非發(fā)酵革蘭氏陰性桿菌-假單胞菌屬（微生物檢驗(yàn)技術(shù)課件）

第二節(jié)不動(dòng)桿菌屬第七章

非發(fā)酵革蘭氏陰性桿菌學(xué)習(xí)目標(biāo)１掌握不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌主要的生物學(xué)性狀２熟悉不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌的致病性３掌握不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌的微生物檢驗(yàn)非發(fā)酵菌的分類——無(wú)動(dòng)力氧化酶陰性不動(dòng)桿菌屬不動(dòng)桿菌為G—球桿菌、兩端鈍圓、常成雙排列。無(wú)芽胞、無(wú)鞭毛、有莢膜。不動(dòng)桿菌屬的分類開始被歸于奈瑟菌科其中6個(gè)基因種有菌名?；蚍N——醋酸鈣不動(dòng)桿菌基因種——鮑曼不動(dòng)桿菌（臨床上分離出來(lái)的絕大多數(shù)為此種）基因種——溶血不動(dòng)桿菌基因種——瓊氏不動(dòng)桿菌基因種——約翰遜不動(dòng)桿菌基因種——洛菲不動(dòng)桿菌其余基因種未命名不動(dòng)桿菌屬的主要生物學(xué)特性——形態(tài)與染色G-桿菌，多為球桿菌，常成對(duì)排列，有時(shí)可形成絲狀或鏈狀，革蘭染色不易脫色，易誤認(rèn)為G+球菌；拉絲試驗(yàn)：容易成假陰性；無(wú)鞭毛，有莢膜，有菌毛，無(wú)芽胞。不動(dòng)桿菌屬的主要生物學(xué)特性——培養(yǎng)特性專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高最適溫度：35℃，鮑曼不動(dòng)桿菌42℃可生長(zhǎng)血平板上菌落圓形凸起，中等大小，光滑、邊緣整齊、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液狀(e.g.鮑曼），不產(chǎn)色素血瓊脂有的種產(chǎn)生β溶血（e.g.溶血不動(dòng)）麥康凱平板上形成粉紅色菌落（例外：溶血不動(dòng)為無(wú)色菌落；洛菲不動(dòng)為黃色菌落）有的菌落有特殊氣味：魚腥味不動(dòng)桿菌屬醋酸鈣不動(dòng)桿菌菌落（MAC）鮑曼不動(dòng)桿菌菌落（MAC）鮑曼不動(dòng)桿菌的主要生物學(xué)特性三陰試驗(yàn)：動(dòng)力-、氧化酶-、硝酸鹽還原試驗(yàn)-觸酶反應(yīng)不定；O/F為氧化型；動(dòng)力、吲哚、甲基紅、VP、H2S反應(yīng)均陰性不產(chǎn)生賴、鳥氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解酶大多數(shù)能利用枸櫞酸鹽（e.g.洛菲不動(dòng)桿菌除外）有的種能產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶（e.g.鮑曼、醋酸鈣不動(dòng)）不動(dòng)桿菌的菌種間的鑒別要點(diǎn)協(xié)和醫(yī)院2017年前十位病原菌的檢出情況細(xì)菌名稱株數(shù)占檢出菌的百分比（%）大腸埃希菌73113.1銅綠假單胞菌5359.5肺炎克雷伯菌4548.1鮑曼不動(dòng)桿菌3356.0金黃色葡萄球菌2203.9凝固酶陰性葡萄球菌1913.4糞腸球菌1893.4嗜麥芽窄食單胞菌1602.9屎腸球菌1392.5陰溝腸桿菌1352.4廣泛分布廣泛分布于自然界和人的皮膚，為條件致病菌。在臨床標(biāo)本中，最常見的是鮑曼不動(dòng)桿菌（僅次于銅綠假單胞菌的非發(fā)酵菌）醫(yī)院內(nèi)感染最常見的部位是呼吸道、消化道、泌尿生殖道和傷口。Contaminatedsurfacesincreasecross-transmissionX

representsmulti-drugsresistantpathogensculturepositivesites長(zhǎng)期存活體外存活時(shí)間可達(dá)329天

(WagenvoortJHT,JoostenEJAJ.JHospInfect2002;52:226-229)在塑料表面可存活11天,在不銹鋼表面可存活12天

(WebsterCetal.InfectControlHospEpidemiol2000;21:246)在干燥的物體表面可存活4個(gè)月以上

(WendtCetal.JClinMicrobiol1997;35:1394-1397)檢驗(yàn)程序2023/7/28標(biāo)本

增菌

分離培養(yǎng)（血平板\MAC）最后鑒定可疑菌落（性狀、色素）初步鑒定

涂片染色鏡檢血標(biāo)本涂片鏡檢氧化酶菌落特征生化反應(yīng)42℃生長(zhǎng)O/F：O枸櫞酸鹽利用＋精氨酸雙水解＋乙酰胺酶＋木糖＋G-球桿菌，成雙排列，氧化酶-，O/F試驗(yàn)為氧化型，動(dòng)力-，硝酸鹽還原試驗(yàn)-不動(dòng)桿菌屬微生物學(xué)檢查1.標(biāo)本采集：血液、尿液、痰液、膿液、腦脊液等2.直接鏡檢：標(biāo)本涂片革蘭染色鏡檢，為革蘭陰性球桿菌，常成雙排列3.分離培養(yǎng)：血平板和MAC4.初步鑒定：革蘭染色陰性球桿菌，成雙排列，氧化酶（－），O/F試驗(yàn)為氧化型，動(dòng)力（－），硝酸鹽還原試驗(yàn)（－）5.符合上述試驗(yàn)結(jié)果即可判定為不動(dòng)桿菌屬的細(xì)菌，再進(jìn)行屬內(nèi)細(xì)菌鑒別不動(dòng)桿菌的菌種間的鑒別要點(diǎn)不動(dòng)桿菌屬主要菌種的鑒別要點(diǎn)

醋酸鈣不動(dòng)桿菌鮑曼不動(dòng)桿菌溶血不動(dòng)桿菌瓊氏不動(dòng)桿菌約翰遜不動(dòng)桿菌洛菲不動(dòng)桿菌葡萄糖氧化＋＋＋／－－－－木糖氧化－＋＋／－－－－乳糖氧化＋＋－＋＋＋精氨酸雙水解酶＋＋＋＋－／＋－鳥氨酸脫羧酶＋＋－－－－苯丙氨酸脫氨酶＋＋－－－－丙二酸鹽利用試驗(yàn)＋＋＋－－／＋－檸檬酸鹽利用試驗(yàn)＋＋＋＋／－＋－明膠液化－－＋－－－37℃生長(zhǎng)＋＋＋＋－＋42℃生長(zhǎng)－＋－－－－不動(dòng)桿菌屬臨床意義致病物質(zhì)：致病機(jī)制尚不完全清楚，未發(fā)現(xiàn)不動(dòng)桿菌能分泌毒素或細(xì)胞溶解素，其致病力主要由莢膜、菌毛、產(chǎn)物酶、脂質(zhì)及載體等組成2.所致疾病：本屬細(xì)菌為條件致病菌，在非發(fā)酵菌中本菌的分離率僅次于銅綠假單胞菌，也是醫(yī)院感染的主要病原菌之一，常引起呼吸道、消化道及泌尿生殖道感染3.藥物敏感性：對(duì)青霉素、氨芐西林和頭孢拉啶耐藥；多數(shù)菌株對(duì)氯霉素耐藥；對(duì)復(fù)方新諾明、哌拉西林/他唑巴坦、多西環(huán)素、和氟喹諾酮類較敏感定植與感染2023/7/28高度耐藥天然耐藥：對(duì)氨芐西林、一代和二代頭孢菌素、氯霉素、一代喹諾酮類藥物耐藥獲得性耐藥：存在多種β-內(nèi)酰胺酶的耐藥機(jī)制文獻(xiàn)報(bào)道有15種氨基糖苷類修飾酶喹諾酮耐藥涉及DNA解旋酶的突變藥敏試驗(yàn)(CLSI-M100推薦方法)我院2013年鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥率（516株）舒巴坦對(duì)不動(dòng)桿菌有內(nèi)源性抗菌活性被抑制不動(dòng)桿菌累計(jì)%舒巴坦的濃度μg/ml對(duì)于MDR-AB：頭孢哌酮/舒巴坦+米諾環(huán)素按照舒巴坦計(jì)算MIC分布實(shí)踐三

銅綠假單胞菌、不動(dòng)桿菌的鑒定（一）細(xì)菌在選擇性培養(yǎng)基和肉湯中的生長(zhǎng)現(xiàn)象菌種普皿血皿MAC肉湯銅綠假單胞菌不動(dòng)桿菌三、結(jié)果與討論（二）革蘭染色鏡檢結(jié)果菌種形態(tài)排列染色性銅綠假單胞菌不動(dòng)桿菌三、結(jié)果與討論（三）細(xì)菌生化鑒定結(jié)果記錄1菌名氧化酶KIAMIU斜面底面產(chǎn)氣H2SMIU銅綠假單胞菌不動(dòng)桿菌備注：A，產(chǎn)酸（黃）；K，產(chǎn)堿（紅）。三、結(jié)果與討論菌名O-F管枸櫞酸鹽麥芽糖甘露醇木糖精氨酸雙水解酶硝還DNA乙酰胺銅綠假單胞菌不動(dòng)桿菌（三）細(xì)菌生化鑒定結(jié)果記錄2三、結(jié)果與討論第二節(jié)

產(chǎn)堿桿菌屬第七章

非發(fā)酵革蘭氏陰性桿菌學(xué)習(xí)目標(biāo)１掌握產(chǎn)堿桿菌屬細(xì)菌和其他非發(fā)酵菌的主要生物學(xué)性狀２熟悉產(chǎn)堿桿菌屬細(xì)菌和其他非發(fā)酵菌的致病性３掌握產(chǎn)堿桿菌屬細(xì)菌和其他非發(fā)酵菌的微生物檢驗(yàn)三、產(chǎn)堿桿菌屬伯杰系統(tǒng)細(xì)菌手冊(cè)中分為2個(gè)種：木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種脫硝亞種糞產(chǎn)堿桿菌：典型菌種生物學(xué)特性G-短桿菌，單個(gè)存在，有時(shí)可成對(duì)或鏈狀排列；周鞕毛，有動(dòng)力，運(yùn)動(dòng)緩慢；無(wú)芽胞，多數(shù)無(wú)莢膜專性需氧，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上即可生長(zhǎng)；血皿上形成灰色、扁平、有水果味的較大菌落MAC和SS平板上，形成不發(fā)酵乳糖的無(wú)色透明菌落最適生長(zhǎng)溫度25－35℃。糞產(chǎn)堿桿菌臨床標(biāo)本中最常見；菌落灰白，扁平，邊緣菲薄、不規(guī)則，擴(kuò)散生長(zhǎng)較大菌落；一些可產(chǎn)生特征性水果香味—青蘋果味（芳香產(chǎn)堿菌）；在BAP上略帶綠色的現(xiàn)象氧化酶+,觸酶+不分解任何糖類；O／F：產(chǎn)堿型利用枸櫞酸鹽部分菌株能還原硝酸鹽常見產(chǎn)堿桿菌的特性鑒別菌種硝酸鹽丙二酸鹽利用木糖葡萄糖糞產(chǎn)堿桿菌-+--木糖氧化亞種++++脫硝亞種++--臨床意義1.致病物質(zhì)：本屬中臨床分離最常見的是糞產(chǎn)堿桿菌，大部分感染是條件致病，主要來(lái)自潮濕環(huán)境，如霧化器、呼吸機(jī)和灌洗液等，血、痰、尿、腦脊液等是常見的發(fā)現(xiàn)部位，是醫(yī)院感染的病原菌之一。其致病物質(zhì)主要是菌體成分如內(nèi)毒素等2.所致疾?。嚎芍碌挚沽Φ拖碌幕颊甙l(fā)生菌血癥，也可引起呼吸道、泌尿道及中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染3.藥物敏感性：藥物敏感試驗(yàn)的藥物選擇與假單胞菌相同。臨床治療可用哌拉西林及替卡西林Thanks非發(fā)酵菌檢驗(yàn)技術(shù)（三

）

其他非發(fā)酵菌鑒定臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)精品資源共享課程假單胞菌科——rRNA-II伯克霍爾德菌屬鼻疽伯克霍爾德菌類鼻疽伯克霍爾德菌洋蔥伯克霍爾德菌唐菖蒲伯克霍爾德菌皮氏伯克霍爾德菌2023/7/28Dr.Johnson_CHENDepartmentofnosocomialinfectioncontrol,FujianUnionHospital假單胞菌科

rRNA-II

伯克霍爾德菌屬伯克霍爾德菌屬生物學(xué)特性洋蔥伯克霍爾德菌G-桿菌氧化利用葡萄糖氧化酶：陽(yáng)性或弱陽(yáng)性多根極鞭毛洋蔥伯克霍爾德菌生長(zhǎng)無(wú)特殊要求,SBA

3-4d黃綠色菌落賴氨酸陽(yáng)性氨基糖甙類、亞胺培南：天然耐藥植物病原菌，蔥頭腐爛和人類的壞疽水源和潮濕表面2023/7/28藥敏試驗(yàn)B.cepaciaisusuallysusceptibletochloramphenicol,cetazidim,piperacillin,andSXT,butresistanttomostotheragents.Susceptibilitytothecarbapenemsisvariable.resistancecandevelopquiterapidly.TheCLSIrecommendedthatifdiskdiffusionmethodofsusceptibilitytesting,thenonlyceftazidime,meropenem,minocyclineandSXTshouldbereported.2023/7/28類鼻疽伯克菌人和動(dòng)物類鼻疽病生長(zhǎng)有特定區(qū)域，存在于赤道南北緯20度之間的土壤和不流動(dòng)的水中，主要泰國(guó)和越南。大多數(shù)感染無(wú)癥狀，只能通過(guò)血清學(xué)診斷生長(zhǎng)無(wú)特殊要求刺激性泥土味，延長(zhǎng)培養(yǎng)呈皺縮菌落。2023/7/28Dr.Johnson_CHENDepartmentofnosocomialinfectioncontrol,FujianUnionHospital2023/7/28Dr.Johnson_CHENDepartmentofnosocomialinfectioncontrol,FujianUnionHospital寡養(yǎng)單胞菌屬(或窄食單胞菌屬)嗜麥芽寡氧單胞菌1961年嗜麥芽假單胞菌1983年嗜麥芽黃單胞菌1993年嗜麥芽寡養(yǎng)（窄食）單胞菌寡養(yǎng)(窄食)單胞菌屬假單胞菌科

rRNA-V

窄食單胞菌屬嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌革蘭陰性桿菌，叢鞭毛專性需氧、營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通平板生長(zhǎng)良好，麥康凱平板可生長(zhǎng)氧化酶－葡萄糖O/F－（緩慢）麥芽糖O/F：＋（快速）賴氨酸脫羧＋明膠液化＋院內(nèi)感染分離率在綠膿、不動(dòng)桿菌之后排第三嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌菌落特點(diǎn)：生長(zhǎng)緩慢，血平板菌落呈淡綠色或淺綠色，“貓眼”狀有氨氣味耐藥特點(diǎn)：碳青霉烯類、氨基糖甙類：天然耐藥CLSI推薦藥敏左氧氟沙星、米諾環(huán)素、復(fù)方新諾明臨床意義常感染嚴(yán)重衰弱和免疫力低下病人在醫(yī)院水龍頭、污水排水孔呼吸機(jī)濕化器均可分離到可引起菌血癥、心內(nèi)膜炎、醫(yī)院獲得性肺炎、尿路感染、皮膚、軟組織靜脈放置插管是引起菌血癥的主要原因，死亡率達(dá)41～69％非發(fā)酵菌的分類第三組：無(wú)動(dòng)力氧化酶陽(yáng)性黃桿菌科黃桿菌屬金色桿菌屬華麗桿菌屬穩(wěn)桿菌屬威克菌屬伯杰菌屬鞘氨醇菌屬分類學(xué)不明寡源菌屬莫拉菌屬鞘氨醇菌屬黃桿菌科的分類金色桿菌屬大比目魚金黃桿菌粘金黃桿菌產(chǎn)吲哚金黃桿菌腦膜膿毒黃桿菌大菱鲆黃桿菌吲哚陽(yáng)性，腦膜膿毒黃桿菌可引起新生兒腦膜炎，成人肺炎和敗血癥2023/7/28Dr.Johnson_CHENDepartmentofnosocomialinfectioncontrol,FujianUnionHospital

類香味菌屬短黃桿菌（短穩(wěn)桿菌）黃桿菌屬水生約翰食果膠嗜冷嗜糖琥珀黃桿菌吲哚都是陰性，在人類臨床標(biāo)本中尚未發(fā)現(xiàn)腦膜膿毒黃桿菌現(xiàn)稱腦膜膿毒伊莉莎白菌G-b，無(wú)動(dòng)力，OX+菌落相當(dāng)大，光滑，中間薄周邊厚，產(chǎn)生很弱的黃色素。對(duì)萬(wàn)古霉素敏感，故在含萬(wàn)古霉素的CAP上不生長(zhǎng)引起新生兒腦膜炎，成人肺炎和敗血癥。對(duì)一般用于治療陰性菌感染的抗生素天然耐藥，但通常對(duì)一般用于治療陽(yáng)性菌感染的抗生素敏感（利福平、紅、克林、SMZ、萬(wàn)古、米諾、喹諾酮）產(chǎn)吲哚金黃桿菌產(chǎn)生水溶性色素，菌落深黃色。雖然經(jīng)?？煞蛛x到，但很少有臨床意義。在重癥患者可引起菌血癥。經(jīng)驗(yàn)治療用SMZ、哌拉西林等。目標(biāo)治療應(yīng)根據(jù)MIC結(jié)果（紙片法與MIC有時(shí)不一致）。2023/7/28莫拉菌屬腔隙莫拉菌卡他莫拉菌非液化莫拉菌奧斯陸莫拉菌亞特蘭大莫拉菌狗莫拉菌林肯莫拉菌牛莫拉菌山羊莫拉菌莫拉菌屬生物學(xué)特性G-球桿菌，不易脫色，易認(rèn)為G+。多數(shù)成雙或短鏈狀排列，幼齡多為細(xì)桿狀，老齡多為球形。(青霉素敏感試驗(yàn))營(yíng)養(yǎng)要求高,BAP生長(zhǎng)良好，菌落光滑或粗糙,偶向瓊脂下凹陷。OX+，觸酶+，無(wú)動(dòng)力，不分解任何糖類，吲哚－。莫拉菌屬與相似菌屬的鑒別莫拉菌屬奈瑟菌屬卡他莫拉菌不動(dòng)桿菌屬球狀—++—球桿狀+——+氧化酶+++—OF———VDNA酶——+—亞硝酸鹽—+/—V—臨床意義臨床最常見為非液化莫拉菌；不必將莫拉菌鑒定到種，因?yàn)楦鞣N臨床意義相似；主要作為人呼吸道的正常菌群之一，罕見作為感染的病原菌（局部—全身）；對(duì)青霉素敏感（NFB中唯一）2023/7/28非發(fā)酵菌總結(jié)非發(fā)酵菌一些常見特征一、色素三、氣味黃色黃桿菌甜糞產(chǎn)堿桿菌少動(dòng)鞘氨醇單胞菌類香味桿菌淺黃假單胞菌銅綠假單胞菌（葡萄味）棲稻假單胞菌爆米花EO-4斯氏假單胞菌EF-4a,EF-4b粉紅甲基桿菌四、不運(yùn)動(dòng)性玫瑰單胞菌不動(dòng)桿菌紫色（MacConkey）不動(dòng)桿菌莫拉菌藍(lán)綠色銅綠假單胞菌黃桿菌藍(lán)紫色紫色桿菌少動(dòng)鞘氨醇單胞菌淡紫至淡紫綠（BAP）嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌寡源桿菌褐色（有時(shí)）斯氏假單胞菌五、氧化酶陰性腐敗希瓦菌不動(dòng)桿菌二、皺褶菌落嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌斯氏假單胞菌棲稻假單胞菌類鼻疽伯克霍爾德菌洋蔥伯克霍爾德菌（+/-）六、H2S陽(yáng)性腐敗希瓦菌海藻希瓦菌2023/7/28非發(fā)酵菌的概念非發(fā)酵菌(Nonfermenters)：是指一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無(wú)芽胞的革蘭陰性桿菌，多為條件致病菌。種類繁多，分布廣泛分類不明，鑒定復(fù)雜耐藥譜廣，臨床治療困難非發(fā)酵菌主要鑒別試驗(yàn)OF：大多為氧化型，少數(shù)產(chǎn)堿或不利用氧化酶：大多陽(yáng)性，少數(shù)陰性動(dòng)力：多數(shù)菌屬有動(dòng)力，少數(shù)無(wú)動(dòng)力麥康凱上生長(zhǎng)：可分群革蘭陰性菌初步分群革蘭陰性桿菌O-F試驗(yàn)非發(fā)酵菌氧化酶試驗(yàn)?zāi)c桿菌科弧菌科F+-O/-臨床常見非發(fā)酵菌的分類

科名

屬名假單胞菌科假單胞菌屬寡氧（窄食）單胞菌屬伯克霍爾德菌屬甲基球菌科甲基桿菌屬產(chǎn)堿桿菌科產(chǎn)堿桿菌屬鮑特菌屬根瘤菌科土壤桿菌屬黃桿菌科黃桿菌屬金色桿菌屬穩(wěn)桿菌屬威克菌屬伯杰菌屬無(wú)色桿菌屬莫拉菌科莫拉菌屬不動(dòng)桿菌屬分類不明玫瑰單胞菌屬人蒼白桿菌鞘氨醇菌屬與鑒定方法相關(guān)的分組第一組有動(dòng)力,極鞭毛:假單胞菌科rRNA群I~V第二組有動(dòng)力,周鞭毛:產(chǎn)堿桿菌科產(chǎn)堿桿菌屬第三組無(wú)動(dòng)力,OXI(+)：黃桿菌科黃桿菌華麗桿菌屬穩(wěn)桿菌屬第四組無(wú)動(dòng)力,OXI（-）：不動(dòng)桿菌屬非發(fā)酵菌的生物學(xué)特性O(shè)F：大多為氧化型，少數(shù)產(chǎn)堿或不利用氧化酶：大多陽(yáng)性，少數(shù)陰性動(dòng)力：多數(shù)菌屬有動(dòng)力，少數(shù)無(wú)動(dòng)力2023/7/28形態(tài)：G-多為桿菌、少數(shù)為球桿菌鞭毛：極生單/從、周生、無(wú)鞭毛非發(fā)酵菌的鑒定——簡(jiǎn)便法臨床標(biāo)本中最常見：銅綠假單胞菌鮑曼不動(dòng)桿菌嗜麥芽窄食單胞菌選擇少數(shù)關(guān)鍵性試驗(yàn)便可容易鑒定快速為臨床醫(yī)生提供信息2023/7/28Dr.Johnson_CHENDepartmentofnosocomialinfectioncontrol,FujianUnionHospital非發(fā)酵菌的鑒定——分組法非銅綠、鮑曼不動(dòng)、嗜麥芽必須增加其他試驗(yàn)進(jìn)行種的鑒定根據(jù)動(dòng)力和氧化酶將各種臨床上重要的非發(fā)酵菌分為四組第一組有動(dòng)力,極鞭毛:假單胞菌科rRNA群I~V第二組有動(dòng)力,周鞭毛:產(chǎn)堿桿菌科產(chǎn)堿桿菌屬第三組無(wú)動(dòng)力,OXI(+)：黃桿菌科黃桿菌華麗桿菌屬穩(wěn)桿菌屬第四組無(wú)動(dòng)力,OXI（-）：不動(dòng)桿菌屬2023/7/28Dr.Johnson_CHENDepartmentofnosocomialinfectioncontrol,FujianUnionHospital常見非發(fā)酵菌的鑒定索引

非發(fā)酵菌嗜麥芽窄食單胞菌葡萄糖產(chǎn)酸無(wú)色桿菌屬土壤桿菌屬假單胞菌屬動(dòng)力+OXOX－不動(dòng)桿菌屬+葡萄糖產(chǎn)酸黃色素摩拉氏菌屬黃桿菌屬－－－++端鞭毛－+－++產(chǎn)堿桿菌屬尿素－+假單胞菌鑒定程序42℃生長(zhǎng)明膠液化鞭毛++極單鞭毛···銅綠假單胞菌-+極多鞭毛···熒光假單胞菌--極多鞭毛···惡臭假單胞菌OF試驗(yàn)：O氧化酶：+精氨酸水解：+葡萄糖酸氧化：+氮?dú)猓?醫(yī)院環(huán)境及用品、臨床標(biāo)本分離培養(yǎng)基涂片檢查肉湯培養(yǎng)基血瓊脂平板SS、麥康凱瓊脂平板挑選可疑菌落（37℃培養(yǎng)18－24h觀察有無(wú)色素產(chǎn)生，色素鑒別接種金氏A、B培養(yǎng)基）無(wú)色素菌株-42℃+綠膿素+綠膿菌熒光素銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌檢驗(yàn)程序1.肉浸湯2.胰化酪蛋白大豆肉湯37℃培養(yǎng)18－24h挑選菌落鑒定分型血清學(xué)噬菌體綠膿素初步鑒定菌落特征、色素、綠膿素：+涂片、革蘭染色、氧化酶：+最后鑒定生化反應(yīng)腦脊液、胸（腹）水、膿液、分泌物、痰、尿液、十二指腸引流液血液、環(huán)境用品分離培養(yǎng)：直接涂片革蘭染色糞便血瓊脂平板SS、麥康凱分離培養(yǎng)：37℃如生長(zhǎng)不動(dòng)桿菌屬檢驗(yàn)程序膿汁、分泌物、尿液腦脊液、血液直接涂片革蘭染色分離培養(yǎng)血液瓊脂平板麥康凱瓊脂平板增菌培養(yǎng)挑選可疑菌落最后鑒定生化反應(yīng)

初步鑒定KIA：底層、斜面不變氧化酶硝酸鹽還原動(dòng)力35℃－37℃18h-24h鑒定非發(fā)酵革蘭陰性桿菌的基本步驟初始菌落識(shí)別:在中國(guó)蘭或麥康開培養(yǎng)基上呈不分解乳糖的菌落氧化酶革蘭染色色素確認(rèn)非發(fā)酵細(xì)菌O/F；鞭毛染色選擇鑒定系統(tǒng)API20NEATBVITEK－2Compact等2023/7/28Dr.Johnson_CHENDepartmentofnosocomialinfectioncontrol,FujianUnionHospital非發(fā)酵菌檢驗(yàn)報(bào)告解讀[考慮患者狀況和標(biāo)本來(lái)源]直接作為病原菌銅綠、洋蔥、腦敗作為條件致病菌無(wú)菌部位：純培養(yǎng)——鑒定+AST無(wú)臨床表現(xiàn)或無(wú)肺炎癥狀的氣管分泌物分離到NFB，即使優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)，也沒(méi)有必要進(jìn)一步鑒定，因多種抗生素治療后常出現(xiàn)NFB定殖（天然較耐藥）。標(biāo)本涂片鏡檢可為鑒定提供線索。ReferencesManualofClinicalMicrobiology(8thEdition)ClinicalMicrobiologyHandbook(2ndEdition)蔡文城，蔡岳廷.實(shí)用臨床微生物診斷學(xué)(第十版)張秀珍，朱德妹.臨床微生物檢驗(yàn)問(wèn)與答CLSIM100-S21CLSIM35-A22023/7/28第七章

非發(fā)酵革蘭氏陰性桿菌第一節(jié)假單胞菌屬案例導(dǎo)學(xué)病人，男，70歲，4d前睡覺時(shí)因橡膠熱水袋老化破裂導(dǎo)致右側(cè)胸腹部被熱水燙傷，在當(dāng)?shù)匦l(wèi)生院抗感染治療，3d后體溫升高，創(chuàng)面感染，轉(zhuǎn)院治療。體格檢查：體溫39.8℃，急性發(fā)熱面容，精神差，右側(cè)胸腹部可見約18cmX30cm左右不規(guī)則燙傷創(chuàng)面，表面有黃綠色分泌物，其他未見異常。取創(chuàng)面分泌液涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性桿菌。問(wèn)題與思考：1.該病人可能感染了哪種病原微生物？2.如何對(duì)該微生物進(jìn)行檢驗(yàn)？3.鑒定該微生物的依據(jù)有哪些？非發(fā)酵菌(Nonfermenters)非發(fā)酵菌(Nonfermenters)：又稱不發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌（Nonfermentingbacilli，NFB）

是指一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無(wú)芽胞的G-桿菌，多為條件致病菌。主要菌種1.假單胞菌屬2.不動(dòng)桿菌屬3.產(chǎn)堿桿菌屬4.無(wú)色桿菌屬5.莫拉菌屬6.金氏桿菌屬7.黃桿菌屬8.艾肯菌屬9.土壤桿菌屬10.黃單胞菌屬11.叢毛單胞菌屬等非發(fā)酵菌的主要特點(diǎn)種類繁多，分布廣泛；分類不明，鑒定復(fù)雜；條件致病菌，引起醫(yī)院感染（主要是銅綠假單胞菌、不動(dòng)桿菌）；耐藥譜廣，臨床治療困難。氧化－發(fā)酵試驗(yàn)(O-F試驗(yàn))葡萄糖利用需氧氧化型不需氧發(fā)酵型不分解產(chǎn)堿型原理：細(xì)菌分解葡萄糖的過(guò)程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型；可以進(jìn)行無(wú)氧降解的，稱為發(fā)酵型；不分解葡萄糖的稱為產(chǎn)堿型。革蘭陰性菌初步分群革蘭陰性桿菌O-F試驗(yàn)非發(fā)酵菌氧化酶試驗(yàn)?zāi)c桿菌科弧菌科F+-O/-鑒定試驗(yàn)?zāi)c桿菌科非發(fā)酵菌弧菌科氧化酶－＋＋葡萄糖氧化/發(fā)酵（O/F）FO／－F鞭毛周鞭毛或無(wú)單、叢、周或無(wú)單腸桿菌科、弧菌科與非發(fā)酵菌的主要區(qū)別非發(fā)酵菌主要鑒別試驗(yàn)OF：大多為氧化型，少數(shù)產(chǎn)堿或不利用氧化酶：大多陽(yáng)性（如假單胞菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬），少數(shù)陰性（如不動(dòng)桿菌屬）動(dòng)力：多數(shù)菌屬有動(dòng)力（如假單胞菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬），少數(shù)無(wú)動(dòng)力（如不動(dòng)桿菌屬、莫拉菌屬）麥康凱上生長(zhǎng)（莫拉菌屬除外）常見不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的初步分群鑒定注：+：90%以上陽(yáng)性；-10%以下的陽(yáng)性；+/-：約70%為陽(yáng)性；O：為氧化。-++-+/-+/-+/-動(dòng)力---O/-OOO/-O/F試驗(yàn)+/-++-+/-++氧化酶莫拉菌屬叢毛菌屬產(chǎn)堿桿菌屬不動(dòng)桿菌屬黃桿菌屬無(wú)色桿菌屬假單胞菌屬試驗(yàn)銅綠假單胞菌熒光假單胞菌惡臭假單胞菌產(chǎn)堿假單胞菌施氏假單胞菌門多薩假單胞菌類產(chǎn)堿假單胞菌一、假單胞菌屬是假單胞菌科的代表菌屬，包括200多個(gè)菌種與人類關(guān)系密切的有銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、產(chǎn)堿假單胞菌等，是醫(yī)院感染的主要病原菌假單胞菌屬生物學(xué)特性G-桿菌，無(wú)芽胞、有莢膜，極單或叢鞭毛（運(yùn)動(dòng)活潑）；專性需氧，最適生長(zhǎng)溫度35℃，少數(shù)菌種在4℃（熒光假單胞菌）或42℃（銅綠假單胞菌、產(chǎn)堿假單胞菌）生長(zhǎng)；營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上均可生長(zhǎng)；產(chǎn)生水溶性色素，如綠膿素、熒光素、紅膿素、青膿素Mac生長(zhǎng)：＋氧化酶：＋；觸酶：＋O-F試驗(yàn)：O各種假單胞菌產(chǎn)生的色素細(xì)菌色素顏色銅綠假單胞菌綠膿素、青膿素、紅膿素、熒光素藍(lán)、黑、紅、黃熒光假單胞菌熒光素黃綠惡臭假單胞菌熒光素黃綠施氏假單胞菌未定名色素黃色（一）銅綠假單胞菌（P.aeruginosa，PAE）假單胞菌屬的代表菌種廣泛分布于自然界和人體醫(yī)院感染的主要病原菌之一銅綠假單胞菌的生物學(xué)特性G-桿菌，球桿狀或長(zhǎng)絲狀，單鞭毛，無(wú)芽胞、有莢膜革蘭染色鞭毛電鏡圖片銅綠假單胞菌的生物學(xué)特性嚴(yán)格需氧，氧化利用葡萄糖、MAC生長(zhǎng)最適生長(zhǎng)溫度35℃，4℃不生長(zhǎng)，42℃可生長(zhǎng)。在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上80～90％產(chǎn)生特征性的藍(lán)綠色水溶性綠膿素和黃綠色青膿素血平板上形成大而扁平，濕潤(rùn)，邊緣不齊，有金屬光澤，有生姜?dú)馕兜幕揖G色菌落，并形成透明溶血環(huán)。銅綠假單胞菌（PA）的菌落形態(tài)——在血平板和MAC上典型型：灰綠色，大小不一，扁平濕潤(rùn)，邊緣不齊，表面可見金屬光澤。生姜?dú)馕?。大腸菌樣型：圓形凸起，灰白色半透明。銅綠假單胞菌（PA）的菌落形態(tài)——在血平板和MAC上粗糙型：菌落中央凸起，邊緣扁平不整齊，表面粗糙。銅綠假單胞菌（PA）的菌落形態(tài)——在血平板和MAC上侏儒型：細(xì)小無(wú)光澤，半透明菌落銅綠假單胞菌（PA）的菌落形態(tài)——在血平板和MAC上黏液型：光滑凸起呈粘液狀銅綠假單胞菌（PA）的菌落形態(tài)——在血平板和MAC上生化反應(yīng)氧化酶＋；觸酶＋O/F：O氧化分解葡萄糖、木糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣枸櫞酸鹽利用＋硝還＋（還原硝酸鹽為亞硝酸鹽并產(chǎn)生氮?dú)猓┚彼犭p水解酶＋乙酰胺酶＋明膠液化＋吲哚-抗原構(gòu)造與分型菌體（O）抗原鞭毛（H）抗原外膜蛋白：具有屬的特異性脂多糖：具有型特異性銅綠假單胞菌抵抗力抵抗力強(qiáng)對(duì)干燥、紫外線有抵抗力對(duì)熱抵抗力不強(qiáng)，56℃30min可被殺死對(duì)某些消毒劑敏感，1%石炭酸處理5min即被殺死臨床分離菌株對(duì)多種抗生素不敏感銅綠假單胞菌致病物質(zhì)1.粘附素-菌毛2.多糖莢膜樣物質(zhì)（biofilm）3.內(nèi)毒素4.外毒素5.綠膿毒素-催化過(guò)氧化氫和超氧化物6.彈性蛋白酶7.磷脂酶C臨床意義社區(qū)獲得性感染：皮膚淺表性感染（毛囊炎）耳道淺表性感染（“游泳者耳”）眼部感染—角膜損傷、穿孔—失明兒童跟骨骨髓炎院內(nèi)感染：呼吸道感染泌尿道感染傷口感染（燒傷）菌血癥、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、腹膜炎囊性纖維變性（CF）藥物敏感性：對(duì)抗假單胞菌青霉素類、氨基糖苷類、環(huán)丙沙星、頭孢吡肟、頭孢他定、美羅培能、亞胺培南敏感。醫(yī)院獲得性銅綠假單胞菌較社區(qū)分離株有較高的耐藥性，常顯示多重耐藥防治原則1.銅綠假單胞菌可由各種途徑傳播，但主要是通過(guò)污染醫(yī)療器械、用具及帶菌醫(yī)護(hù)人員引起醫(yī)源性感染2.結(jié)合臨床感染癥狀，如果無(wú)臨床癥狀則為正常菌群3.臨床治療嚴(yán)格遵循藥敏試驗(yàn)結(jié)果用藥微生物學(xué)檢驗(yàn)程序標(biāo)本

增菌

分離培養(yǎng)（血平板\EMB\MAC）最后鑒定可疑菌落（性狀、色素）初步鑒定

涂片染色鏡檢血標(biāo)本涂片鏡檢氧化酶菌落特征綠膿素氣味色素鑒定生化反應(yīng)42℃生長(zhǎng)分型O/F：O枸櫞酸鹽利用＋精氨酸雙水解＋乙酰胺酶＋明膠液化＋標(biāo)本采集：血液、痰液、腦脊液、胸（腹）水、尿液、膿液、分泌液、糞便等；醫(yī)院環(huán)境監(jiān)控，可采集空氣、水、物品表面等銅綠假單胞菌鑒定依據(jù)1.革蘭陰性桿菌，動(dòng)力陽(yáng)性，單鞭毛2.菌落特征、色素、生姜?dú)馕?.4℃不生長(zhǎng)，42℃生長(zhǎng)4.氧化酶（+）、氧化分解葡萄糖5.乙酰胺水解（+）、還原硝酸鹽生成氮?dú)?.精氨酸雙水解（+）PAE快速鑒定要點(diǎn)（CLSIM35-A2）推斷鑒定：氧化酶陽(yáng)性，吲哚陰性明確鑒定：葡萄水果味形態(tài)特征：金屬光澤，有色素，粗糙，大多菌落在BAP上有明顯的β溶血。黏液型菌株：革蘭染色時(shí)在G-b周圍常常可見橙色區(qū)域。銅綠假單胞菌與其他假單胞菌的鑒別

銅綠假單胞菌熒光假單胞菌惡臭假單胞菌韋龍氏假單

胞菌產(chǎn)堿假單胞菌氧化酶999710010096溴化-16-烷基-3-甲胺生長(zhǎng)948987ND156.5%氯化鈉生長(zhǎng)6543100ND4142℃生長(zhǎng)1000000硝酸鹽還原9819010054青膿素6596931000精氨酸雙水解酶1009710010012尿素水解575275250明膠水解821000130葡萄糖產(chǎn)酸971001001000枸櫞酸鹽9593100ND65注：數(shù)字是陽(yáng)性菌株%；ND：無(wú)數(shù)據(jù)銅綠假單胞菌：小結(jié)（1－2－3－4－5）1根鞭毛極單鞭毛2種溫度35℃；42℃3天耐