免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)-凝集反應(yīng)

知識(shí)目標(biāo)掌握：凝集反應(yīng)概念、特點(diǎn)及各類型反應(yīng)的原理（重難點(diǎn)）。熟悉：各類型凝集反應(yīng)的主要臨床應(yīng)用。了解：各類型凝集反應(yīng)的優(yōu)缺點(diǎn)及載體相關(guān)知識(shí)。能力目標(biāo)掌握：凝集反應(yīng)操作步驟和方法。熟悉：凝集反應(yīng)結(jié)果判讀方法。思政-素質(zhì)目標(biāo)愛崗敬業(yè)、責(zé)任心、誠信、生物安全意識(shí)、臨床免疫學(xué)思維。

教學(xué)目標(biāo)凝集反應(yīng)概念、特點(diǎn)及類型。直接凝集反應(yīng)原理、方法類型及臨床應(yīng)用。間接凝集反應(yīng)原理、方法類型及臨床應(yīng)用。抗球蛋白試驗(yàn)原理、方法類型及臨床應(yīng)用。冷凝集試驗(yàn)的原理和臨床應(yīng)用。本章要點(diǎn)概述一第一節(jié)直接凝集反應(yīng)二第二節(jié)間接凝集反應(yīng)三第三節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)四第四節(jié)冷凝集試驗(yàn)五目錄早在1896年，Widal就利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象，有效地診斷傷寒病。至1903年，Landsteiner在特異性血凝現(xiàn)象的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了人類ABO血型，并于1930年獲得了諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。

概述一、概念細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。顆粒性抗原還包括可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒(O型人紅細(xì)胞、綿羊紅細(xì)胞、聚苯乙烯膠乳、炭粒等)結(jié)合成的致敏顆粒。二、特點(diǎn)1.抗原分子大，介質(zhì)中成均勻的顆粒懸液。2.抗原抗體復(fù)合物以抗原為主。3.試驗(yàn)時(shí)稀釋抗體。4.效價(jià)報(bào)告抗體的稀釋度。三、主要技術(shù)類型按抗原的性質(zhì)和反應(yīng)方式的不同分為直接凝集間接凝集反應(yīng)板法試管法玻片法正向間接凝集試驗(yàn)反向間接凝集試驗(yàn)間接凝集抑制試驗(yàn)協(xié)同凝集試驗(yàn)反向正向間接血凝試驗(yàn)?zāi)z乳凝集試驗(yàn)抗球蛋白試驗(yàn)第一節(jié)直接凝集反應(yīng)細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為直接凝集反應(yīng)（directagglutination）。凝集反應(yīng)中的抗原稱為凝集原（agglutinogen），抗體稱為凝集素（agglutinin）。常用的凝集試驗(yàn)有玻片法和試管法兩種。一、玻片凝集試驗(yàn)YYY+臨床應(yīng)用:1.菌種鑒定2.血清學(xué)分型3.血型鑒定方法評(píng)價(jià):1.操作簡單、快速2.敏感度低3.定性檢測(cè)

二、試管凝集試驗(yàn)在試管內(nèi)顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。為半定量試驗(yàn)方法，在微生物學(xué)檢驗(yàn)中常用已知菌液與一系列稀釋的受檢血清混合，保溫后觀察每管內(nèi)抗原凝集程度，通常以產(chǎn)生明顯凝集現(xiàn)象的最高稀釋倍數(shù)作為血清中抗體的效價(jià)，亦稱為滴度。試管法結(jié)果判讀+很小的凝集顆?；鞚?無凝集現(xiàn)象與對(duì)照相同++小、部分凝集塊中等混濁+++大多凝集管底輕度混濁++++大的凝集塊清亮凝集程度沉淀上清凝集程度記錄為：＋＋＋＋（100％凝集）＋＋＋（75％凝集）＋＋（50％凝集）＋（25％凝集）臨床應(yīng)用：1.肥達(dá)試驗(yàn)Widaltest2.外斐氏試驗(yàn)Weil-felixtest3.交叉配血試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)：1.半定量試驗(yàn)2.操作簡便、快速3.敏感度不高4.可有假陽性第二節(jié)間接凝集反應(yīng)

將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。一、載體

RBC

聚苯乙烯膠乳載體的種類離子交換樹脂活性炭明膠顆粒載體的條件：1.不溶于水，理化性質(zhì)穩(wěn)定且無化學(xué)和免疫學(xué)活性。2.大小均勻，密度與介質(zhì)相近。3.能直接吸附和通過偶聯(lián)劑牢固結(jié)合抗原抗體。二、方法類型

根據(jù)致敏載體用的是抗原或抗體以及凝集反應(yīng)的方式不同，間接凝集反應(yīng)可分為4類:1.正向間接凝集試驗(yàn)

2.反向間接凝集試驗(yàn)

3.間接凝集抑制試驗(yàn)

4.協(xié)同凝集試驗(yàn)三、間接血凝試驗(yàn)抗原致敏紅細(xì)胞紅細(xì)胞+抗原抗原致敏紅細(xì)胞凝集抗體四、膠乳凝集試驗(yàn)

膠乳凝集試驗(yàn)也是間接凝集反應(yīng)，因所用的載體顆粒為聚苯乙烯膠乳而得名。膠乳凝集抑制試驗(yàn)檢測(cè)HCG：標(biāo)本中加入相應(yīng)量的HCG抗體，抗體與尿中HCG結(jié)合，再加入HCG膠乳抗原，本應(yīng)凝集反應(yīng)受到抑制，說明尿中含HCG，妊娠反應(yīng)陽性。第三節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)抗球蛋白試驗(yàn)由Coombs于1945年建立，故又稱為Coombs試驗(yàn)，是檢測(cè)抗紅細(xì)胞不完全抗體的經(jīng)典方法。Coombs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接結(jié)合在紅細(xì)胞表面抗原的不完全抗體，使紅細(xì)胞凝集。常用試驗(yàn)方法有直接抗球蛋白試驗(yàn)和間接抗球蛋白試驗(yàn)。一、直接抗球蛋白試驗(yàn)直接抗球蛋白試驗(yàn)既可用玻片法定性測(cè)定，也可用試管法作半定量分析。常用于新生兒溶血癥、自身免疫性溶血性貧血和醫(yī)源性溶血性疾病等的檢測(cè)。二、間接抗球蛋白試驗(yàn)此試驗(yàn)可用于檢測(cè)母體Rh（D）抗體，以便及早發(fā)現(xiàn)和避免新生兒溶血癥的出現(xiàn)?？捎糜趯?duì)紅細(xì)胞不相容輸血所產(chǎn)生的血型抗體進(jìn)行檢測(cè)。還可對(duì)某些細(xì)菌、立克次體感染后產(chǎn)生的不完全抗體進(jìn)行檢測(cè)。

第四節(jié)冷凝集試驗(yàn)

冷凝集試驗(yàn)是用于檢測(cè)血清中冷凝集素的方法。冷凝集素（coldagglutinin）是冷反應(yīng)型抗紅細(xì)胞抗體，具有較強(qiáng)的凝集紅細(xì)胞的作用，屬于IgM型抗體，可存在于正常人血清中，但是正常人血清抗紅細(xì)胞抗原的lgM冷凝集素效價(jià)比較低。冷凝集試驗(yàn)可協(xié)助診斷肺炎支原體感染引起的肺炎，可用于輔助診斷冷凝集素綜合征、傳染性單核細(xì)胞增多癥、瘧疾、肝硬化、淋巴瘤及多發(fā)性骨髓瘤等。冷凝集試驗(yàn)是傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)方法，但是其敏感度和特異性不強(qiáng)。小結(jié)方法類型原理臨床用途方法評(píng)價(jià)玻片凝集試驗(yàn)抗原與抗體在玻片上直接反應(yīng)血型的鑒定、菌種診斷或分型簡便、快速，敏感度低，多用于定性試驗(yàn)試管凝集試驗(yàn)抗原與系列倍比稀釋的血清在試管內(nèi)反應(yīng)交叉配血、輔助診斷傷寒和斑疹傷寒操作簡單，敏感度不高，為半定量試驗(yàn)間接凝集試驗(yàn)抗原（抗體）致敏載體，檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)抗體（抗原）檢測(cè)病原微生物和自身免疫病相關(guān)抗體操作簡單、快速，敏感度和特異性高間接凝集抑制試驗(yàn)抗原致敏載體檢測(cè)是否存在與致敏抗原相同的抗原絨毛膜促性腺激素(HCG)的檢測(cè)靈敏度高于上面間接凝