血清總前列腺特異性抗原（tPSA）定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

血清總前列腺特異性抗原(tPSA)定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程××醫(yī)院檢驗(yàn)科臨床免疫室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)文件編號(hào):XXX生效日期：共頁(yè)第頁(yè)1.目的規(guī)范操作流程，保證血清總前列腺特異性抗原(tPSA)定量的準(zhǔn)確性和可靠性。2.原理采用雙抗體夾心法原理，整個(gè)過(guò)程18min完成。2．1·第1步孵育：20μl標(biāo)本、生物素化的單克隆tPSA特異抗體和釕(Ru)標(biāo)記的單克隆tPSA特異抗體混勻，形成夾心復(fù)合物。2．2·第2步孵育：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過(guò)生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果由機(jī)器自動(dòng)從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出。此曲線由儀器通過(guò)2點(diǎn)定標(biāo)校正，由從試劑條形碼掃描入儀器的原版標(biāo)準(zhǔn)曲線而得。3.標(biāo)本要求3．1．1血清標(biāo)本采集用標(biāo)準(zhǔn)樣本試管或含分離膠的試管。標(biāo)本在2~8℃可穩(wěn)定7天，－20℃可穩(wěn)定3個(gè)月。含沉淀的標(biāo)本使用前需離心。心 (大約15000g，10min或2000~3500r／min，5~10min)澄清，方可進(jìn)行檢測(cè)。3．3·患者準(zhǔn)備的一般要求：患者在采血前24h內(nèi)應(yīng)避免運(yùn)動(dòng)和飲酒，不宜改變飲食習(xí)慣和睡眠習(xí)慣。一般主張?jiān)诮?2h后空腹取血，門(mén)診患者提倡靜坐15min后再采血。4.試劑與儀器4．2·試劑使用：試劑盒中的試劑是一個(gè)整體，打開(kāi)后可立即使用，不能被分開(kāi)。正確操作需要的所有信息可通過(guò)相應(yīng)的試劑條碼讀取。素結(jié)合能力：470ng生物素／mg粒子。含防腐劑。4．4·其他材料：總PSA定標(biāo)液(tPSACalSet)、腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品(PreciControlTumorMarker)1和2、分析杯和Elecsys分析吸頭(移液管吸頭加樣槍頭)、通用稀釋液、ProCell系統(tǒng)shSysCleanProCellMWashM4．5．1存放在2~8℃。為了確保使用前自動(dòng)混勻期間提供足夠量的磁性微粒，試劑盒器上，8周(交替貯存在冰箱內(nèi)和儀器上，室溫20~25℃，開(kāi)瓶使用時(shí)間累計(jì)約20h)。5.操作步驟5．1·按儀器操作說(shuō)明進(jìn)行操作。檢查試劑與消耗品是否充足。使用前自動(dòng)混勻微粒。儀器通過(guò)掃描試劑盒條形碼自動(dòng)輸入測(cè)試所需的特異性參數(shù)，不需手工輸入。如果特殊情況下儀器無(wú)法閱讀條形碼，可以手工輸入15位數(shù)字。將冷藏試劑預(yù)溫到20℃后放置于儀器的試劑盤(pán)上，避免產(chǎn)生泡沫。儀器自動(dòng)控制試劑溫度和開(kāi)／關(guān)試劑瓶蓋。5．2·檢測(cè)程序：從主菜單進(jìn)入測(cè)試申請(qǐng)屏幕。對(duì)每個(gè)樣品，設(shè)置一個(gè)樣品架上的位置，輸入樣品信息和需檢測(cè)的測(cè)試名稱(chēng)。將樣品管(杯)放入樣品架中已設(shè)定的位置。按下運(yùn)行鍵(Run)開(kāi)始檢測(cè)。儀器會(huì)提醒操作者運(yùn)行所需的定標(biāo)。系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)計(jì)算檢測(cè)結(jié)果。6.校準(zhǔn)10％游離PSA)。每批Elecsys試劑套裝都有條形碼標(biāo)簽，條形碼含有特定批次試劑對(duì)應(yīng)的特定定標(biāo)信息。預(yù)先確定的一級(jí)定標(biāo)曲線適用于采用相關(guān)定標(biāo)液試劑盒進(jìn)行測(cè)定的分析儀。6．2·定標(biāo)頻率：必須使用新鮮試劑對(duì)每個(gè)試劑批進(jìn)行一次定標(biāo)(即試劑盒上機(jī)登入后的24h內(nèi))。下列情況建議重新定標(biāo)：使用同一批試劑的1個(gè)月后(28天)；7天后(在分析儀上使用同一試劑盒)；根據(jù)需要：質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)，比如質(zhì)控結(jié)果在規(guī)定的限值外；若兩水平質(zhì)控均在控，則定標(biāo)曲線可延至試劑及質(zhì)控批號(hào)更換。6．3·定標(biāo)驗(yàn)證：分析儀的軟件會(huì)自動(dòng)檢查定標(biāo)曲線的有效性及任何偏離。7.質(zhì)控該測(cè)試適用的質(zhì)控液PreciControlTumorMarker1和2；也可以用其他合適的質(zhì)控液，如××LyphochekTumorMarkerPlusControl。在以下情況建議進(jìn)行質(zhì)控檢測(cè)：每24h進(jìn)行一次檢測(cè)、每一個(gè)新批號(hào)試劑盒、每一次定標(biāo)以后。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如果出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取糾正措施。8.結(jié)果判斷r低于最低檢測(cè)限，報(bào)告為＜0．003ng／ml。如果測(cè)定值高于檢測(cè)范圍，報(bào)告為＞100ng／ml(結(jié)果達(dá)到5000ng／ml樣本應(yīng)作50倍稀釋)。8．3·稀釋?zhuān)焊哂跈z測(cè)范圍的標(biāo)本可用通用稀釋液稀釋。建議1∶50稀釋(既可以自動(dòng)稀釋也可以手工稀釋)。稀釋后的標(biāo)本tPSA含量必須高于2ng／ml。如用手工稀釋?zhuān)Y(jié)果應(yīng)乘上稀釋倍數(shù)。如果是機(jī)器自動(dòng)稀釋?zhuān)浖?huì)自動(dòng)計(jì)算結(jié)果。8．4·檢測(cè)結(jié)果的不確定度：具體參見(jiàn)AFP標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的相關(guān)內(nèi)容。9.生物參考區(qū)間9．2·各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)各自地區(qū)人群的tPSA正常值波動(dòng)范圍進(jìn)行調(diào)查，如有必要應(yīng)自己測(cè)定一個(gè)參考值范圍。10.性能參數(shù) 或＜60ng／ml)的影響。對(duì)于接受高劑量生物素治療的患者(即＞5mg／d)，必須在末次生物素治療后至少8h采集樣本。類(lèi)風(fēng)濕因子濃度≤1500U／ml時(shí)無(wú)明顯干擾。tPSA濃度≤17000ng／ml時(shí)無(wú)高劑量鉤狀效應(yīng)。體外對(duì)28種常用藥物進(jìn)行檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)有藥物影響檢測(cè)結(jié)果。少數(shù)病例中針對(duì)分析物特異性抗體、鏈霉親和素或釕抗體的極高滴度抗體會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。通過(guò)適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)可將影響因素降到最低。11.臨床意義血清tPSA升高一般提示前列腺存在病變(前列腺炎、良性增生或癌癥)。由于PSA也存在于尿道旁和肛門(mén)旁腺體，以及乳腺組織或乳腺癌，因此，女性血清中也可測(cè)出低水平的PSA。前列腺切除后仍可測(cè)出PSA。PSA測(cè)定主要用于監(jiān)測(cè)前列腺癌患者或