脂質(zhì)體制備技術(shù)

脂質(zhì)體制備技術(shù)第1頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Chapter?：脂質(zhì)體制備技術(shù)第一節(jié)：概述脂質(zhì)體（Liposomes)最初由Eng.學(xué)者Bargham和Standrsh將磷脂分散在水中，進(jìn)行電鏡觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)的。他們發(fā)現(xiàn)磷脂分散在水中自然形成多層囊泡，每層均為脂質(zhì)的雙分子層，囊泡中央和各層之間被水隔開(kāi)，雙分子層厚度約為4nm。一、脂質(zhì)體定義系指將藥物包封于類(lèi)脂質(zhì)雙分子層內(nèi)形成的微型泡囊（veside)二、目前研究狀況目前主要集中在三個(gè)領(lǐng)域：1）膜模擬2）藥物的控釋與靶向3）體外細(xì)胞的生物大分子轉(zhuǎn)移在應(yīng)用上：1988年，U.S.A第一個(gè)脂質(zhì)體藥物進(jìn)入臨床試驗(yàn)，至目前已有10家公司向FDA申請(qǐng)了14個(gè)此類(lèi)藥物，已獲準(zhǔn)臨床試驗(yàn)，已有部分產(chǎn)品上市。如：TLC公司的阿霉素脂質(zhì)體，順鉑脂質(zhì)體，施貴寶與TLC合作的兩性霉素脂質(zhì)體，還有正完霉素，柔紅霉素脂質(zhì)體，etc，還有空白脂質(zhì)體上市，在服用或使用前加藥物振搖即可應(yīng)用。第2頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月目前脂質(zhì)體在生物技術(shù)，免疫調(diào)節(jié)，遺傳工程,etc各領(lǐng)域之間相互滲透，特別在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中將會(huì)有更大突破。由于脂質(zhì)體藥物的治療指數(shù)高，并能降低藥物毒性和減少副作用，減少藥物劑量，因此在藥學(xué)領(lǐng)域?qū)?huì)有廣泛的應(yīng)用。第二節(jié)：脂質(zhì)體的作用特點(diǎn)脂質(zhì)體（Liposome)是一種定向藥物載體，屬于靶向給藥系統(tǒng)（tragetingdrugdeliverysystem)的一種新劑型，它具有類(lèi)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)入體內(nèi)主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬而激活機(jī)體的自身免疫功能，并改變藥物在體內(nèi)的分布，使藥物主要在肝，脾，肺，骨髓等組織器官中聚積，從而提高其治療指數(shù)。一、脂質(zhì)體劑型的特點(diǎn)1、制劑工藝簡(jiǎn)單，一般藥物都較容易包封2、水溶性和脂溶性藥物可包裹于同一脂質(zhì)中，藥物的包封率主要與藥物本身的脂-水分配系數(shù)有關(guān)，與膜材性質(zhì)有關(guān)。3、在體內(nèi)使藥物具有靶向性特征。4、藥物在脂質(zhì)體中，以非共價(jià)鍵結(jié)合。第3頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

5、能降低藥物的消除速率，增加穩(wěn)定性。6、可制備多種用途的劑型，eg：注射，口服，局部給藥etc7、靶向性，主要進(jìn)入網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)和血單核細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞間質(zhì)少8、毒性降低，藥效增強(qiáng)。藥物消除率降低，增加藥物體內(nèi)穩(wěn)定性。（前體藥物應(yīng)用時(shí)應(yīng)考慮的因素）二、脂質(zhì)體的靶向性（一）被動(dòng)靶向性（天然靶向性）這是脂質(zhì)體靜脈給藥的基本特征，是由于脂質(zhì)體進(jìn)入體內(nèi)即被巨噬細(xì)胞作為異物處理。一般的脂質(zhì)體主要被肝，脾中網(wǎng)狀細(xì)胞(phagocyticcells)吞噬，是治療肝寄生蟲(chóng)，利什曼病等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)疾病的理想藥物載體。特別在治療肝，脾腫瘤，防止腫瘤轉(zhuǎn)移，擴(kuò)散具有廣闊的前景。肌內(nèi)或皮下注射及腹腔注射后，首先進(jìn)入局部淋巴系統(tǒng)中，對(duì)淋巴系統(tǒng)疾病的治療，也有很好的靶向作用。（二）物理和化學(xué)靶向性此種靶向性是設(shè)計(jì)中利用某種物理性因素或化學(xué)因素的改變，如局部的PH值，溫度（病變部位）的改變而明顯改變脂質(zhì)體膜的通第4頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月透性引起脂質(zhì)體，選擇性釋放藥物。Forexample:

溫敏感脂質(zhì)體（temperature-sensitiveliposome)，它使用具有一定的相變溫度的脂質(zhì)混合物作為膜材或使用相變溫度為41-42°C的合成磷脂為膜材，在熱療機(jī)對(duì)腫瘤局部的作用下，當(dāng)脂質(zhì)體藥物進(jìn)入腫瘤的毛細(xì)管床時(shí)，脂質(zhì)體達(dá)到液晶態(tài)相變溫度，導(dǎo)致脂質(zhì)體迅速完全地釋放藥物，使血管內(nèi)外的藥物濃度迅速達(dá)到平衡，這種脂質(zhì)體的物理靶向性不需要脂質(zhì)體離開(kāi)毛細(xì)血管。Eg:3H-TMX(標(biāo)記甲氨蝶呤）在局部升溫的腫瘤區(qū)的攝起量可增大10倍以上，并抑制腫瘤生長(zhǎng)。

PH敏感脂質(zhì)體：利用某些弱離子性藥物包封在脂質(zhì)體中，當(dāng)其進(jìn)入體內(nèi)，在腫瘤的低PH局部或區(qū)域，可以選擇性地釋放藥物。（三）轉(zhuǎn)移靶向性這種靶向性是采用預(yù)先封閉或減少網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的攝取，然后再給藥物脂質(zhì)體。Forexample:先用膠體粒子阻斷網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬作用或先注射空白脂質(zhì)體，使肝，脾攝取脂質(zhì)體呈飽和狀態(tài)，然后再給藥物脂質(zhì)體以增加非網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的攝取。第5頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）主動(dòng)靶向性這種靶向性是在脂質(zhì)體上聯(lián)接一種識(shí)別分子，即配體，通過(guò)配體特異性專(zhuān)一地與靶細(xì)胞表面的互補(bǔ)分子相互作用，而使脂質(zhì)體在靶區(qū)釋放藥物。多糖（或糖蛋白）植物凝血素配體肽類(lèi)激素抗原，小半抗原抗體（單克隆抗體）Forexample:放線菌素D脂質(zhì)體-IgM型單克隆抗體治療CH3/He小鼠乳腺癌，顯示出比單純使用放線菌素D高得多的抗癌效果。有人將癌細(xì)胞移植于小鼠腹腔內(nèi)，次日注射該脂質(zhì)體，給藥劑量是游離劑量的1/10以下，結(jié)果完全治愈。三、脂質(zhì)體的長(zhǎng)效作用選擇脂質(zhì)體的組分和類(lèi)型直接與藥物釋放有關(guān)，一方面，藥物釋放出脂質(zhì)體是緩慢進(jìn)行的，另一方面，還可設(shè)計(jì)不同半衰期的脂質(zhì)體，作為長(zhǎng)效藥物的載體。第6頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Forexample:Rahman采用阿霉素和阿霉素脂質(zhì)體作藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)，劑量6mg/ug，靜注。血藥濃度峰值1h后的血藥濃度t1/2游離阿霉素1.7ug/ml0.3ug/ml17.3h阿霉素脂質(zhì)體20.9ug/ml10ug/ml69.3hDSPC(二硬脂酰磷脂酰膽堿)-膽固醇脂質(zhì)體做成的藥物,t1/2更長(zhǎng).四、脂質(zhì)體降低藥物的毒性一般的靶向制劑，主要被肝，脾，骨髓等網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞豐富的器官攝取絕大部份，而在心，腎中的積累量比游離藥物低很多。五、脂質(zhì)體保護(hù)被包封藥物1）體外阻止藥物的氧化或水解；2）體內(nèi)阻止酶的分解；3）在靶區(qū)中，脂質(zhì)體和細(xì)胞相互作用，或內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞后，經(jīng)溶酶體的作用而其解體釋放出藥物。第7頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)脂質(zhì)體的組成，類(lèi)型和理化性質(zhì)一、脂質(zhì)體的組成和結(jié)構(gòu)（見(jiàn)圖）脂質(zhì)體=膜材料+附加劑在磷脂的單分子結(jié)構(gòu)中，具有兩條疏水鏈和一條親水鏈，在卵磷脂-膽固醇結(jié)構(gòu)中，磷脂分子構(gòu)成一種“手杖”狀態(tài)，親水基相互靠攏，具有兩個(gè)親油基。（如上圖）二、脂質(zhì)體的類(lèi)型（一）按脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)和粒徑分類(lèi)

SUV粒徑<200nm1、單室脂質(zhì)體LUV粒徑200~1000nmnote:SUV在循環(huán)系統(tǒng)停留較長(zhǎng),靶性強(qiáng),包封容積小,包封率低

LUV膜不夠穩(wěn)定

2、多室脂質(zhì)體MLV3、多相脂質(zhì)體Note:1）多室脂質(zhì)體也稱(chēng)多層脂質(zhì)體（MLV），粒徑<5um,藥物溶液被幾層脂質(zhì)雙分子層所隔開(kāi)形成不均勻的聚集體.

第8頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2)MLV包封率高,穩(wěn)定性好,容易制備3)依制備方法,1、Bangham薄膜法制備的MLVMLV分類(lèi)2、Szoka逆相蒸發(fā)法制備的REV-MLV表示

3、Gruner改良逆相蒸發(fā)法制備的MLV為SMLV（穩(wěn)定型多層脂質(zhì)體）4)多室脂質(zhì)體，含有表面活性劑，是以單室或者多室脂質(zhì)體為主及少量的O/W或W/O/W型乳劑共混懸在水相的多相分散系。其主要優(yōu)點(diǎn)可避免單室和多室脂質(zhì)體，對(duì)脂溶性藥物包封不全而呈較大油珠，符合靜脈給藥。

1、一般脂質(zhì)體熱敏脂質(zhì)體（二）按功能分類(lèi)PH敏脂質(zhì)體

2、特殊性能脂質(zhì)體多糖被復(fù)脂質(zhì)體免疫脂質(zhì)體（IL）超聲，光敏，磁性脂質(zhì)體Note：1）多糖為糖脂類(lèi)物質(zhì)，2）IL中被抗體修飾

第9頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）按脂質(zhì)體電荷性分類(lèi)中性脂質(zhì)體脂質(zhì)體負(fù)電脂質(zhì)體正電脂質(zhì)體（四）按脂質(zhì)體用途和給藥途徑分類(lèi)1、氣霧化脂質(zhì)體6、外用，經(jīng)皮給藥脂質(zhì)體2、靜脈注射脂質(zhì)體7、肌注、局部注射脂質(zhì)體3、口服給藥脂質(zhì)體8、免疫診斷脂質(zhì)體4、眼部用藥脂質(zhì)體9、基因工程，生物工程用脂質(zhì)體5、粘膜給藥脂質(zhì)體10、其他用途，etc

三脂質(zhì)體的理化性質(zhì)（一）相變溫度（Phasetransitiontemperature)

脂質(zhì)體脂的物理性質(zhì)與介質(zhì)的溫度密切相關(guān)，當(dāng)溫度升高時(shí)，雙分子層中酰基側(cè)鏈從有序變?yōu)闊o(wú)序，引起脂膜的物理性質(zhì)的一系列變化，可由“膠晶”態(tài)變?yōu)椤耙壕А睉B(tài)，雙分子層厚度減小，膜流動(dòng)性增加，這種轉(zhuǎn)變時(shí)的溫度稱(chēng)為相變溫度。它取決于脂質(zhì)第10頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月體膜的磷脂的種類(lèi)，與側(cè)鏈R-C-基團(tuán)的長(zhǎng)短，?；介L(zhǎng)，則相變

O溫度越高，反之則越低。在相變溫度時(shí)，脂質(zhì)體內(nèi)的藥物具有最大釋放速率。

eg:二肉豆寇磷脂酰膽堿24°C

二棕櫚酸磷脂酰膽堿41°C

二硬脂酰磷脂酰膽堿58°C膽固醇具有調(diào)節(jié)膜流動(dòng)性的作用，當(dāng)在脂質(zhì)體膜中加入50%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），可使膜相變消失。

Papahadjoponlos稱(chēng)“膽固醇為流動(dòng)性緩沖劑”（fluiditybuffen）研究發(fā)現(xiàn)低于相變溫度時(shí)，磷脂中加膽固醇則可使膜減少有序排列增加膜流動(dòng)性，高于相變溫度時(shí)加膽固醇則可增加膜的有序排列而減少流動(dòng)性。脂質(zhì)體的膜材常由兩種以上磷脂組成，它們各有特定的相變溫度，在一定的環(huán)境下，它們可以同時(shí)存在不同的相，稱(chēng)之為相分離。（phaseseparations）

Sackmann曾用自旋共振光譜證明磷酯酰膽堿：磷脂酸（1：1）混合

第11頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月膜中，加多粘菌素其多粘菌素可與磷脂酸結(jié)合而誘發(fā)脂膜形成區(qū)塊結(jié)構(gòu)（Clomainstructure)（二）脂質(zhì)體的荷電性脂質(zhì)體含酸性脂質(zhì)組分多時(shí)，荷負(fù)電。Eg:PAPS含堿基（胺）荷正電不含離子的脂質(zhì)體，顯電中性其檢測(cè)方法：熒光法顯微電泳法荷電性直接與脂質(zhì)體，包封率，穩(wěn)定性，靶器分布，靶細(xì)胞作用有關(guān)（三）脂質(zhì)體，粒徑和粒度分布采用顯微鏡，電鏡，Coulter計(jì)數(shù)法，激光散射法，微孔濾膜-吸光度法對(duì)脂質(zhì)體粒徑和粒度分布的影響，主要受制備方法和類(lèi)脂用量的影響超聲法制備小單室脂質(zhì)體SUV乙醇注入法第12頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月乙醚注入法大單室脂質(zhì)體LUVCa2+融合法LUV超聲Ca2+

融合LUVMLVSUVMLV

加類(lèi)脂用量

第四節(jié)：脂質(zhì)體的制備技術(shù)近20年來(lái)，人們對(duì)脂質(zhì)體的制備進(jìn)行了大量研究，目前制備的方法頗多，這里只介紹常見(jiàn)的幾種方法。一，制備方法（一）薄膜法：又稱(chēng)干膜分散法（TFV),最早由Bamgham報(bào)道

加適量CHCl3

薄膜干燥方法：磷脂膜材脂溶性藥物可加溶劑中薄膜干膜超聲法緩沖液（含水溶薄膜振蕩分散法性藥物）振搖薄膜勻化法大多層脂質(zhì)體薄膜擠壓法Forexample:P116,VitB12脂質(zhì)體，生育酚脂質(zhì)體制備第13頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）逆相蒸發(fā)法最初由Szoka提出此法方法：

CHCl3orEt2O藥物水溶液短時(shí)超聲磷脂膜材

溶液W/O乳劑減壓蒸發(fā)

凝膠色譜

減壓蒸發(fā)

滴加緩沖液

CHCl3orEt2O

大多層脂質(zhì)體混懸液膠態(tài)狀物

（200~1000nm）

離心

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上旋轉(zhuǎn)包封率60%±本法的關(guān)鍵：在于磷脂：有機(jī)溶劑：含藥緩沖液三者比例一般有機(jī)相：水相（2~4：1）較適宜適合包裹水溶性藥物，生物大分子，抗生素etcforexample:P1171）伯氨喹脂質(zhì)體制備2）胰島素脂質(zhì)體制備（三）復(fù)乳法本法首先是由Matsumoto報(bào)道

第14頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法：乳化減壓除部分溶劑加大量水相少量水相+多量磷脂油相W/O反相膠團(tuán)也可不除溶劑乳化蒸發(fā)有機(jī)溶劑

W/O/W復(fù)乳脂質(zhì)體（包封率20%~80%）Forexample:甲氨喋呤脂質(zhì)體的制備P117類(lèi)似的方法有改良復(fù)乳法，Kin復(fù)乳法。P117其中Kin法制備的脂質(zhì)體是一種優(yōu)良的生物模型（四）熔融法此法首先由顧學(xué)裘等報(bào)道方法：少量水相溶解65°C±水相磷脂+表面活性劑油相脂質(zhì)體熔融保溫膽固醇該法不同有機(jī)溶劑，適合于工業(yè)生產(chǎn)

forexample:139—5（高三尖杉酯堿）脂質(zhì)體制備P118第15頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（五）注入法此法最早由Deamer發(fā)表方法：Et2O或EtOH

類(lèi)脂質(zhì)+脂溶性藥物油相

乳勻或攪拌脂質(zhì)體混懸液水相（或含水溶性藥物）

超聲揮盡有機(jī)溶劑（有機(jī)溶劑沸點(diǎn)以上）

Note:乙醚注入法乙醇注入法（大于乙醇法）0.25umforexample:唐松草新堿脂質(zhì)體制備P118

（六）冷凍干燥法（七）表面活性劑處理法本法來(lái)自重組膜技術(shù)，特別適合于類(lèi)脂的混合物和包封酶及生物分子。

膽酸鹽，脫氧膽酸鹽脂質(zhì)膜，多層脂質(zhì)體或單層脂質(zhì)體處理后混合膠團(tuán)

離心或凝膠過(guò)濾或透析單層脂質(zhì)體（30~180nm)第16頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月本法關(guān)鍵技術(shù)：從混合膠團(tuán)中除表面活性劑，并自發(fā)形成單層脂質(zhì)體。蛋白質(zhì)類(lèi)藥物嵌入雙層脂膜中間，包封率可高達(dá)100%。此外還有鈣融合法，加壓劑出法。Etc二、脂質(zhì)體的分離技術(shù)透析法：注意洗滌液與脂質(zhì)體混懸液應(yīng)等滲離心法凝膠過(guò)濾法：脂質(zhì)體先下，游離藥后下來(lái)三、脂質(zhì)體制備方法的評(píng)價(jià)（1）載藥量（2）穩(wěn)定性（3）形態(tài)完整性第17頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第五節(jié)：脂質(zhì)體制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)脂質(zhì)體是一個(gè)發(fā)展中的新劑型，其質(zhì)量評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)尚在逐步完善中，根據(jù)其特點(diǎn)應(yīng)從下面幾個(gè)方面來(lái)進(jìn)行控制。一、形態(tài)，粒徑及其分布采用顯微鏡，電鏡技術(shù)，電感應(yīng)，光感應(yīng)技術(shù)及激光散射或激光移度法，測(cè)定粒徑及分布狀況。二、包封率的測(cè)定脂質(zhì)體中的藥量包封率=×100%

介質(zhì)中藥量+脂質(zhì)體中藥量表示方法：

Qw：重量包封率（%）反映包入藥物量與總投量的關(guān)系

Qv：體積包封率（L/mol)反映脂質(zhì)體體積與總粒子的體積比

Ew：藥脂包封比，反映了藥物與輔料關(guān)系

W包W總-W游

Qw%=×100%orQw%=×100%W總W總第18頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月V脂質(zhì)體

W總-W游Qv%=×100%Ew%=×100%V總脂質(zhì)體W類(lèi)脂質(zhì)體三、滲漏率的測(cè)定脂質(zhì)體在液態(tài)介質(zhì)中滲漏狀況貯存一段時(shí)間后滲漏到介質(zhì)中的藥量滲漏率=×100%

貯存前包封的藥量四、藥物體外釋放度測(cè)定

Visking透析管法方法試管離心法五、藥物體內(nèi)分布的測(cè)定為藥代動(dòng)力學(xué)內(nèi)容，通常以小鼠為受試對(duì)象，將脂質(zhì)體靜注，測(cè)t-血藥濃度，t1/2，臟器組織的藥物滯留量等。六、主藥含量七、制劑通則

第19頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月磷脂的氧化程度1、氧化指數(shù)：是雙鍵偶合的指標(biāo)氧化指數(shù)=A233nm/A215nm2、氧化產(chǎn)物：丙二醛及溶血磷脂3、有機(jī)溶劑殘留附：類(lèi)脂質(zhì)體類(lèi)脂質(zhì)體亦稱(chēng)泡囊（niosomes)，系指用非離子型表面活性劑為囊材制成的單層囊泡（nonionicsurfactantvesicles)，其特點(diǎn)是穩(wěn)定性高于脂質(zhì)體，可克服脂質(zhì)體因磷脂氧化而帶來(lái)的毒性，近年來(lái)受到過(guò)內(nèi)外的關(guān)注，成為很有前途的新型藥物的傳遞系統(tǒng)。類(lèi)脂質(zhì)體的制法與脂質(zhì)體相近。如由薄膜分散法制得的卡鉑泡囊與異煙肼炮囊等，均具有緩釋與肺靶向的雙重性質(zhì)，可提高藥效，降低毒副作用。第20頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第六節(jié)：脂質(zhì)體作用機(jī)制給藥途徑脂質(zhì)體屬于膠體系統(tǒng)，具有靶向和緩釋作用，從而提高療效，降低不良反應(yīng)，能顯著增強(qiáng)細(xì)胞攝起，延緩或克服耐藥性，甚至可使藥理作用小或無(wú)活性的物質(zhì)（eg:油酸）成為顯著作用的藥物。脂質(zhì)體在體內(nèi)組織處置及在細(xì)胞水平上的作用機(jī)制有吸附，交換，融合，內(nèi)吞，滲透和擴(kuò)散等。一、脂質(zhì)體與細(xì)胞的相互作用1、吸附在接近或低于相變溫度時(shí)，流動(dòng)性低的脂質(zhì)體可穩(wěn)定吸附到培養(yǎng)的細(xì)胞表面，屬于普通物理吸附現(xiàn)象。2、脂交換脂質(zhì)體的脂類(lèi)與細(xì)胞膜上脂類(lèi)發(fā)生交換，此過(guò)程在細(xì)胞表面蛋白的介導(dǎo)下，僅發(fā)生在脂質(zhì)體雙分子層中外部單分子層和細(xì)胞膜外部的單分子層之間，而脂質(zhì)體內(nèi)含物并未進(jìn)入培養(yǎng)細(xì)胞。脂質(zhì)體與血漿中各組織細(xì)胞也可能發(fā)生交換。3、內(nèi)吞內(nèi)吞是脂質(zhì)體主要作用機(jī)制，是非滲透性載體穿過(guò)細(xì)胞的最普通形式，內(nèi)吞后進(jìn)入溶酶體中或在溶酶體外作用。結(jié)果融合消化裂解釋藥4、融合膜體的膜與細(xì)胞膜融合，載藥入細(xì)胞內(nèi)。

第21頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5、滲漏當(dāng)受纖維cell，肝Ca-cell及肝，膽囊cell等誘導(dǎo)，脂質(zhì)體內(nèi)含物漏出，與細(xì)胞表面蛋白有關(guān)。6、擴(kuò)散皮膚用脂質(zhì)體，凝膠制劑的機(jī)制7、磷脂酯酶消化脂質(zhì)體磷脂膜消化與體內(nèi)磷酸酯酶含量成正比，腫瘤組織中此酶水平較高，因此脂質(zhì)體在腫瘤組織中更易釋藥。二、脂質(zhì)體給藥途徑（一）靜脈注射（二）肌注，皮下注射（三）口服（四）眼部給藥（五）肺部給藥（六）皮膚給藥第22頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

綜述長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的研究概況一、歷史及機(jī)理二、衍生化脂材料三、制備方法四、現(xiàn)狀與進(jìn)展參考文獻(xiàn)第23頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體（LongCirculatingLiposomes,LCL)是指可逃避單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)（MononuclearPhagocyteSystem,MPS,即通常所說(shuō)的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，RES）的識(shí)別及捕獲，長(zhǎng)時(shí)間停留在循環(huán)系統(tǒng)中的脂質(zhì)體。從廣義上講，長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體包括：1）高溫相變中性磷脂制成的小單室脂質(zhì)體2）空間穩(wěn)定脂質(zhì)體（StericallyStablizedLiposomes,SSL)或稱(chēng)隱形脂質(zhì)體(StealthLiposomes,SL)，后者實(shí)際上是美國(guó)脂質(zhì)體技術(shù)公司（現(xiàn)名SEQUUS公司，已并入ALZA公司）的商標(biāo)名稱(chēng)。文獻(xiàn)中長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體往往指后者。與普通脂質(zhì)體相比，長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體具有以下優(yōu)點(diǎn)：1）循環(huán)半衰期長(zhǎng)，隱形脂質(zhì)體人體內(nèi)t1/2可長(zhǎng)達(dá)45小時(shí)。2）減少被MPS攝取的速度和程度，降低對(duì)機(jī)體這一重要防御系統(tǒng)的傷害，保證其正常生理功能的行使。3）空間穩(wěn)定脂質(zhì)體可實(shí)現(xiàn)免疫脂質(zhì)體的體內(nèi)靶向性。4）增加靶部位如腫瘤組織及感染部位的吸收量，原理是穿過(guò)病理狀態(tài)下高通透的毛細(xì)血管間隙，進(jìn)入組織內(nèi)部。5）空間穩(wěn)定脂質(zhì)體體內(nèi)過(guò)程可具有線性藥動(dòng)學(xué)特征，而普通脂質(zhì)第24頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月體體內(nèi)過(guò)程一般為劑量依賴(lài)性的非線性過(guò)程。一、歷史及機(jī)理1965年Bangham發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體，70年代Gregoriadis首先將脂質(zhì)體用于藥物傳遞。70年代后期至80年代初期對(duì)脂質(zhì)體的研究達(dá)到高潮，大量文獻(xiàn)發(fā)表，SEQUUS等公司先后成立。但是當(dāng)時(shí)以卵磷脂（大多自行提取，純度不高）制備的普通脂質(zhì)體體內(nèi)外穩(wěn)定性差，體外放置穩(wěn)定不超過(guò)二星期，靜注后易于被單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)捕獲，集中富集于肝脾，其他組織分布少，體內(nèi)半衰期不超過(guò)1小時(shí)，難以到達(dá)其他靶位，極大地限制了臨床應(yīng)用。研究領(lǐng)域內(nèi)出現(xiàn)了明顯的失望情緒，80年代中期文獻(xiàn)量顯著下降。但由于脂質(zhì)體天然具有的優(yōu)點(diǎn)，制備用材料與細(xì)胞膜脂成分相同，可與細(xì)胞融合；生物相容性高，無(wú)毒性。研究者們沒(méi)有放棄努力，在提高天然磷脂純度，應(yīng)用合成磷脂、減小粒徑（SUV的t1/2長(zhǎng)于LUV和MLV)，選擇抗氧劑，制成凍干脂質(zhì)體和前體脂質(zhì)體等方面進(jìn)行了不懈的探索，解決了體外穩(wěn)定性問(wèn)題，由高溫相變中性磷脂（如二脂酰磷脂酰膽堿或神經(jīng)鞘磷脂）第25頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月和高比例膽固醇制成的小單室脂質(zhì)體使循環(huán)時(shí)間有相當(dāng)程度的延長(zhǎng)，成功的例子如DaunlXome，其機(jī)理是粒徑小，表面積小，生溫度下，脂質(zhì)體呈膠態(tài)，血漿中的蛋白成分不易粘附，脂蛋白的破壞作用和免疫調(diào)理受到抑制；研究者們從紅細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間停留在循環(huán)系統(tǒng)中得到啟發(fā)，模擬其膜脂組成制備脂質(zhì)體，體內(nèi)外穩(wěn)定性大大改善，靜注后循環(huán)時(shí)間大大延長(zhǎng)。1987年Allen等首先報(bào)道了在脂材料中摻入單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷酯（GMI）的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體；1988年Gabizon等報(bào)道了在脂材料中摻入氫化磷脂酰肌醇（HSPI）的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。但是單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷酯及氫化磷脂酰肌醇提取和合成困難，來(lái)源有限，只適用于高溫相變磷脂，不利于規(guī)?；瘧?yīng)用。研究中，人們從分子水平掌握了空間穩(wěn)定的機(jī)理。摻入神經(jīng)節(jié)苷酯和氫化磷脂酰肌醇，其分子的親脂性部分保留于脂質(zhì)雙分子層中，親水部分伸展于外，形成空間屏障（StericalBarrier），阻止血中各種蛋白成分，尤其是具調(diào)理作用的成分如補(bǔ)體C3等，粘附膜表面，防止調(diào)理化，從而抑制經(jīng)典和替代免疫途徑的啟動(dòng)，避免單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬。這一機(jī)理指明了尋找替代品的方向，即親水性高分子衍生化第26頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月的脂材料，1989年Allen和Klibanov等先后報(bào)道了使用二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的聚乙二醇衍生物（PEG-DSPE）制備的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。從此長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體研究進(jìn)入了快速發(fā)展階段。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的發(fā)展是仿生學(xué)的成果。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的出現(xiàn)，促進(jìn)了整個(gè)脂質(zhì)體領(lǐng)域的復(fù)興；長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的研究，形成了脂質(zhì)體研究史上的第二高潮（八十年代末至今）。其標(biāo)志就是1989年《JOVRNALOFLIPOSOMERESEARCH》創(chuàng)刊.二、衍生化脂材料為達(dá)到長(zhǎng)循環(huán)的目的，衍生化脂材料所需要的結(jié)構(gòu)特征：1）脂部分親脂性足夠強(qiáng)，保證其長(zhǎng)時(shí)間保留于脂質(zhì)體膜中，不被血流機(jī)械剝脫；2）親水性高分子部分鏈長(zhǎng)適宜，以PEG為例，分子量不得小于7503）偶聯(lián)鍵在體內(nèi)穩(wěn)定，不易水解導(dǎo)致脫保護(hù)。衍生化脂材料以脂部分組成可分為三類(lèi)：1）磷脂衍生物，如磷脂酰乙醇胺衍生物、磷脂酰甘油衍生物。2）甾醇衍生物，最早由Allen等使用，近年主要為日本研究者用，由于合成相對(duì)困難和對(duì)雙分子層結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定不利，應(yīng)用較少。第27頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3）類(lèi)脂衍生物，如吐溫80，十八胺的聚乙二醇衍生物從前述條件來(lái)看1）類(lèi)優(yōu)于2）3）類(lèi)。親水性高分子部分則主要使用聚乙二醇（PEG）；研究表明PEG2000-DSPE較右旋糖苷、聚乳酸、聚乙烯醇、糊精、聚乙烯吡咯烷酮、普朗尼克衍生物甚至同類(lèi)的PEG2000-DPPE效果更好，這是由于：1）PEG親水性聚乙二醇具有強(qiáng)親水性（高分子量聚乙二醇生化提取時(shí)可用作蛋白脫水劑）。單純PEG2000以任意線圈構(gòu)象存在時(shí)，每個(gè)分子能結(jié)合136±4個(gè)水分子，而以Brush構(gòu)象存在的DHP-PEG2000分子能結(jié)合210±6個(gè)水分子。隨PEG-脂質(zhì)復(fù)合物濃度增加至約7mol%時(shí)，脂質(zhì)體雙分子層絕熱壓縮系數(shù)增加，提示脂質(zhì)頭基區(qū)水分子減少，使脂質(zhì)體表層脂質(zhì)雙分子層缺如降低，磷脂?；渹?cè)面包蔽增加。PEG水合作用與脂質(zhì)頭基區(qū)去水合作用對(duì)含有5-7mol%PEG-脂質(zhì)復(fù)合物的脂質(zhì)體熱力學(xué)穩(wěn)定性均有正向作用，而當(dāng)PEG-脂質(zhì)復(fù)合物濃度進(jìn)一步增加時(shí)，由于PEG側(cè)面排斥作用，脂質(zhì)頭基區(qū)水合增加，雙分子層包蔽弱化，脂質(zhì)體穩(wěn)定性反而降低。2）PEG柔順性聚乙二醇為鏈狀分子，無(wú)環(huán)系結(jié)構(gòu)，分子結(jié)構(gòu)第28頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月可自由扭轉(zhuǎn)，可使脂質(zhì)體表面聚合物層出現(xiàn)一個(gè)構(gòu)象云，使之在相對(duì)較低的濃度時(shí)也能阻止溶質(zhì)滲透，如0.2%摩爾的PEG4400已有保護(hù)作用，從高分子溶液的簡(jiǎn)單統(tǒng)計(jì)模型可以粗略解釋?zhuān)喊迅叻肿尤芤阂暈橐粋€(gè)三維網(wǎng)絡(luò)，每格均被一個(gè)聚合單元或溶劑（水）分子所占據(jù)。聚合物分子柔順性越好，聚合單元相對(duì)于鄰近單元的運(yùn)動(dòng)就越獨(dú)立，這樣它可能構(gòu)象的總數(shù)就越多，從一個(gè)構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪粋€(gè)構(gòu)象的速率就越快，結(jié)果是水溶性使高分子所有可能的構(gòu)象分布成為一種統(tǒng)計(jì)“云”而存在。高分子的柔順性使其在溶液中占據(jù)許多格，可瞬時(shí)把水分子擠出，故使需要自由的水分子進(jìn)行擴(kuò)散的蛋白質(zhì)不可通過(guò)。因此，少量的具有水溶液性和高柔順性的聚合物分子就能在脂質(zhì)體表面形成足夠密的“構(gòu)象云”，從而保護(hù)脂質(zhì)體不受破壞或發(fā)生修飾作用。如果固定在脂質(zhì)體上的聚合物有一剛性鏈，其可能性構(gòu)象很少，構(gòu)象之間轉(zhuǎn)變很慢，這就導(dǎo)致其“構(gòu)象云”密度很低且不均勻，其在網(wǎng)絡(luò)模型中，表現(xiàn)為存在足夠多的水分子空間，使得血漿蛋白能擴(kuò)散到達(dá)脂質(zhì)體表面。Torchilin應(yīng)用計(jì)算機(jī)模擬方法，將固定在脂質(zhì)體表面的聚合物空間分布用一個(gè)三維隨機(jī)飛行模型來(lái)模擬，發(fā)展了柔順性高分子在第29頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月粒子表面的行為模型。假定聚合物由能?chē)@鏈段連接點(diǎn)自由轉(zhuǎn)動(dòng)且剛性的鏈段組成，其長(zhǎng)度是柔順型的5倍。計(jì)算機(jī)分析結(jié)果表明：柔順型聚合物形成高密度“構(gòu)象云”。而同樣長(zhǎng)度剛性聚合物則形成寬松可滲透“云”。該模型的另一結(jié)論是PEG在不飽和濃度時(shí)，脂質(zhì)體表面可有兩種反應(yīng)活性中心，一種是未被PEG占據(jù)的部分，性質(zhì)與普通脂質(zhì)體表面相同，另一種是被PEG占據(jù)的部分，能阻礙修飾作用發(fā)生。但這一模型忽視了構(gòu)象云之間的影響以及蛋白質(zhì)與脂質(zhì)膜間吸引力對(duì)構(gòu)象云的影響。普通磷脂?；溙紨?shù)隨來(lái)源不同而有差異，14-22之間不等，即PEG-DPPE中棕櫚酰碳數(shù)；PEG-DSPE中硬脂酰碳數(shù)為18，使得PEG鏈充分伸展于雙分子層外，相同鏈長(zhǎng)下構(gòu)象云覆蓋范圍更大，保護(hù)作用更強(qiáng)。3）與脂膜結(jié)合緊密程度通常認(rèn)為，血液中脂質(zhì)體的破壞是由于高密度脂蛋白（HDL）等親脂性蛋白把磷脂分子從雙分子層中轉(zhuǎn)移出來(lái)，破壞了脂質(zhì)雙分子層的緊密程度，使其通透性增加，導(dǎo)致脂質(zhì)體包封物泄漏。單純Me-PEG或PEG-硬脂酸不能降低RES對(duì)脂質(zhì)體的攝取，因?yàn)檫@些化合物與脂質(zhì)體連接很弱；PEG-二棕櫚酰甘油酯和PEG-膽固醇使脂質(zhì)體循環(huán)延長(zhǎng)的作用大于Me-PEG第30頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月和PEG-硬脂酸而小于DSPE-PEG，其較易被HDL從脂質(zhì)體中轉(zhuǎn)移或交換出來(lái)，或與PEG相連的鍵斷裂，使PEG衍生物或PEG離開(kāi)脂質(zhì)體，導(dǎo)致脂質(zhì)體被破壞而清除；DSPE-PEG有兩個(gè)飽和十八碳?；?，與脂質(zhì)體連接最牢，保護(hù)作用最強(qiáng)，與GMI相比，PEG-DSPE除用量較少外，其優(yōu)點(diǎn)還表現(xiàn)在：易于合成，無(wú)毒，無(wú)免疫原性，能使粒徑范圍較寬的脂質(zhì)體循環(huán)延長(zhǎng)，同時(shí)，DSPE-PEG適用于與高或低溫相轉(zhuǎn)變的磷脂配伍，而GMI只適用于高溫相轉(zhuǎn)變磷脂。4）PEG鏈長(zhǎng)和濃度隨PEG-磷脂酰乙醇胺濃度增加，PEG鏈加長(zhǎng)，其抑制脂質(zhì)體凝集程度也增大。在10mol%時(shí)，PEG750-磷脂酰乙醇胺，PEG2000-磷脂酰乙醇胺，PEG5000-磷脂酰乙醇胺對(duì)脂質(zhì)體凝集抑制程度分別為14%、55%和100%。當(dāng)濃度處于0-10mol%時(shí)，PEG750-磷脂酰乙醇胺抑制RES攝取的作用呈線性增加，半衰期呈線性延長(zhǎng)；而對(duì)PEG2000-磷脂酰乙醇胺和PEG5000-磷脂酰乙醇胺而言，當(dāng)濃度增加到5mol%時(shí)，這種抑制作用達(dá)到坪期。脂質(zhì)體凝聚結(jié)構(gòu)從層狀轉(zhuǎn)變到膠束狀會(huì)經(jīng)歷一個(gè)雙層平盤(pán)中間態(tài)，一旦轉(zhuǎn)變?yōu)殚_(kāi)放結(jié)構(gòu)，其第31頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月藥物包裹能力喪失。因此摻入到脂質(zhì)體中的PEG-脂質(zhì)復(fù)合物的上限取決于形成雙層平盤(pán)的濃度，而不是混合膠束形成的濃度。該濃度受PEG鏈長(zhǎng)和磷脂鏈長(zhǎng)影響，而磷脂飽和度和膽固醇的存在與否并不影響。所以目前為止最常用的衍生化脂材料是PEG衍生化的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（PEG-DSPE），常用量5-10%mol，大于20%雙分子層不穩(wěn)定。三、制備方法對(duì)于第一類(lèi)長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，制備與普通脂質(zhì)體相同；而第二類(lèi)-空間穩(wěn)定脂質(zhì)體則有：1、常規(guī)法將衍生化脂材料與普通脂材料混合或共溶于溶劑中，按脂質(zhì)體制備方法，如逆相蒸發(fā)法等進(jìn)行，最為常用。2、摻入法將制成的脂質(zhì)體與衍生化脂材料混合，溫育而成。優(yōu)點(diǎn)：衍生脂分子主要定位于脂雙分子層外層，避免了對(duì)內(nèi)部空間的占用，實(shí)際包封體積大。第32頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月缺點(diǎn)：1）增加操作步驟2）衍生脂負(fù)載量無(wú)保證3、偶聯(lián)法將制成的脂質(zhì)體與親水性高分子化學(xué)偶聯(lián)而成。優(yōu)點(diǎn)：同上，同時(shí)可通過(guò)控制反應(yīng)來(lái)控制負(fù)載量缺點(diǎn)：1）操作復(fù)雜2）適用范圍窄，若藥物可參與反應(yīng)，使用不便四、現(xiàn)狀與進(jìn)展（一）長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的靶向給藥靶向給藥的概念是本世紀(jì)初由Ehrlich提出的，主要是為了提高藥物在體內(nèi)的選擇性并降低毒副作用。研究對(duì)象主要是抗癌藥等細(xì)胞毒性藥物。至今，圍繞這一目標(biāo)所取得的進(jìn)展不大，主要集中于長(zhǎng)循環(huán)藥物傳輸系統(tǒng)方面。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體適于靶向治療應(yīng)用，特別是它能選擇性地趨向腫瘤組織并保持較高的藥物濃度（大于注射劑量的10%），使得這種類(lèi)型脂質(zhì)體在治療癌癥方面應(yīng)用前景廣闊。它在循環(huán)中的半衰期可達(dá)幾十小時(shí)，腫瘤組織生長(zhǎng)時(shí)，其內(nèi)部會(huì)生長(zhǎng)出新的血管，并且可以通過(guò)血管壁上固有的孔

第33頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月隙為腫瘤組織提供其生長(zhǎng)所需的氧和氮。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體被吸收進(jìn)入腫瘤組織機(jī)制與以下兩個(gè)因素有關(guān)：1）在腫瘤血管生成過(guò)程中其滲透性的增加使長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體能從毛細(xì)血管末端滲漏出來(lái)，并集中于腫瘤組織的內(nèi)部間隙。2）長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體與普通脂質(zhì)體相比具有血管滲透系數(shù)增加的特性，使得它能更容易透過(guò)毛細(xì)血管，然后可能通過(guò)細(xì)胞間的途徑，到達(dá)腫瘤細(xì)胞間隙。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體能集中于感染部位的能力可能是在疾病過(guò)程中感染組織生長(zhǎng)時(shí)，毛細(xì)血管滲透性增加的結(jié)果。在人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)表明，長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體與游離藥物或普通脂質(zhì)體相比具有更小的血漿清除率、表觀分布容積以及更大的藥-時(shí)曲線下面積，而且所包封的藥物在人體內(nèi)的半衰期達(dá)45小時(shí)。當(dāng)前進(jìn)展集中于結(jié)合其它脂質(zhì)體類(lèi)型的研究，主要有：1）長(zhǎng)循環(huán)免疫脂質(zhì)體長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體終究屬于被動(dòng)靶向制劑，在某些情況下，它并不會(huì)特別有效，例如，根除循環(huán)系統(tǒng)中的白血病細(xì)胞或轉(zhuǎn)移到血液或淋巴系統(tǒng)中的癌細(xì)胞；因此需要主動(dòng)靶向的免疫脂質(zhì)體（immunoliposome)。但和其他抗體介導(dǎo)的常規(guī)靶向給藥制劑一樣，普通免疫脂質(zhì)體在體內(nèi)無(wú)效，這主第34頁(yè)，課件共43頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月要是因?yàn)槠胀ㄖ|(zhì)體在體內(nèi)能很快被單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬，表面結(jié)合抗體的普通免疫脂質(zhì)體因其免疫激活作用進(jìn)一步增強(qiáng)吞噬而導(dǎo)致其失效。所以要實(shí)現(xiàn)脂質(zhì)體的體內(nèi)特異性靶向，開(kāi)發(fā)長(zhǎng)循環(huán)的空間穩(wěn)定脂質(zhì)體是必要的?？臻g穩(wěn)定的免疫脂質(zhì)體（stericallyStabilizedimmunoliposome,S-immunoliposome)是一種表面結(jié)合有特異抗體的空間穩(wěn)定脂質(zhì)體，可在循環(huán)中長(zhǎng)時(shí)間存在使得其有充分的機(jī)會(huì)尋找靶位并與之結(jié)合而進(jìn)一步提高治療指數(shù)。Allen等制備了阿霉素靶向脂質(zhì)體，在鼠體內(nèi)較非靶向脂質(zhì)體對(duì)人類(lèi)B型淋巴瘤更有效。在抗體和PEG鏈同時(shí)結(jié)合在脂質(zhì)體表面的情況下