中藥比較藥代動力學研究思路與應用課件

中藥比較藥代動力學研究思路與應用宋敏 博士副教授藥物分析教研室中國藥科大學1中藥比較藥代動力學研究思路與應用宋敏 博士副教授1中藥研究現狀中藥研究熱點：質量控制、藥效物質基礎 質量控制：DNA分子標記技術建立部分動物藥的鑒別方法采用生物自顯影技術、細胞膜技術、生物活性測定等生物方法建立藥材的定性鑒別和定量分析方法采用“一標多測”技術建立多成分含量測定方法；采用指紋圖譜分析法建立部分藥材的整體質量控制方法--逐步由單一指標性成分定性定量向活性、有效成分及生物測定的綜合檢測過渡

2中藥研究現狀中藥研究熱點：質量控制、藥效物質基礎2中藥藥代動力學∈藥效物質基礎研究目前，研究手段大多與化學藥物相類似，針對已知活性成分單體進行研究，但單味中藥即是一個化學分子庫，且有效成分不甚明確，相互間可能存在的影響關系不明確。thekavaextractincreasedtheoralbioavailabilityofkawaininratwhichwasalsothemaincauseoftheadversedrugreactionPharmacokineticsanddispositionofthekavalactonekawain:interactionwithkavaextractandkavalactonesinvivoandinvitro.Drug.Metab.Dispos.2005,33,1555–1563.中藥藥代動力學研究現狀3中藥藥代動力學∈藥效物質基礎研究中藥藥代動力學研究現狀3中藥藥代動力學∈藥效物質基礎研究中藥中化學成分存在相互影響ThecoexistingingredientsinGentianamanshuricahadremarkableinfluenceonthepharmacokineticsofgentiopicrinStudiesonpharmacokineticsofgentiopicrininlongdananditscompoundpreparationinrats.Chin.Pharm.J.2003,40,212–215.中藥藥代動力學研究現狀4中藥藥代動力學∈藥效物質基礎研究中藥藥代動力學研究現狀4中藥藥代動力學有效成份單體與其在中藥提取物中的體內過程并不一致，勢必在藥理作用上得以體現SuchasdihydrotanshinoneandcryptotanshinonewerelessactiveinacetylcholinesteraseinhibitorywhenisolatedRen,Y.H.,Peter,J.H.,Robert,C.H.,Melanie-Jayne,R.H.,2004.NovelditerpenoidacetylcholinesteraseinhibitorsfromSalviamiltiorrhiza.PlantaMed.2004,70,201–204.5中藥藥代動力學有效成份單體與其在中藥提取物中的體內過程并不一中藥藥代動力學藥理作用差異salvinolicacidB,whichisthemainhydrophiliccomponentinS.miltiorrhizaBge.,showedlowereffectiveconcentrationininvitroangiogenesisstudythanthecrudeextract

CrudeextractofSalviamiltiorrhizaandsalvianolicacidBenhanceinvitroangiogenesisinmurineSVRendothelialcellline.PlantaMed.2003,69,26-32中草藥間的相互配伍反應及與其他藥物的相互作用日益得到重視，但仍需進一步研究6中藥藥代動力學藥理作用差異6 挖掘丹參藥材中共存組份之間可能存在的相互影響情況，認識丹參藥效物質基礎，為臨床用藥提供指導，為新藥開發(fā)提供理論依據。第一部分

丹參提取物有效成分比較藥代動力學7 挖掘丹參藥材中共存組份之間可能存在的相互影響情況，第一部分

丹參提取物有效成分比較藥代動力學丹參水溶性成分丹參酯溶性成分8第一部分

丹參提取物有效成分比較藥代動力學丹參水溶性成分8丹參水溶性成分:丹酚酸B和原兒茶醛 丹酚酸B：丹參水溶性成分中含量最高和藥典規(guī)定的含量測定指標成分。 原兒茶醛：丹酚酸B在體外可能的降解產物。9丹參水溶性成分:丹酚酸B和原兒茶醛 丹酚酸B：丹參水溶性成實驗條件ThermoFinniganSurveyorLC-TSQQuantumUltraAM液相色譜串聯四極質譜系統(美國菲尼根質譜公司)。色譜柱：Waters-C18250mm4.6mm,5m (預柱為C18,10mm4.6mm,5m)；流動相：甲醇(A)－1％冰乙酸(B)為流動相， 梯度洗脫：0min(40％A)-4min(40％A)-4.1min(80％A)-10min(80％A)；流速：1.0mL·min-1，柱后分流，0.3mL·min-1進入質譜檢測器；進樣量：20l。一、原兒茶醛的藥動學研究10實驗條件ThermoFinniganSurveyorL質譜圖Massspectraofprotocatechualdehyde(A)andinternalguaiacol(B)AB11質譜圖MassspectraofprotocatecA:BlankplasmaB:Protocatechualdehydeaddedtoblankplasma,Cprotocatechualdehyde=200.0ng·ml-1(tR=4.90min)C:Ratplasmasampletaken20minafterigofprotocatechualdehyde,Cprotocatechualdehyde=1002.7ng·ml-1(tR=4.89min)ABC12A:BlankplasmaABC12藥動學試驗設計Sprague-Dawley大鼠6只，雌雄各半，體重250±10g，由南京醫(yī)科大學動物實驗中心提供。大鼠于受試的前晚起禁食，不禁水，于灌藥4小時后給食。大鼠灌胃給藥原兒茶醛62mg·kg-1。分別于給藥后2、5、10、15、20、30、40min和1.0、1.5、2.0、3.0h從眼底靜脈叢取血0.5mL，置肝素鈉抗凝處理過的試管中，3000r·min-1離心10min，轉移血漿，置-20℃保存待測。13藥動學試驗設計Sprague-Dawley大鼠6只，雌雄各半原兒茶醛藥－時曲線Meanplasmaconcentration-timecurveafterigprotocatechualdehyde62mg·kg-1inrat達峰時間在10～15min，而后以極快的速度消除，180min后只能測到少數大鼠的血藥濃度。14原兒茶醛藥－時曲線Meanplasmaconcentra色譜條件與質譜條件質譜條件 丹酚酸B是三分子丹參素和一分子咖啡酸的縮合物，雖然在負離子監(jiān)測模式下也可生成m/z717的[M-H]-，繼而經二級碰撞脫去一分子丹參素產生子離子m/z519[M-198-H]-，但在相同的碰撞能量下也可生成脫去兩分子丹參素的子離子m/z321，兩者豐度相差不大，不夠穩(wěn)定如圖所示；相比較正離子監(jiān)測模式下[M+Na]＋峰m/z741較穩(wěn)定，且其子離子m/z561為脫去一分子咖啡酸后生成，豐度較強，因此被選用。ABNegativemode; B.Positivemode二、丹酚酸B的藥動學研究15色譜條件與質譜條件質譜條件ABNegativemode丹酚酸B在大鼠體內的藥－時曲線Meanplasmaconcentration-timecurveofsalvianolicacidBafterig.salvianolicacidB260mg·kg-1inrat16丹酚酸B在大鼠體內的藥－時曲線Meanplasmacon三、丹參水溶性提取物的中

丹酚酸B和原兒茶醛的藥動學灌胃試液的配制：取丹參干燥藥材粉末500g，水1000mL提取三次，每次1hour，過濾后濾液濃縮，再分別用60%,85%和95%的乙醇沉淀鞣質，過濾，濾液減壓濃縮至干，用適量生理鹽水溶液即得，HPLC-UV測定其中丹酚酸B含量為26mg/mL，原兒茶醛為6.2mg/mL。17三、丹參水溶性提取物的中

丹酚酸B和原兒茶醛的藥動學灌胃試液血藥濃度經時過程 大鼠灌胃給藥丹參水提物（其中相當于丹酚酸B260mg·kg-1和原兒茶醛62mg·kg-1）后的丹酚酸B和原兒茶醛的藥－時曲線。Meanplasmaconcentration-timeprofilesofsalvianolicacidBandprotocatechualdehydeinratafterigofDanshenwatersolubleextract18血藥濃度經時過程 大鼠灌胃給藥丹參水提物（其中相當小結與討論原兒茶醛：大鼠灌胃給藥原兒茶醛單體后的AUC為64754.0ng/ml·min，而灌胃給藥含有相同含量原兒茶醛的丹參水提物后，其AUC只有25067.9ng/ml·min，即單體給藥的AUC為提取物給藥的2.6倍，Cmax為5.1倍，MRT為0.4倍，可見原兒茶醛單體給藥時吸收較好，而消除快；以提取物方式給藥后的原兒茶醛呈一房室模型，即只在中央室少量吸收，未向周邊室分布就開始消除。Comparisonoftheplasmaconcentration-timeprofilesofprotocatechualdehyde19小結與討論原兒茶醛：大鼠灌胃給藥原兒茶醛單體后的AUC為64小結與討論丹酚酸B：以提取物方式給藥后的丹酚酸B的AUC為98904.3ng/ml·min，是單體方式給藥后的AUC(為22569.4ng/ml·min)的4.4倍，Cmax為3.4倍，MRT為1.5倍，即提取物方式給藥使丹酚酸B的吸收變好了，消除減慢了?？赡艿脑虬ㄌ崛∥镏械牟⒋娉煞执龠M了丹酚酸B的吸收并減緩其消除，或其它成分的代謝轉化。Comparisonoftheplasmaconcentration-timeprofilesofsalvianolicacidB20小結與討論丹酚酸B：以提取物方式給藥后的丹酚酸B的AUC為9小結 經過大鼠原兒茶醛和丹酚酸B的藥動學比較研究可知，丹參藥材水溶性提取物中的其他組份可直接影響原兒茶醛和丹酚酸B的吸收及消除，分別對它們產生抑制和促進作用。因此，利用中藥中含有的“標志成分”的純品（或標準品）進行藥動學研究是必要的，這也是目前中藥藥動學研究的重要方法，可以提供較好的參考，但卻不能以此代替中藥材提取物或中藥復方制劑（更復雜）的藥動學研究。21小結 經過大鼠原兒茶醛和丹酚酸B的藥動學比較研究可丹參脂溶性成分的大鼠藥代動力學研究 同時分析檢測7個活性成分，獲得其中5個成分的大鼠體內的經時過程Meanratio-timeprofileofseveralcompoundsinDanshenaceticetherextract22丹參脂溶性成分的大鼠藥代動力學研究 同時分析檢測7個活性成分藥代動力學試驗設計 Sprague-Dawley大鼠18只，平分為3組，每組雌雄各半，體重250±10g，大鼠于受試的前晚起禁食，不禁水，于給藥4小時后進食。3組大鼠分別灌胃給藥丹參酮ⅡA單體8.0mg·kg-1

隱丹參酮單體5.7mg·kg-1丹參脂溶性提取物 （相當于分別含隱丹參酮、丹參酮ⅡA為5.7和8.0mg·kg-1） 分別于給藥后5、10、15、20、30、40min和1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24.0h從眼底靜脈叢取血0.5mL，置肝素鈉抗凝處理過的試管中，3000r·min-1離心10min，轉移血漿，置-20℃保存待測。23藥代動力學試驗設計 Sprague-Dawl藥代動力學結果-1Meanconcentration–timeprofilesofcryptotanshinoneinratplasmaafterintra-gavageofcryptotanshinone(5.7mg/kg)andtanshinonesextract(23.3mg/kg)(mean±S.D.,n=6).TheCmaxandAUCweresignificantlydifferent(P<0.001).24藥代動力學結果-1Meanconcentration–tiMeanconcentration–timeprofilesoftanshinoneIIAinratplasmaafterintra-gavageofcryptotanshinone(5.7mg/kg),tanshinoneIIA(8.0mg/kg)andtanshinonesextract(23.3mg/kg)(mean±S.D.,n=6).藥代動力學結果-225Meanconcentration–timepr結果分析與討論1.灌胃丹參酮ⅡA或隱丹參酮單體后丹參酮ⅡA的藥動學結果比較： 根據隱丹參酮的代謝物丹參酮ⅡATmax為25min可以發(fā)現，隱丹參酮在大鼠體內很快就發(fā)生脫氫反應被代謝丹參酮ⅡA，灌胃丹參酮ⅡA8mg/kg時AUC為499.37ng/ml·min還沒有灌胃隱丹參酮5.7mg/kg時代謝產生的丹參酮ⅡA的AUC為560.68ng/ml·min高，說明丹參酮ⅡA的口服吸收很不好。 比較灌胃丹參酮ⅡA和灌胃隱丹參酮后丹參酮ⅡA的消除半衰期，經方差分析（P=0.46＞0.05）結果表明兩者無明顯差異。丹參酮ⅡA 隱丹參酮26結果分析與討論1.灌胃丹參酮ⅡA或隱丹參酮單體后丹參酮Ⅱ結果分析與討論2.灌胃隱丹參酮單體或丹參脂溶性提取物后隱丹參酮的藥動學結果比較：cryptotanshinonecompartmentmodelCmaxTmaxt1/2AUC(Tn)ng/mLminminng/ml·minig.cryptotanshinoneOne9.7833.3172.662346.60ig.extractTwo51.4535.00464.928822.31P0.008＜0.050.734＞0.050.082＞0.050.027＜0.05灌胃丹參酮提取物后所測得的隱丹參酮的Cmax和AUC(Tn)分別提高了5.3倍和3.8倍。說明，丹參酮提取物中的其他成份可促進藥效成份隱丹參酮的吸收從而對其藥動學行為產生明顯的影響。大鼠分別灌胃給予隱丹參酮單體和丹參酮提取物后，隱丹參酮的藥－時曲線分別符合一、二房室模型，Tmax無差異。說明提取物中的其他成份對使隱丹參酮在大鼠體內的吸收速度加快，同時使其從中央室向周邊室分布。27結果分析與討論2.灌胃隱丹參酮單體或丹參脂溶性提取物后隱丹tanshinoneⅡAcompartmentmodelCmaxTmaxt1/2βAUC(Tn)ng/mLminminng/ml·minig.cryptotanshinoneTwo3.5825.0331.22560.68ig.tanshinoneⅡATwo3.4019.2293.16499.37ig.extractTwo34.0438.3462.629257.19P0.003＜0.051.23E-6＜0.050.357＞0.050.004＜0.05結果分析與討論3.灌胃丹參酮ⅡA單體或丹參脂溶性提取物后丹參酮ⅡA的藥動學結果比較：灌胃丹參酮提取物后所測得的丹參酮ⅡA的Cmax和AUC(Tn)分別提高了10.0倍和18.5倍。說明，丹參酮提取物中的其他成份可促進藥效成份丹參酮ⅡA的吸收、影響其代謝消除、或存在轉化，從而對其藥動學行為產生明顯的影響。對于大鼠分別灌胃給予丹參酮ⅡA、隱丹參酮單體和丹參酮提取物后，丹參酮ⅡA的藥動學參數比較可以發(fā)現，在丹參酮提取物中的其他組份可協同促進丹參酮ⅡA在大鼠體內的吸收的同時，隱丹參酮也脫氫反應代謝產生丹參酮ⅡA，兩種作用的加合致使丹參酮提取物組丹參酮ⅡA的AUC為丹參酮ⅡA組的18.5倍，Tmax的顯著性差異也說明這一點，與文獻報道從十二指腸給藥情況相一致。28tanshinoneⅡAcompartmentmodelC第一部分結論 丹參提取物比較藥代動力學研究結果表明，中藥材中的其他成分對其“標志成分”或“藥效成分”的體內過程有較大的影響。 拮抗：原兒茶醛； 協同：丹酚酸B、丹參酮ⅡA及隱丹參酮； 促進轉化：隱丹參酮代謝為丹參酮ⅡA。29第一部分結論 丹參提取物比較藥代動第二部分

復方中藥藥代動力學有效成份單體與其在中藥提取物中的體內過程并不一致，復方中藥成分更加復雜，是否也存在相互作用someingredientsintheHuang–Lian–Jie–Du–TanghadpharmacokineticinteractionwithbaicalinandwogonosideComparativepharmacokineticsofbaicalinafteroraladministrationofpurebaicalin,RadixScutellariaeextractandHuang–Lian–Jie–Du–Tangtorats.J.Ethnopharmacol.2007,110,412–418.30第二部分復方中藥藥代動力學有效成份單體與其在中藥提取物中的第二部分

復方丹參制劑比較藥代動力學

丹參和三七配伍后主要活性成分藥代動力學相互作用，探討它們的配伍機制31第二部分

復方丹參制劑比較藥代動力學

丹參和三七配伍后主復方丹參方的藥代動力學研究復方丹參方由丹參、三七和冰片三味藥材組成。是活血化瘀的名方，廣泛用于治療冠心病、心肌梗塞、心絞痛、抗血栓等心血管疾病。來源于丹參的酚酸類成分和二萜醌類成分及來源于三七的皂苷類成分是復方丹參方中的主要藥效物質。32復方丹參方的藥代動力學研究復方丹參方由丹參、三七和冰片三味藥復方丹參方主要活性成分結構三七皂苷R1人參皂苷Rg1人參皂苷Rb1酚酸類成分二萜醌類成分皂苷成分33復方丹參方主要活性成分結構三七皂苷R1人參皂苷Rg1人參皂苷受試灌胃混懸液的制備和含量測定丹參灌胃液： 丹參片30片，CMC-Na制備三七灌胃液： 三七片20片，同法制備丹參-三七配伍灌胃液： 丹參片30片+三七片20片，同法制備含量測定(mg·mL-1)丹參三七丹參-三七丹參素0.21—0.21紫草酸0.44—0.44迷迭香酸0.27—0.27丹酚酸B4.05—4.05丹酚酸A0.16—0.16丹參酮ⅡA0.19—0.19隱丹參酮0.20—0.20三七皂苷R1—0.460.46人參皂苷Rg1

—1.751.75人參皂苷Rb1

—2.022.0234受試灌胃混懸液的制備和含量測定丹參灌胃液：含量測定丹參三七藥代動力學試驗設計三周期自身對照試驗設計

健康比格犬8只，雌雄各半，給藥劑量均為1ml/kg周期1丹參混懸液：相當于丹參素0.21mg·kg-1，丹參酮ⅡA0.19mg·kg-1，隱丹參酮0.20mg·kg-1

周期2三七混懸液：相當于三七皂苷R10.46mg·kg-1，人參皂苷Rg11.75mg·kg-1和人參皂苷Rb12.02mg·kg-1周期3丹參-三七配伍混懸液

灌服前及灌服后0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、5、6、8、12、24、48、72、96和120h分別經前肢靜脈取血約3.5mL，置肝素化離心管中，900g離心10min分取血漿，于-80℃避光保存供血藥濃度測定用。比格犬經過足夠長的清洗期后開始下一周期試驗。35藥代動力學試驗設計三周期自身對照試驗設計35血藥濃度測定結果配伍前后藥動學行為有顯著差異：丹參素、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1配伍后，AUC減少44%，Cmax顯著降低，t1/2縮短，清除速率加快。配伍后，AUC顯著降低，Cmax顯著減小，CLz/F增大配伍后，AUC顯著降低，Cmax顯著減小，Tmax延后，CLz/F未見明顯變化36血藥濃度測定結果配伍前后藥動學行為有顯著差異：配伍后，AU血藥濃度測定結果配伍前后藥動學行為無顯著差異：丹參酮ⅡA、隱丹參酮37血藥濃度測定結果配伍前后藥動學行為無顯著差異：37小結與討論藥動與藥效：配伍對于丹參素和三個皂苷成分的藥代動力學行為有較大影響。但這并不一定意味著中藥配伍后整體藥效的下降。丹參、三七配伍作為經典的藥對，其活血化瘀的療效優(yōu)于單味藥已久經考驗。文獻報道，人參皂苷Rb1對于心肌細胞長時程增強的活性在5nmol時出現最大值；人參皂苷Rg1和Rb1均在濃度為40