附及產(chǎn)生電滲流的主要原因。因此通常加載偶聯(lián)劑（β-環(huán)糊精）與硅醇基進(jìn)行某種化學(xué)反應(yīng)來屏蔽管壁吸附活性而達(dá)到改性性。電壓：較低時,峰展寬較嚴(yán)重,電壓太高時基線噪音變大。溫度：電流通過毛細(xì)管產(chǎn)生的熱將引起溫度變化,使各項(xiàng)物理參數(shù)改變,造成樣品遷移時間、峰面積的偏差和分離效率下降。第7頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere三影響因素添加劑：通過可逆或不可逆吸附,添加劑可影響毛細(xì)管管壁上的電荷數(shù)量及其分布,還可能改變電荷的性質(zhì),因此能用于控制電滲。進(jìn)樣時間：進(jìn)樣時間較短時,峰電流響應(yīng)太小,其進(jìn)樣量的精度也隨之減小,峰高的重現(xiàn)性得不到保證；進(jìn)樣時間較長時,峰電流會加大,但會使樣品區(qū)帶加寬,從而不能正確反映樣品的真實(shí)濃度,同時峰形展寬。

第8頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere三影響因素電泳緩沖液：pH通過影響分離組分的荷電性質(zhì)而影響其在電場中的有效遷移速度。因此緩沖液的pH及濃度對分離度的影響十分突出,必須對它們進(jìn)行選擇并優(yōu)化。一般地,緩沖液必須比被分析物質(zhì)的等電點(diǎn)高或低一個pH單位,而且盡可能采用酸性緩沖液。為保持pH在相當(dāng)長時間穩(wěn)定一般選擇在所控pH附近具有較大緩沖容量的緩沖溶液。通常緩沖液的緩沖容量隨濃度增加而增大,但濃度增加溶質(zhì)在毛細(xì)管內(nèi)遷移速度下降,遷移時間延長。同時,考慮到焦耳熱的限制,故不能選用較高濃度的緩沖液。第9頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere三影響因素

王躍國等用毛細(xì)管電泳法對20種常見氨基酸的2,4-二硝基氟苯(DNFB)衍生物進(jìn)行了分離研究,分析緩沖液濃度、pH值、有機(jī)溶劑及表面活性劑對分離的影響。以濃度為30mmol/L、pH值9.9的硼砂溶液含15%異丙醇為運(yùn)行緩沖液,分離氨基酸DNFB衍生物效果最佳,分離時間30min,17種氨基酸除亮氨酸、異亮氨酸外均達(dá)到基線分離。朱英等利用自制的毛細(xì)管電泳系統(tǒng),以彈性石英毛細(xì)管為研究對象,從實(shí)驗(yàn)上考察了緩沖液的pH值、濃度、種類、添加劑、涂層、毛細(xì)管壁洗滌方法、分離管管徑等多種因素對徑向電場控制電滲能力的影響。第10頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere四文獻(xiàn)綜述明永飛等利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法對衍生氨基酸進(jìn)行分離,考察了毛細(xì)管區(qū)帶電泳法進(jìn)行氨基酸分離的關(guān)鍵條件,確定了最佳分離條件,實(shí)現(xiàn)了12種氨基酸的快速基線分離。

范海峰等采用30mmol/L硼砂-2.0mmol/L磷酸氫二鉀作為緩沖溶液,體積分?jǐn)?shù)為3%的無水甲醇作為有機(jī)改性劑,0.5mmo/L十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)為電滲流改性劑,pH為9.5時,4min內(nèi)半胱氨酸、甘氨酸、谷氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸等5種未經(jīng)衍生的氨基酸均獲得了基線分離。第11頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere四文獻(xiàn)綜述劉文鋒等利用自己研制的毛細(xì)管電泳電導(dǎo)檢測裝置,在不用衍生的情況下,對水解毛發(fā)得到的所有氨基酸進(jìn)行快速,簡便的定量測定?？准t星等利用高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳直接紫外檢測法對8種非衍生化氨基酸進(jìn)行了分離分析條件的研究。在分離電壓20kv，在濃度為50mmol/L,pH10的硼砂緩沖溶液中加入o.5mmol/L的十六烷基三甲基溴化銨作為電滲流改性劑，4min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了8種氨基酸有效分離。第12頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月Yoursitehere五展望毛細(xì)管電泳由于其自身高效、高速、高靈敏度、高自動化以及樣品和試劑耗用量少等特點(diǎn),為現(xiàn)代生物醫(yī)藥學(xué)提供了強(qiáng)有力的分離分析手段,已經(jīng)在手性藥物、藥物制劑、中草藥等方面的應(yīng)用中得到了蓬勃的發(fā)展。毛細(xì)管電泳是一門發(fā)展中的分析化學(xué)前沿學(xué)科,雖然毛細(xì)管電泳的納升級進(jìn)