微生物基本試驗原理和操作培訓課件

微生物基本試驗原理和操作碳源和氮源利用試驗

檸檬酸鹽試驗

葡萄糖酸鹽試驗

2微生物基本試驗原理和操作檸檬酸鹽試驗

原理：有些細菌能利用檸檬酸鹽作為唯一碳源，分解檸檬酸鈉生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基呈堿性。能利用檸檬酸鹽作唯一碳源的細菌，也能利用銨鹽作為唯一氮源，銨鹽被分解為氨而產生堿性。3微生物基本試驗原理和操作西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基成分

MgSO4-7H2O0.2gNH4H2PO41gK2HPO41g檸檬酸鈉5g氯化鈉5g瓊脂20g0.2%溴麝香草酚藍溶液40ml蒸餾水1000ml4微生物基本試驗原理和操作結果：陽性者表面上長有菌落，培養(yǎng)基變?yōu)樗{色。

5微生物基本試驗原理和操作葡萄糖酸鹽試驗

原理：檢查細菌是否具有氧化葡萄糖作為唯一碳源，并具有還原2-酮基葡萄糖酸鹽與班氏試劑混合加熱生成黃紅色酮類的能力。6微生物基本試驗原理和操作方法：接種大量待檢菌于培養(yǎng)基內，35，24-48小時，0.5ml培養(yǎng)基加班氏試劑3滴左右，加熱煮沸后觀察結果。7微生物基本試驗原理和操作葡萄糖酸鹽蛋白胨肉湯成分

蛋白胨0.15g酵母浸膏0.1g磷酸二氫鉀0.1g葡萄糖酸鉀（或鈉）4g蒸餾水100ml8微生物基本試驗原理和操作結果：出現黃色到橙紅色沉淀為陽性，無顏色變化為陰性。

9微生物基本試驗原理和操作碳水化合物的代謝試驗

氧化-發(fā)酵試驗（OF試驗）糖醇發(fā)酵試驗

B—半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）

甲基紅試驗

VP試驗

膽汁七葉苷試驗

10微生物基本試驗原理和操作氧化-發(fā)酵試驗（OF試驗）

原理：細菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的稱為氧化型；在無氧條件下降解葡萄糖的稱為發(fā)酵型；不分解葡萄糖的細菌稱為產堿型。利用此試驗可以區(qū)別細菌的代謝類型。11微生物基本試驗原理和操作Hugh-Leifson二氏培養(yǎng)基（O-F培養(yǎng)基）成分蛋白胨2g磷酸氫2鉀0.3克氯化鈉5g葡萄糖10g0.2%溴麝香酚藍溶液12ml瓊脂2.5g蒸餾水1000ml12微生物基本試驗原理和操作方法：將待檢菌接種于二支Hugh-Leifson培養(yǎng)基的試管中，均用接種針穿至管底，其中五支加入滅菌的液體石蠟約1厘米厚。35，培養(yǎng)48小時觀察結果。培養(yǎng)基顏色變黃即為產酸。13微生物基本試驗原理和操作結果

代謝類型

加蠟封口管

開放管發(fā)酵型產酸產酸氧化型不變色產酸產堿型不變色不變色

14微生物基本試驗原理和操作糖醇發(fā)酵試驗

原理：各種細菌因含有發(fā)酵不同糖、醇類的酶，所以分解糖、醇類的能力各不相同。分解糖、醇類后產生的代謝產物可因菌種不同而異，有的產酸、產氣，有的僅產酸，故用于鑒別細菌。15微生物基本試驗原理和操作糖、醇類試驗培養(yǎng)基成分

蛋白胨水或肉膏湯100ml所需的糖、醇或苷類0.5或1g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.1ml16微生物基本試驗原理和操作結果

接種的細菌，若能耐分解培養(yǎng)基中的糖類產酸時，則使培養(yǎng)基中的指示劑呈酸性反應。若產氣可使半固體培養(yǎng)基內或液體培養(yǎng)基中的倒管內出現氣泡。若不分解則無變化。17微生物基本試驗原理和操作B—半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）

原理：有的細菌可產生B-半乳糖苷酶，此酶可分解鄰-硝基酚-B-D-半乳糖苷（ONPG）。ONPG為無色，經B-半乳糖苷酶水解后，可產生黃色的鄰硝基酚，即使?jié)舛群艿鸵材軝z出。18微生物基本試驗原理和操作結果

呈現黃色為陽性反應。迅速及遲緩分解乳糖的細菌ONPG試驗為陽性，本試驗可作為遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定方法。19微生物基本試驗原理和操作甲基紅試驗

原理：某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸可進一步被分解為甲酸、乙酸、乳酸等，而使培養(yǎng)基的pH下降至4.5以下，加入甲基紅指示劑出現紅色（陽性）。

20微生物基本試驗原理和操作甲基紅試驗

原理：有些細菌分解葡萄糖產酸量少，或產生的酸進一步轉化為其它物質（如醇、酮、醛、氣體和水），則培養(yǎng)基的酸堿度仍在6.2以上，故加入甲基紅指示劑呈黃色（陰性）。21微生物基本試驗原理和操作葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基成分

多價蛋白胨7g葡萄糖5g磷酸氫二鉀5g蒸餾水1000ml22微生物基本試驗原理和操作

方法：被檢菌接種于上述培養(yǎng)基內，于35℃培養(yǎng)48小時，于2ml培養(yǎng)液內加甲基紅指示劑2滴，立即觀察結果。23微生物基本試驗原理和操作結果：紅色為陽性；桔紅色為弱陽性；黃色為陰性。24微生物基本試驗原理和操作VP試驗

原理：有些細菌在葡萄糖的代謝過程中生成丙酮酸，丙酮酸進一步脫羧后可產生乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在堿性溶液中被空氣的氧氧化為二乙酰（丁二酮），進而與培養(yǎng)基內蛋白胨中的精氨酸所含的胍基發(fā)生反應，生成紅色化合物，即VP反應陽性。培養(yǎng)基中的胍基太少時，加入少量含胍基的化合物，如肌酸或肌酸酐等，可加速此反應。

25微生物基本試驗原理和操作

試劑：甲液：6%a-萘酚乙醇溶液乙液：40%氫氧化鉀溶液26微生物基本試驗原理和操作方法：將被檢菌接種葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基后，于35培養(yǎng)48小時，于2ml培養(yǎng)基內加入甲液1ml和乙液0.4ml，振搖后觀察結果。27微生物基本試驗原理和操作結果：于數分鐘內呈紅色為陽性；如無紅色出現，而且于35℃中4小時后仍如故者即為陰性。本試驗較為敏感。28微生物基本試驗原理和操作膽汁七葉苷試驗

原理：在10-14%膽汁存在下，測定細菌水解葡萄糖苷七葉苷為七葉亭和葡萄糖的能力。29微生物基本試驗原理和操作

膽汁七葉苷培養(yǎng)基成分

蛋白胨5g

牛肉浸膏3g

牛膽汁（膽汁）40g

七葉苷1g

檸檬酸鐵0.5g

瓊脂15g

蒸餾水1000ml30微生物基本試驗原理和操作結果：培養(yǎng)基變?yōu)楹谏蛏詈稚珵殛栃?。有生長物時，并不表示七葉苷裂解，僅表示膽汁濃度不能抑制D群鏈球菌外的細菌生長。31微生物基本試驗原理和操作各種酶類試驗

過氧化氫酶（觸酶）試驗

氧化酶試驗

血漿凝固酶試驗

硝酸鹽還原試驗膽汁溶解試驗環(huán)腺苷酸（cAMP）試驗

32微生物基本試驗原理和操作過氧化氫酶（觸酶）試驗

原理：有些細菌具有過氧化氫酶，能將過氧化氫酶分解為水。試劑：3%過氧化氫溶液。33微生物基本試驗原理和操作方法：①玻片法：用牙簽挑取18～24小時培養(yǎng)的菌苔，置于潔凈的玻片上，滴加3%過氧化氫溶液1～2滴。②試管法：取不含血液的18～24小時培養(yǎng)物一接種環(huán)于試管內，加入1ml3%過氧化氫溶液。3%過氧化氫溶液應置于棕色瓶內冷藏。34微生物基本試驗原理和操作結果：產生大量氣泡為陽性，不產生氣泡為陰性。35微生物基本試驗原理和操作血漿凝固酶試驗

原理：凝固酶能凝固血漿纖維蛋白，是鑒定金黃色葡萄球菌的主要試驗。本試驗分玻片法和試管法，玻片法主要是檢測結合凝固酶，試管法是為了肯定玻片法試驗結果和對玻片法試驗陰性者進行復查，檢測游離凝固酶。36微生物基本試驗原理和操作血漿凝固酶試驗原理：結合凝固酶為金黃色葡萄球菌細胞表面含有，游離凝固酶為金黃色葡萄球菌產生的一種胞外酶，兩酶均可作用于血漿中的纖維蛋白原，使其轉變?yōu)槔w維蛋白，形成凝塊。37微生物基本試驗原理和操作

方法：玻片法：在玻片上加一滴滅菌生理鹽水，取葡萄球菌18-24小時肉湯培養(yǎng)物一環(huán)，或挑取平板上一個單個菌落制成濃菌懸液，再加一接種環(huán)新鮮人或兔血漿與菌懸液混勻。同時做陽性菌和陰性菌對照試驗，立刻觀察凝塊的形成。本試驗應先在生理鹽水中乳化，檢查有否自凝現象。防止出現假陽性結果。陽性結果一般在5-20秒內出現，若3-4分鐘后仍無凝固，可考慮為玻片法試驗陰性。

38微生物基本試驗原理和操作試管法：將潔凈小試管中加0.5ml未稀釋的人或兔血漿，加0.5ml培養(yǎng)18-24小時的葡萄球菌肉湯培養(yǎng)物一滿環(huán)，或挑取平板上的純菌落，輕輕轉動（不要搖動）試管混勻。放35水浴中4小時，每隔30分鐘檢查一次有無凝固。檢查時不要振動或搖動試管，可輕輕將試管傾斜以觀察有無凝塊。大多數金黃色葡萄球株在35℃4小時可以凝固血漿，如果陰性對照。枸椽酸鹽抗凝的血漿可產生假陽性結果。

39微生物基本試驗原理和操作

氧化酶試驗

原理：某些細菌具有氧化酶，在有氧和細胞色素C時，使還原型細胞色素C氧化，氧化型細胞色素C再使二甲基對苯二胺氧化，產生玫瑰紅至暗紫色。有時菌落本身帶有紅色，不易觀察，可再加入a-萘酚乙醇溶液，使生成深藍色的靛酚藍。40微生物基本試驗原理和操作

試劑：1．

1%鹽酸二甲基對苯二胺（或四甲對苯二胺）水溶液2．

1%a-萘酚95%乙醇溶液41微生物基本試驗原理和操作

方法：取18-28小時的新鮮培養(yǎng)物，用無菌濾紙條，蘸取菌落少許，滴加1%鹽酸二甲基對苯二胺1-2滴，觀察結果。42微生物基本試驗原理和操作

結果：一分鐘內出現紫紅色為陽性。若菌落本身有色素，則再滴加a-奈酚1-2滴，出現藍色則為陽性。43微生物基本試驗原理和操作硝酸鹽還原試驗

原理：硝酸鹽還原反應有兩個過程，其一是硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，其二是繼續(xù)將亞硝酸鹽進一步分解為氨、氮、氧化氮等氣體終末產物。44微生物基本試驗原理和操作硝酸鹽還原試驗培養(yǎng)基成分

蛋白胨1g

硝酸鉀0.1g

蒸餾水100ml45微生物基本試驗原理和操作方法：將待檢菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)1-4天，將甲、乙試劑各加0.1ml于試管內，混勻觀察結果

46微生物基本試驗原理和操作

結果：出現紅色為陽性。如無紅色出現，應加少量鋅粉，如仍無紅色說明亞硝酸鹽進一步分解成氮、氨等氣體，應判為陽性；如加鋅粉出現紅色，說明還原劑鋅粉使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，待檢菌無還原硝酸鹽的能力，為陰性。47微生物基本試驗原理和操作膽汁溶解試驗

原理：在特定時間和溫度條件下測定膽鹽溶解細菌的能力。溶菌的機理尚未定論，有人認為膽鹽或膽汁能激活肺炎鏈球菌的自溶酶，使菌體發(fā)生溶解。48微生物基本試驗原理和操作試劑：10%去氧膽酸鈉溶液或牛膽汁

49微生物基本試驗原理和操作平板法：10%去氧膽酸鈉溶液一接種環(huán)，加于血瓊脂平板的試驗菌落上，置于35孵育30分鐘，肺炎鏈球菌菌落消失為陽性。陰性者菌落仍存在。50微生物基本試驗原理和操作環(huán)腺苷酸（cAMP）試驗

原理：B群鏈球菌（無乳鏈球菌）能產生一種因子（cAMP因子），這種因子在綿羊血或牛血培養(yǎng)基上與金黃色葡萄球菌β-溶血素起協(xié)同作用，促進β-溶血素的活性。因此在兩種細菌的交界處溶血力增加，出現箭頭形溶血區(qū)。51微生物基本試驗原理和操作方法：首先在羊血平板上接種一長條金黃色葡萄球菌（藥敏質控菌）再將被檢菌與金黃色葡萄球菌接種線垂直接種一短條，兩者不能相交，應相距3mm左右，同時在被檢菌接種線對側，用同樣方法接種陰性和對照菌，35℃培養(yǎng)過夜，如放在CO2燭缸內結果更為好看（金黃色葡萄球菌用ATCC25923為佳）。52微生物基本試驗原理和操作結果：在被檢菌接種線與金黃色葡萄球菌接種線處出現一個矢狀加強溶血區(qū)，為CAMP陽性。陰性無加強溶血區(qū)。

53微生物基本試驗原理和操作氨基酸和蛋白質代謝試驗

吲哚試驗

硫化氫試驗

苯丙氨酸脫氨酶試驗

氨基酸脫羧酶試驗（賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸）

脲酶試驗

明膠液化試驗

54微生物基本試驗原理和操作吲哚試驗原理：細菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚（靛基質），經與試劑中的對二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈紅色。55微生物基本試驗原理和操作蛋白胨水培養(yǎng)基成分蛋白胨（或胰胨）10-20g氯化鈉5g蒸餾水1000ml56微生物基本試驗原理和操作

kovac氏試劑對二甲氨基苯甲醛10g純戊醇150ml純濃鹽酸50ml

先將試劑溶于醇中，緩慢加入鹽酸即成。

57微生物基本試驗原理和操作

方法：挑取純培養(yǎng)物接種蛋白胨水培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)1-2天，沿管壁徐徐加入kovac氏試劑0.5ml，使成兩層，觀察結果。58微生物基本試驗原理和操作結果：在兩者液面交界處出現紅色為陽性，無色為陰性。59微生物基本試驗原理和操作硫化氫試驗

原理：細菌分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）和含硫化物生成硫化氫，硫化氫遇鉛或鐵離子生成黑色的硫化物。由此間接地檢測細菌是否產生硫化氫。

60微生物基本試驗原理和操作培養(yǎng)基：三糖鐵培養(yǎng)基或克氏雙糖鐵培養(yǎng)基

61微生物基本試驗原理和操作結果：培養(yǎng)基黑為陽性，無變化為陰性。

62微生物基本試驗原理和操作苯丙氨酸脫氨酶試驗

原理：細菌產生苯丙氨酸脫氨酶，能使苯丙氨酸脫去氨基生成苯丙酮酸，苯丙酮酸與鐵離子作用生成綠色絡合物。63微生物基本試驗原理和操作苯丙氨酸培養(yǎng)基成分

DL苯丙氨酸0.2g（L苯丙氨酸0.1g）

酵母浸膏0.3g

氯化鈉0.5g

磷酸氫二鈉0.1g

瓊脂1.2g

蒸餾水100ml64微生物基本試驗原理和操作試劑：10%三氯化鐵溶液：將10克三氯化鐵溶于100ml蒸餾水中即成。

65微生物基本試驗原理和操作方法：將待檢菌接種于培養(yǎng)基斜面上，35培養(yǎng)24小時，滴加三氯化鐵試劑，觀察結果。66微生物基本試驗原理和操作結果：培養(yǎng)基斜面上顯綠色為陽性，不變色為陰性。

67微生物基本試驗原理和操作氨基酸脫羧酶基礎培養(yǎng)基成分

蛋白胨5g酵母浸膏3g葡萄糖1g6%溴甲酚紫灑精溶液1ml蒸餾水1000ml將上述成分溶于蒸餾水，然后加進所需氨基酸（賴氨酸，鳥氨酸、精氨酸），使其濃度為０.５％。對照管不加氨基酸。69微生物基本試驗原理和操作方法：取待檢菌接種于氨基酸脫羧培養(yǎng)基和對照管中，封滅菌液體石蠟，35培養(yǎng)24小時以上觀察結果。70微生物基本試驗原理和操作注意事項培養(yǎng)基pH應偏酸，有利于酶的形成。加封液體石蠟造成厭氧環(huán)境，在厭氧環(huán)境下氨基酸脫羧生成的胺才穩(wěn)定，另外也可避免出現假陽性。

如對照管不變色則不能判斷結果。

71微生物基本試驗原理和操作

結果：接種待檢菌的測定的培養(yǎng)基是紫色，對照管是黃色為陽性；兩管均是黃色為陰性。72微生物基本試驗原理和操作脲酶試驗原理：某些細菌能產生脲酶。脲酶可分解尿素，尿素