流式細(xì)胞儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

流式細(xì)胞儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程××醫(yī)院檢驗(yàn)科臨床免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào):XXX生效日期：共頁第頁1.目的建立規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)的××型流式細(xì)胞儀操作程序，確保流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。2.儀器名稱及型號(hào)××(品牌)××(型號(hào))流式細(xì)胞儀。3.應(yīng)用范圍適用于免疫組經(jīng)授權(quán)的檢驗(yàn)技術(shù)人員。4.儀器簡介和測(cè)試原理流式細(xì)胞儀可同時(shí)進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量，信息主要來自特異性熒光信號(hào)及非熒光散射信號(hào)，工作在測(cè)量區(qū)進(jìn)行。所謂測(cè)量區(qū)就是照射激光束和噴出噴孔的液流束垂直相交點(diǎn)。液流中央的單個(gè)細(xì)胞通過測(cè)量區(qū)時(shí)，受到激光照射會(huì)向立體角為2π的整個(gè)空間散射光線，散射光的波長和入射光的波長相同。散射光的強(qiáng)度及其空間分布與細(xì)胞的大小、形態(tài)、質(zhì)膜和細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，因?yàn)檫@些生物學(xué)參數(shù)又和細(xì)胞對(duì)光線的反射、折射等光學(xué)特性有關(guān)。未遭受任何損壞的細(xì)胞對(duì)光線都具有特征性的散射，因此可利用不同的散射光信號(hào)對(duì)不經(jīng)染色活細(xì)胞進(jìn)行分析和分選。經(jīng)過固定的和染色處理的細(xì)胞由于光學(xué)性質(zhì)的改變，其散射光信號(hào)當(dāng)然不同于活細(xì)胞。散射光不僅與作為散射中心的細(xì)胞的參數(shù)相關(guān)，還跟散射角及收集散射光線的立體角等非生物因素有關(guān)。因此流式細(xì)胞儀綜合了激光技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、半導(dǎo)體技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)等各門學(xué)科。5.開展項(xiàng)目包括：常規(guī)免疫功能檢測(cè)、細(xì)胞周期檢測(cè)、細(xì)胞凋亡檢測(cè)、免疫細(xì)胞分型、造血干細(xì)胞檢測(cè)等。6.儀器環(huán)境要求無塵、通風(fēng)良好的環(huán)境，無直接日照。溫度：18~25℃，溫度的改變應(yīng)該＜2℃／h。室內(nèi)7.操作規(guī)程7．1·設(shè)備每日開機(jī)程序：開啟穩(wěn)壓電源、變壓器，打開流式細(xì)胞儀電源。開啟其他周邊有管線及管路裝置連接通暢，無扭曲、折疊。將氣壓閥方向調(diào)在加壓位置，用手感覺鞘液桶在慢慢鼓起。排除液流過濾器中的氣泡。等待機(jī)器預(yù)熱5~10min后可開始實(shí)驗(yàn)。s在試劑盒的背面，標(biāo)題是“CalibriteBeadsTM3BatchNO”，選擇“FacsFlowSheath”下的編號(hào) (右側(cè)的編號(hào))。APCLotID(此欄不能空，即使是三色校正試劑)。，路徑“Facstation\BDfile\Facscomp\n度過低可在管中加一滴微球。液體和鞘液桶中的是否相同；③儀器做月維護(hù)，完成后再重新做Facscomp儀器質(zhì)控。勻的抗凝全血，注意血不要碰到試管底部的微球(Beads)。取20μl熒光抗體加入到管中，注意：不要碰到血。渦旋混勻，室溫避光放置15min。取出加入450μl1×FACS溶血素，充分混勻，避光放置15min。24h內(nèi)上機(jī)用“Multitest”軟件獲取細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，上機(jī)前應(yīng)充分混勻。AcquisitionandAnalysis”，在“EntryLevelFileNamePrefix”中選擇“SampleName”；在會(huì)自動(dòng)生成一個(gè)文件，文件的默認(rèn)路徑“Facstation\BDfile\Multiset\DDMMYY”文件夾；在的結(jié)果。在窗口的最下方點(diǎn)“LotIds”，跳出一窗口，點(diǎn)此窗口左側(cè)的“AbsoluteCountBeads”，在此窗口右側(cè)輸入TrucountTube的批號(hào)和Beads總數(shù)(標(biāo)在包裝袋上)，單擊“Save”。單擊Setting”，在出現(xiàn)的新對(duì)話框中單擊“Open”；打開此路徑下Facstation\BDFile\InstrumentiRunmin約1ml。將樣品換成蒸餾水重復(fù)上述步驟。注意：最后要剩余約1ml蒸餾水浸泡進(jìn)樣針，防StandBymin后可關(guān)掉主機(jī)。退出所有應(yīng)用軟件，關(guān)閉電腦，關(guān)閉穩(wěn)壓器和變壓器。將流式細(xì)胞儀的壓力閥置于減壓狀態(tài)。8.維護(hù)保養(yǎng)8．1·每日維護(hù)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，請(qǐng)于關(guān)機(jī)前清潔加樣針的外管和內(nèi)管，防止加樣針堵塞或有染料殘留。清潔方法同每日關(guān)機(jī)程序。8．2·每月維護(hù)：流式細(xì)胞儀使用一段時(shí)間后，在鞘液管路、廢液管路和流動(dòng)池中會(huì)有殘使鞘液不流經(jīng)濾器，直接沿鞘液管路進(jìn)入流動(dòng)池。鞘液筒中倒入2L濃度為0．5％~1％稀釋漂白劑(注意不能使用原濃度)。上樣管中加入4ml濃度為0．5％~1％稀釋漂白劑。流速選擇Hi檔，Run運(yùn)行20~30min。鞘液筒用蒸餾水清洗干凈，再加入蒸餾水2L。取下有漂白劑的上樣管，換上有4ml蒸餾水的上樣管。流速選擇Hi檔，Run運(yùn)行20~30min。鞘液筒中換成鞘液，重新安裝好鞘液濾器管路。參照用戶手冊(cè)的有關(guān)內(nèi)容自行更換。8．3．2空氣濾網(wǎng)的清潔：空氣濾網(wǎng)位于鞘液筒上方，可以用吸塵器或水洗的辦法清潔?？諝鉃V網(wǎng)需要定期檢查，發(fā)現(xiàn)濾網(wǎng)臟了，就需要清洗了。拉出抽屜后取下空氣濾網(wǎng)。清潔濾網(wǎng)，如果水洗處理，應(yīng)等濾網(wǎng)完全干了以后，再進(jìn)行安裝。裝回濾網(wǎng)，將其慢慢推回原位。安裝時(shí)注意濾網(wǎng)的方向，氣流由下往上通過。9.校準(zhǔn)的原則，對(duì)儀器特性中涉及量值要求的項(xiàng)目進(jìn)行控制。9．2·正常工作條件：包含校正球差、色差、慧差、場(chǎng)曲等在校準(zhǔn)前的準(zhǔn)備工作中進(jìn)行說明。9．3·熒光靈敏度：根據(jù)物鏡不同的數(shù)值孔徑和種類，在4~15mm。規(guī)范做計(jì)量特性要求。9．6·儀器分辨率：熒光3個(gè)通道分辨率規(guī)范做計(jì)量特性要求。周血中紅細(xì)胞和血小板分開。出廠保證，不直接影響測(cè)量，不列入。9．8·倍體分析線性：二倍體細(xì)胞周期分析時(shí)可分辨的熒光強(qiáng)度比值。出廠保證，不直接特性要求。要求。9．12·儀器穩(wěn)定性：≤±10％規(guī)范做計(jì)量特性要求。明。9．16·安全醫(yī)用電氣安全使用要求在校準(zhǔn)前的準(zhǔn)備工作中進(jìn)行說明。10.報(bào)警及處理“警報(bào)”窗口查看相應(yīng)的警報(bào)。警報(bào)窗口識(shí)別各種系統(tǒng)警報(bào)狀態(tài)。具體說明和消除辦法。根據(jù)相應(yīng)的消除辦法，糾正各個(gè)警報(bào)狀況。如有問題，請(qǐng)撥打××(品牌)××(型號(hào))流式細(xì)胞儀客服電話。11.注意事項(xiàng)程中注意鞘液桶不能空，防止氣體進(jìn)入液路系統(tǒng)。11．2·液路中氣泡會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，開機(jī)后一定要排除氣泡，包括鞘液桶上方管路排除氣泡、儀器管路右側(cè)管路排除氣泡、進(jìn)樣針Prime2~3次。加鞘液后要稍等2~3min再排氣泡。11．3·樣品上機(jī)前一定要過濾(300目細(xì)胞篩或35~55μm尼龍篩網(wǎng))，以防樣品中