維生素類藥物分析

維生素類藥物分析第1頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月主要內(nèi)容維生素A維生素D維生素E維生素B維生素C脂溶性水溶性第2頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月維生素維持人體正常生理機能所必須的生物活性物質(zhì)40%谷類和麥類主食12%水果18%蔬菜10%肉類、蛋類制品10%乳類制品10%油、脂肪及甜品第3頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月第4頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月人體缺少某種維生素，就會引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機能。例如：VA——夜盲癥

VB1——腳氣病

VD缺乏——佝僂病第5頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月第6頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月按溶解性分類脂溶性：VA、VD、VE、VK等水溶性：B族，VC、煙酸、葉酸、泛酸等第7頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月維生素A的分析結(jié)構(gòu)特點：具有共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烷，有多種異構(gòu)體性質(zhì)：有強紫外吸收，易被氧化，脂溶性維生素A醇維生素A醋酸酯維生素A棕櫚酸酯第8頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月結(jié)構(gòu)特點：環(huán)己烯+共軛多烯側(cè)鏈天然VA側(cè)鏈為全反式天然來源主要是魚肝油，人工合成醋酸酯，棕櫚酸酯第9頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月鑒別試驗三氯化銻反應(yīng)：維生素A+三氯化銻→顯藍色→漸變成紫紅色紫外吸收光譜：維生素A的無水乙醇-鹽酸溶液在326nm波長處有單一吸收峰，將該溶液加熱后再測定，在348，367，389nm處出現(xiàn)3個尖銳吸收峰。這是維生素A在鹽酸催化下加熱，發(fā)生脫水反應(yīng)所致第10頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月含量測定紫外分光光度法（三點校正法）維生素A醋酸酯的環(huán)己烷溶液在328nm有最大吸收，吸收系數(shù)E=1530

維生素A醇的異丙醇溶液在325nm有最大吸收，吸收系數(shù)E=1820

由于維生素A中稀釋用油和有關(guān)雜質(zhì)也具有紫外吸收，干擾測定，故采用三點校正法測定含量第11頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月等波長差法第12頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月等吸收差法第13頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月中國藥典收載方法第一法（維生素A醋酸酯的測定）將維生素A溶于環(huán)己烷，在規(guī)定波長測定吸收度，計算吸收度比值（A/A328

）第14頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月數(shù)據(jù)處理如果λmax在326-329nm之間，且A/A328比值未超過規(guī)定值的±0.02，可直接按下式計算含量：第15頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月?lián)Q算因子F的由來換算因子F=效價（IU/g）/E1%1cm規(guī)定1IU=0.334g維生素A醋酸酯則1g維生素A醋酸酯=1×106/0.344=2907000IU維生素A醋酸酯的E1%1cm=1530故F=2907000IU/1530=1900第16頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月數(shù)據(jù)處理如果λmax在326-329nm之間，且A/A328比值超過規(guī)定值的±0.02，需按校正公式計算校正值：第17頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月是否需要校正值的判斷如果λmax不在326-329nm之間，也用第二法測定第18頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月第二法（維生素A醇的測定）不能用第一法的樣品采用第二法測定方法：維生素A醇→皂化→提取→濾過→濃縮→干燥→維生素A酯→制成異丙醇溶液，在規(guī)定波長測定吸收度數(shù)據(jù)處理：第19頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月是否需用校正值的判斷如果：不需校正，用A325計算則第20頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月討論干擾物質(zhì)主要由異構(gòu)體、氧化產(chǎn)物、合成中間體及溶劑油校正公式的推導假定這些雜質(zhì)在310-340nm處吸收呈直線，根據(jù)吸收度加和性原則，選擇三個波長，用數(shù)學方法，即第21頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月維生素B1的分析又稱鹽酸硫胺，結(jié)構(gòu)特點：有兩個堿性基團，有紫外吸收，在水中易溶嘧啶環(huán)噻唑環(huán)第22頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月鑒別反應(yīng)沉淀反應(yīng)氯化物反應(yīng)——本品為鹽酸鹽，顯氯化物反應(yīng)硝酸鉛反應(yīng)——與氫氧化鈉共熱，分解產(chǎn)生硫化鈉，與硝酸鉛生成黑色沉淀第23頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月硫色素反應(yīng)維生素B1在氫氧化鈉溶液中，與鐵氰化鉀作用，被氧化成硫色素，在正丁醇中顯藍色熒光，加酸，熒光消失，加堿，熒光又出現(xiàn)這是維生素B1的專屬反應(yīng)第24頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月含量測定非水溶液滴定法用于原料藥測定加醋酸汞消除鹽酸干擾

1mol維生素B1與2mol高氯酸相當紫外分光光度法片劑、注射劑采用此法以吸收系數(shù)法計算含量硫色素熒光法對照品對照法計算含量，方法專屬，不受氧化產(chǎn)物干擾第25頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月硅鎢酸重量法維生素B1+硅鎢酸→白色沉淀，趁熱過濾沉淀依次用熱鹽酸、水、丙酮洗滌80℃干燥至恒重樣品%=（沉淀重×0.1939）/取樣量×100%式中0.1939為重量換算因子，維生素B1的M=337.27，沉淀的M=3479.22，由于第26頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月維生素C的分析結(jié)構(gòu)特點二烯醇結(jié)構(gòu)，有強還原性C3顯酸性，可成鈉鹽具共軛雙鍵，有紫外吸收兩個手性碳，有旋光性水中易溶，有糖類性質(zhì)第27頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月鑒別試驗硝酸銀反應(yīng)——維生素C被氧化，銀被還原成黑色銀沉淀使高錳酸鉀、亞甲藍褪色與堿性酒石酸銅作用，產(chǎn)生紅色氧化銅沉淀二氯靛酚鈉反應(yīng)——二氯靛酚被還原成無色第28頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月糖類性質(zhì)維生素C+HCl（三氯乙酸）→水解成戊糖→失水→糠醛+吡咯→藍色第29頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月雜質(zhì)檢查澄清度與顏色——控制氧化變色產(chǎn)物，以測定一定波長下吸光度控制有色雜質(zhì)原料——溶液應(yīng)澄清無色，若有色，在420nm處測定吸光度，不得過0.03

片劑——在440nm處測定吸光度，不得過0.07

注射劑——在420nm處測定吸光度，不得過0.06鐵、銅離子——采用原子吸收分光光度法測定第30頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月含量測定碘量法——維生素C分子中的烯二醇基具有還原性，能被I2定量的氧化成二酮基第31頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月測定方法取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100mL與稀醋酸10mL，振搖使溶解，加淀粉指示液1mL，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍色并持續(xù)30秒鐘不褪。每1mL碘滴定液（0.1mol/L）相當于8.806mg的C6H8O6討論：滴定前加入稀醋酸可減緩維生素C受空氣氧化，用新沸過的冷水做溶劑，除去水中溶解氧對測定的影響維生素C片也采用碘量法測定含量，但需過濾除去輔料第32頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月維生素C注射液含量測定精密量取本品適量（約相當于維生素C0.2g）加水15mL與丙酮2mL，搖勻，放置5min，加稀醋酸4mL與淀粉指示液1mL，用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍色并持續(xù)30s不褪。每1mL碘滴定液（0.1mol/L）相當于8.806mg的C6H8O6：滴定前加丙酮是用來消除注射液中含有的抗氧劑亞硫酸鈉對測定的干擾，丙酮與亞硫酸鈉形成加成物而消除影響第33頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月2,6-二氯吲哚酚法以2,6-二氯吲哚酚為滴定劑，終點時，過量一滴的滴定劑在酸性溶液中顯玫瑰紅色而指示終點，無需另加指示劑此法較碘量法專屬性強，但滴定劑不穩(wěn)定第34頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月維生素D的分析為一類抗佝僂病的維生素總稱，都是甾醇的衍生物，ChP收載維生素D2（Ergocalciferol），D3有多個烯鍵，不穩(wěn)定，易氧化變質(zhì)，使毒性增加，多個手性碳，具旋光性第35頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月鑒別試驗顯色反應(yīng)（甾類化合物的反應(yīng)）

D2+醋酐-濃H2SO4→黃→紅→紫→綠色

D3+醋酐-濃H2SO4→黃→紅→紫→藍綠→綠色比旋度[α]tD測定

D2無水乙醇液：+102.5°～+107.5°D3無水乙醇液：+105°～+112°D2、D3區(qū)別反應(yīng)維生素D的醇溶液+85%H2SO4

第36頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月含量測定采用正相HPLC法根據(jù)樣品純度，ChP采用三種方法第一法（適用于無VitA醇及其它雜質(zhì)干擾）對照品（D2、D3

）+異辛烷→超聲助溶，充氮，避光0℃保存內(nèi)標液：鄰苯二甲酸甲酯-正己烷溶液色譜柱：硅膠柱流動相：正己烷-正戊醇（997：3）檢測波長：254nm第37頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月測定方法光照：使產(chǎn)生前維生素D3，反式維生素D3

，速甾醇D3

，連同維生素D3

，進行系統(tǒng)適用性試驗重復進樣，維生素D3的峰值RSD≤2.0%分離度R>1.0采用校正因子法計算維生素D總量第38頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月維生素E分析結(jié)構(gòu)特征：具有苯并二氫吡喃結(jié)構(gòu)，苯環(huán)上有1個乙酰化的酚羥基，易被水解、氧化；為脂溶性維生素。有四種異構(gòu)體，其中α型活性最強第39頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月鑒別與硝酸反應(yīng)——維生素E與硝酸共熱，顯橙紅色（生育紅）水解后氧化反應(yīng)——維生素E在堿性條件下水解，與聯(lián)吡啶和三氯化鐵作用，顯血紅色。在該反應(yīng)中，維生素E水解游離出生育酚，還原Fe2+→Fe3+

，后者與聯(lián)吡啶生成血紅色配位離子第40頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月雜質(zhì)檢查合成型——檢查有關(guān)物質(zhì)（GC）天然型——檢查生育酚生育酚——采用硫酸鈰滴定法第41頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月生育酚限量計算規(guī)定：0.1g維生素E消耗硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）不得過1.0mL第42頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月含量測定采用GC法色譜條件色譜柱：硅酮（OV-17），載氣：N2

檢測器：FID

內(nèi)標：正三十二烷（正己烷溶液）系統(tǒng)適用性試驗以維生素E峰計算應(yīng)不低于500（毛細管柱5000），維生素E與內(nèi)標的分離度應(yīng)大于2第43頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月測定方法校正因子測定：取正三十二烷適量，加正己烷溶解并稀釋成每1mL中含1.0mg的溶液，搖勻，作為內(nèi)標溶液。另取維生素E對照品約20mg，精密稱定，置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標溶液10mL，密塞，振搖使溶解，取1-3