體內(nèi)藥物分析常用生物樣品處理方法和方法學(xué)驗(yàn)證-課件

體內(nèi)藥物分析的樣品處理和方法學(xué)驗(yàn)證1ppt課件體內(nèi)藥物分析的樣品處理和方法學(xué)驗(yàn)證1ppt課件1.為什么要對生物樣品進(jìn)行處理？2.有哪些生物樣品？3.有哪些樣品處理方法？各自的特點(diǎn)。4.如何對分析方法進(jìn)行驗(yàn)證？5.有哪些參考標(biāo)準(zhǔn)？2ppt課件1.為什么要對生物樣品進(jìn)行處理？2ppt課件生物樣品進(jìn)行前處理的目的在于：1．藥物進(jìn)入體內(nèi)后，經(jīng)吸收、分布、代謝，然后排出體外。在體液、組織和排泄物中除了游離型（原型）藥物之外，還有藥物的代謝物、藥物與蛋白質(zhì)形成的結(jié)合物、以及藥物或其代謝物與內(nèi)源性物質(zhì)，如葡萄糖醛酸、硫酸形成的葡萄糖醛酸甙、硫酸酯綴合物等多種形式存在，需要分離后測定藥物及代謝物。一、處理的目的3ppt課件生物樣品進(jìn)行前處理的目的在于：一、處理的目的3ppt課件2．生物樣品的介質(zhì)組成比較復(fù)雜。如在血清中既含有高分子的蛋白質(zhì)和低分子的糖、脂肪、尿素等有機(jī)化合物，也含有Na＋、K＋、Cl-等無機(jī)化合物。這些成分會嚴(yán)重影響測定的準(zhǔn)確性和靈敏度，同時(shí)會污染儀器。因此，為了保護(hù)儀器，提高測定的靈敏度，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，必須對樣品進(jìn)行前處理。4ppt課件2．生物樣品的介質(zhì)組成比較復(fù)雜。如在血清中既含有高分子的蛋白60%以上精力和花費(fèi)用在樣品前處理上5ppt課件60%以上精力和花費(fèi)用在樣品前處理上5ppt課件

生物樣品包括各種體液和組織，但實(shí)際上最常用的是比較容易得到的血液（全血、血漿、血清）、尿液、糞便、唾液。在一些特定的情況下選用乳汁、腦脊液等。二、生物樣品的種類6ppt課件生物樣品包括各種體液和組織，但實(shí)際上最常用的是比較容全血不易保存，且血細(xì)胞中含有更多的干擾物質(zhì)，影響測定，故很少采用全血測定藥物濃度。僅適用于血漿藥物濃度太低或者血漿藥物濃度波動大，且難以控制的藥物如：環(huán)孢霉素A。1全血7ppt課件全血不易保存，且血細(xì)胞中含有更多的干擾物質(zhì)，影響測定，故很少測定血中藥物濃度通常是指測定血漿或血清中的藥物濃度，而不是指含有血細(xì)胞的全血中的藥物濃度。將采取的血液置含有抗凝劑（如：肝素、EDTA）的試管中，混合后，3000至4000r/min離心，分離血細(xì)胞，上清液即為血漿。

2血漿8ppt課件測定血中藥物濃度通常是指測定血漿或血清中的藥物濃度，而不是指血漿中含有的物質(zhì)種類和比例9ppt課件血漿中含有的物質(zhì)種類和比例9ppt課件血清是在采血后不加任何抗凝劑，于室溫下靜置15-30min，待其自然凝結(jié)后，離心，分離出上清液。血清顏色較血漿更淺，成分較血漿少了大部分的纖維蛋白，更易進(jìn)行處理，且血漿及血清中的藥物濃度測定值通常是相同的。3血清10ppt課件血清是在采血后不加任何抗凝劑，于室溫下靜置15-30

一般認(rèn)為，當(dāng)藥物在體內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)，血漿中藥物濃度與藥物在作用點(diǎn)的濃度緊密相關(guān)，即血漿中的藥物濃度反映了藥物在體內(nèi)（靶器官）的狀況，因而血漿濃度可作為作用部位藥物濃度的可靠指標(biāo)。血漿和血清可以穩(wěn)定的冰凍保存，一般儲存在-20℃的條件，長期保存時(shí)可以保存在-80℃的條件下，是生物樣品檢測中最常用的樣本。11ppt課件一般認(rèn)為，當(dāng)藥物在體內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)，血漿中藥物濃度尿液主要成分是水、尿素及無機(jī)鹽類。尿樣采集后，為了保存，常會加入防腐劑。體內(nèi)藥物清除主要是通過尿液排出，藥物可以原型或代謝物及其綴合物等形式排出。尿液中藥物濃度較高，但尿液濃度受尿量的影響，通常變化較大，應(yīng)測定一定時(shí)間內(nèi)排入尿中藥物的總量。4尿液12ppt課件尿液主要成分是水、尿素及無機(jī)鹽類。尿樣采集后，為了保存，常會唾液中所含成分比較簡單，且容易獲得，但是只有少數(shù)藥物的唾液濃度和血漿游離藥物濃度具有相關(guān)性，實(shí)際使用不多，當(dāng)藥物血漿結(jié)合率高的時(shí)候，唾液中藥物的濃度極低，很難檢測。5唾液13ppt課件唾液中所含成分比較簡單，且容易獲得，但是只有少數(shù)藥物的唾液濃采樣后除立即分析外，為防止藥物發(fā)生變化，應(yīng)：短期保存，可4℃冷藏；長期保存，可-20℃冷凍，不要反復(fù)凍融，必要時(shí)可以加入酶抑制劑和抗氧化劑。生物樣品的保存：14ppt課件采樣后除立即分析外，為防止藥物發(fā)生變化，應(yīng)：短期保存，可4主要應(yīng)考慮生物樣品的種類，被測藥物的性質(zhì)和測定方法三個方面的問題。三、常用的處理方法1.沉淀蛋白PPT2.液液萃取LLE3.固相萃取SPE15ppt課件主要應(yīng)考慮生物樣品的種類，被測藥物的性質(zhì)和測定方法三個方面的1.沉淀蛋白①有機(jī)溶劑沉淀法加入水溶性的有機(jī)溶劑，可使蛋白質(zhì)的分子內(nèi)及分子間的氫鍵發(fā)生變化而使蛋白質(zhì)凝聚。常用的有機(jī)溶劑有：乙睛、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氫呋喃等。

血漿或血清與有機(jī)溶劑的體積比為1:3時(shí)，就可以將90%以上的蛋白質(zhì)除去，采用低溫高速速離心機(jī)16000r/min離心10min便可將析出的蛋白質(zhì)完全沉淀。16ppt課件1.沉淀蛋白①有機(jī)溶劑沉淀法16ppt課件實(shí)際應(yīng)用中，多是取50uL的血漿，加入500uL的有機(jī)溶劑，渦旋離心后，取上清進(jìn)樣；若沉淀后，信號相應(yīng)不好，可嘗試更換有機(jī)溶劑或者在沉淀時(shí)，加入酸或堿，調(diào)節(jié)pH值，可能會對結(jié)果影響很大；常用的酸堿有：鹽酸，甲酸，乙酸，氨水等。17ppt課件實(shí)際應(yīng)用中，多是取50uL的血漿，加入500uL的有機(jī)溶劑，優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，為方法開發(fā)中最先考慮使用的。缺點(diǎn)：只使用于樣品中濃度較高的藥物測定；且處理后，樣品中仍然會存在很多干擾物質(zhì)，對結(jié)果產(chǎn)生干擾；殘余的雜質(zhì)會堵塞色譜柱，污染儀器。18ppt課件優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，為方法開發(fā)中最先考慮使用的。18ppt課件中性鹽能將與蛋白質(zhì)水合的水置換出來，從而使蛋白質(zhì)脫水而沉淀。常用的中性鹽：飽和硫酸胺、硫酸鈉、鎂鹽、磷酸鹽及枸櫞酸鹽等。鹽析的方法與有機(jī)溶劑提取法常并用，藥物的回收率較高。②加入中性鹽19ppt課件中性鹽能將與蛋白質(zhì)水合的水置換出來，從而使蛋白質(zhì)脫水20③加入強(qiáng)酸當(dāng)pH低于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)以陽離子形式存在，加入強(qiáng)酸，可與蛋白質(zhì)陽離子形成不溶性鹽而沉淀。常用的強(qiáng)酸有：10%三氯醋酸等。血清與強(qiáng)酸的比例為1:0.6混合，高速離心,就可除去蛋白質(zhì)。在酸性下分解的藥物不宜用本法除蛋白。20ppt課件20③加入強(qiáng)酸當(dāng)pH低于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)以陽當(dāng)pH高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，金屬陽離子與蛋白質(zhì)分子中帶陰電荷的羧基形成不溶性鹽而沉淀。常用的沉淀劑有：CuS04-Na2W04,ZnS04-NaOH等。含藥物血清與沉淀劑的比例為1:2混合，高速離心、分離后得上清液。④加入鋅鹽或銅鹽沉淀劑21ppt課件當(dāng)pH高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，金屬陽離子與蛋白質(zhì)分子中在測定一些酸不穩(wěn)定及蛋白結(jié)合牢的藥物時(shí)，常需用酶解法。在測定尿中的藥物濃度時(shí)，由于尿中藥物主要以綴合物的形式排除，較原型藥物具有較大的極性，不易被有機(jī)溶劑提取，常用酶水解的方法。④酶解法22ppt課件在測定一些酸不穩(wěn)定及蛋白結(jié)合牢的藥物時(shí)，常需用酶解法。④酶解超速離心法平衡透析法最主要的應(yīng)用在測定血漿中游離的藥物濃度和藥物的血漿蛋白結(jié)合率。其他的一些去除蛋白質(zhì)的方法：23ppt課件超速離心法其他的一些去除蛋白質(zhì)的方法：23ppt課件藥物在體內(nèi)吸收，需經(jīng)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，所以多數(shù)藥物具有一定的脂溶性，而生物樣品中大多數(shù)內(nèi)源性雜質(zhì)是強(qiáng)極性的水溶性物質(zhì)，所以可以根據(jù)藥物分子與基質(zhì)之間極性的差異，使用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑提取藥物，有機(jī)溶劑提取可一次除去大部分雜質(zhì)。2.液液萃取法LLE24ppt課件藥物在體內(nèi)吸收，需經(jīng)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，所以多數(shù)藥物具有一定的有機(jī)溶劑應(yīng)選擇穩(wěn)定，易揮發(fā)，低毒性，不與水相混溶的溶劑。常用的有機(jī)溶劑有：乙醚、乙酸乙酯、正己烷、叔丁基甲醚和氯仿等。應(yīng)用本法時(shí)需要考慮所選有機(jī)溶劑的特性、藥物的特點(diǎn)、有機(jī)溶劑相和水相的體積比及水相的pH值等。酸性藥物的解離：AH+H2OA-+H+堿性藥物的解離：B+H2OB++OH-藥物的解離常數(shù)pKa為藥物解離50%時(shí)溶液的pH值。25ppt課件有機(jī)溶劑應(yīng)選擇穩(wěn)定，易揮發(fā)，低毒性，不與水相混溶的溶劑。常用藥物的提取程度主要取決于水相的pH值。對于堿性藥物，最佳pH值要高于pKa1-2個單位；對于酸性藥物來說，則要低于pKa值1-2個單位；這樣就可使90%的藥物以非電離的形式存在從而更易溶于有機(jī)溶劑中。常用來調(diào)節(jié)pH值的物質(zhì)有：甲酸、乙酸、鹽酸或氨水、氫氧化鈉等。水相的PH值--影響液液萃取最關(guān)鍵的因素26ppt課件26ppt課件具體的提取模式有兩種，直接提取和反提取法。優(yōu)點(diǎn)：樣品經(jīng)過提取后，可除去大部分雜質(zhì)，比較“干凈”；對有機(jī)溶劑蒸發(fā)后復(fù)溶，可以對樣品進(jìn)行濃縮；大多數(shù)藥物具有脂溶性，應(yīng)用范圍廣。缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)費(fèi)力，操作繁瑣；且對血漿進(jìn)行提取時(shí)，血漿中的脂質(zhì)會一起被提取出，當(dāng)使用質(zhì)譜檢測器時(shí)，會在離子源處產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)，嚴(yán)重干擾質(zhì)譜檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性！27ppt課件具體的提取模式有兩種，直接提取和反提取法。27ppt課件方法摸索中，一般是使用以上溶劑，平行操作，同時(shí)提取，附加空白對照，比對結(jié)果，判斷哪種有機(jī)溶劑的提取效果最好；若均不理想，可以再混合使用以上溶劑，調(diào)整比例1:1,1:2,1:3的使用；在摸索合適的提取溶劑同時(shí)，可根據(jù)藥物的酸堿性嘗試著添加些酸、堿或者離子對試劑，提高回收率；提取過程中，一定要嚴(yán)控pH值，對于兩性藥物則需要使用緩沖溶液保證提取回收率的穩(wěn)定可重現(xiàn)。28ppt課件方法摸索中，一般是使用以上溶劑，平行操作，同時(shí)提取，附加空白舉例：雌二醇的檢測取血漿樣品100uL，+同位素內(nèi)標(biāo)20uL，+甲酸50uL，+正己烷1mL+叔丁基甲醚3mL，渦旋震蕩10min，3000r/min離心10min，-80℃冷凍10min，倒出上層有機(jī)層，40℃水浴氮?dú)獯蹈桑?150uL丙酮溶解，+50uL丹磺酰氯丙酮溶液，40℃水浴孵育20min，+磷酸鹽緩沖液2mL+叔丁基甲醚4mL，渦旋震蕩10min，3000r/min離心10min，-80℃冷凍10min，倒出上層有機(jī)層，40℃水浴氮?dú)獯蹈桑鲃酉鄰?fù)溶。29ppt課件舉例：雌二醇的檢測29ppt課件固相萃取(SolidPhaseExtraction，簡稱SPE)是從八十年代中期開始發(fā)展起來的一項(xiàng)樣品前處理技術(shù)。由液固萃取和液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來。主要通過固相填料對樣品組分的選擇性吸咐及解吸過程，實(shí)現(xiàn)對樣品的分離，純化和富集。主要目的在于降低樣品基質(zhì)干擾，提高檢測靈敏度。3.固相萃取SPE30ppt課件固相萃取(SolidPhaseExtractio固相萃取的基本原理和方法：SPE技術(shù)基于液-固相色譜理論，采用選擇性吸附、選擇性洗脫的方式對樣品進(jìn)行富集、分離、純化，是一種包括液相和固相的物理萃取過程；也可以將其近似地看作一種簡單的色譜過程。較常用的方法是使液體樣品通過一吸附劑，保留其中被測物質(zhì)，再選用適當(dāng)強(qiáng)度溶劑沖去雜質(zhì)，然后用少量良溶劑洗脫被測物質(zhì)，從而達(dá)到快速分離凈化與濃縮的目的。也可選擇性吸附干擾雜質(zhì)，而讓被測物質(zhì)流出。31ppt課件固相萃取的基本原理和方法：31ppt課件32ppt課件32ppt課件萃取小柱一次性使用，防止交叉污染！33ppt課件萃取小柱一次性使用，防止交叉污染！33ppt課件固相萃取操作一般有五步：活化——甲醇/乙腈潤濕小柱，活化填料；平衡——水或適當(dāng)緩沖液沖洗平衡小柱；上樣——將樣品轉(zhuǎn)移上柱，抽去廢液；淋洗——水或緩沖液最大程度洗去干擾物；洗脫——用小體積的溶劑將被測物質(zhì)洗脫下來并收集。34ppt課件固相萃取操作一般有五步：34ppt課件1.正相色譜原理2.反相色譜原理3.離子交換原理根據(jù)原理分類：35ppt課件1.正相色譜原理根據(jù)原理分類：35ppt課件36ppt課件36ppt課件SPE方法的優(yōu)點(diǎn)：1.不會發(fā)生乳化；2.適用范圍廣；3.提取效率高；4.方便快速，可以一次提取分離多種化合物；5.溶劑消耗少；6.易于實(shí)現(xiàn)自動化；7.離子交換固相萃取利用離子交換原理，同色譜柱的依據(jù)極性大小的分離原理不同，配合使用，可以最大限度的分離出藥物，去除干擾。目前商品化的固相萃取小柱（cartridge）已經(jīng)廣泛應(yīng)用。37ppt課件SPE方法的優(yōu)點(diǎn)：37ppt課件三種方法的比較：38ppt課件三種方法的比較：38ppt課件將藥物進(jìn)行化學(xué)衍生化的目的是：①使藥物變成具有能被分離的性質(zhì)；②提高檢測的靈敏度；③增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性；④提高對光學(xué)異構(gòu)體分離的能力等。藥物分子中含有活潑H者均可被化學(xué)衍生化，如：-COOH、-OH、-NH2、-NH-、-SH等官能團(tuán)的藥物都可被衍生化。4.化學(xué)衍生化法39ppt課件將藥物進(jìn)行化學(xué)衍生化的目的是：①使藥物變成具有能被分離的性質(zhì)HPLC中化學(xué)衍生化法，包括柱前衍生化和柱后衍生化兩種方法。柱前衍生化分析前盡可能將藥物進(jìn)行提取分離后再衍生化，防止其他含有相同的功能基團(tuán)的雜質(zhì)也被衍生化，影響分離。柱后衍生化是藥物經(jīng)色譜柱分離之后進(jìn)行的，所以可形成對檢測器具有高靈敏度的衍生物。HPLC法常用的衍生化試劑有鄰苯二醛、丹磺酰氯、熒胺等。

40ppt課件HPLC中化學(xué)衍生化法，包括柱前衍生化和柱后衍生化兩種方法。定量下限達(dá)10pg級別！41ppt課件定量下限達(dá)10pg級別！41ppt課件待測藥物的理化性質(zhì)及在生物體內(nèi)的存在狀況分析測定的目的與要求生物樣品的類型與預(yù)處理方法實(shí)驗(yàn)室條件體內(nèi)藥物分析方法的建立42ppt課件待測藥物的理化性質(zhì)及在生物體內(nèi)的存在狀況體內(nèi)藥物分析方法的建1.光譜分析法2.色譜法

3.毛細(xì)管電泳法4.免疫分析法5.同位素法體內(nèi)藥物分析方法大致可歸為一下幾類：43ppt課件1.光譜分析法體內(nèi)藥物分析方法大致可歸為一下幾類：43pp體內(nèi)藥物的HPLC-MS/MS分析方法開發(fā)的一般流程：1.查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，了解藥物的理化性質(zhì)，選定內(nèi)標(biāo)物質(zhì)；2.使用標(biāo)準(zhǔn)品，掃描質(zhì)譜條件；3.選擇色譜柱和流動相，摸索合適的液相條件；4.依據(jù)樣品基質(zhì)，配制模擬生物樣品，選擇相應(yīng)的樣品處理

方法，處理后進(jìn)樣分析；5.調(diào)整樣品處理方法或液相條件，并可進(jìn)一步優(yōu)化質(zhì)譜參數(shù)；6.根據(jù)檢測目的，設(shè)定定量范圍，對方法進(jìn)行考察。44ppt課件體內(nèi)藥物的HPLC-MS/MS分析方法開發(fā)的一般流程：1.查方法學(xué)驗(yàn)證（validation）

生物樣品測定的關(guān)鍵是方法學(xué)的確證。方法學(xué)確證是整個藥代動力學(xué)研究的基礎(chǔ)。這是藥代動力學(xué)研究有別于其它藥理毒理研究的特殊之處。所有藥代動力學(xué)研究結(jié)果，都依賴于生物樣品的測定，只有可靠的方法才能得出可靠的結(jié)果，因此必須對所建立的方法進(jìn)行驗(yàn)證。并且在實(shí)際樣品檢測過程中還應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)質(zhì)控，制備隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線并對質(zhì)控樣品進(jìn)行測定，以確保檢測方法的可靠性。45ppt課件方法學(xué)驗(yàn)證（validation）生物樣品測定的關(guān)鍵HPLC-MS/MS方法檢測的的驗(yàn)證內(nèi)容：1.特異性和靈敏度2.標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍3.批內(nèi)精密度和準(zhǔn)確度4.批間精密度和準(zhǔn)確度5.稀釋效應(yīng)6.定量下限7.回收率

8.基質(zhì)效應(yīng)9.殘留效應(yīng)10.穩(wěn)定性（標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性、融解樣品穩(wěn)定性、長期穩(wěn)定性、凍/融循環(huán)穩(wěn)定性、進(jìn)樣器中樣品穩(wěn)定性等）化學(xué)藥物臨床藥代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則46ppt課件HPLC-MS/MS方法檢測的的驗(yàn)證內(nèi)容：1.特異性和靈Guidelineonbioanalyticalmethodvalidation-EMEA1.選擇性Selectivity考察方法：測定至少六份不同來源的合適的空白生物基質(zhì)結(jié)果要求：在化合物出峰位置，干擾成分的信號大小不

得超過定量下限中分析物信號高度的20%；在

內(nèi)標(biāo)的出峰位置，雜質(zhì)響應(yīng)不得超過內(nèi)標(biāo)信

號的5%。47ppt課件Guidelineonbioanalyticalmet2.殘留效應(yīng)Carry-over考察方法：跟在最高濃度的樣品之后，連續(xù)進(jìn)樣三遍空

白樣品ULOQ-Blank-ULOQ-Blank-ULOQ-Blank結(jié)果要求：空白樣品中分析物的信號應(yīng)小于定量下限中分

析物信號的20%；內(nèi)標(biāo)的信號應(yīng)小于5%。48ppt課件2.殘留效應(yīng)Carry-over考察方法：跟在最高濃度的樣3.定量下限LowerLimitofquantificationLLOQ考察方法：連續(xù)測定六份定量下限濃度的樣品，統(tǒng)計(jì)準(zhǔn)

確度和精密度結(jié)果要求：準(zhǔn)確度應(yīng)在80%-120%之間；精密度結(jié)果小

于20%；同時(shí)定量下限處信號響應(yīng)值應(yīng)至少

為空白樣品的5倍。49ppt課件3.定量下限LowerLimitofquantif4.校正曲線Calibrationcurve結(jié)果要求：

校正曲線應(yīng)至少包括六個濃度點(diǎn)以及一個MatrixBlank和一個ControlZero點(diǎn)（僅作參考，不納入校正曲線的計(jì)算），必要時(shí)可以做雙份測定；各個濃度點(diǎn)的準(zhǔn)確度應(yīng)在85%-115%之間，精密度應(yīng)小于15%，定量下限處為80%-120%和20%；對不符合要求的濃度點(diǎn)可以排除計(jì)算，但至少有75%以上的濃度點(diǎn)符合要求；方法驗(yàn)證期間應(yīng)至少提供三條以上的合格的標(biāo)準(zhǔn)曲線納入統(tǒng)計(jì)。50ppt課件4.校正曲線Calibrationcurve結(jié)果要求5.準(zhǔn)確度Accuracy考察方法：測定四個濃度的QC樣品，分別為LLOQ，lowQC，mediumQC，highQC，每個濃度至少測定5份；結(jié)果要求：批內(nèi)：每個濃度QC樣品測定結(jié)果的均值應(yīng)在理論

濃度的85%-115%之間，LLOQ處在80%-120%之間；

批間：至少兩天測定至少三批QC樣品，每個濃度QC樣品測定結(jié)果的總平均值應(yīng)在理論濃度的85%-115%之間，LLOQ處在80%-120%之間。51ppt課件5.準(zhǔn)確度Accuracy考察方法：測定四個濃度的QC樣品質(zhì)控樣品QualityControl，QC將標(biāo)準(zhǔn)品加入到生物基質(zhì)中配制成的模擬生物樣品，用作方法學(xué)驗(yàn)證中的考察樣品和樣品測定中的方法學(xué)質(zhì)控。低濃度質(zhì)控(LowQC)濃度不超過LLOQ的3倍；中間濃度質(zhì)控(MediumQC)濃度一般為定量范圍的中間濃度；高濃度質(zhì)控(HighQC)濃度至少為ULOQ的75%。質(zhì)控樣品推薦由獨(dú)立人員一次性配制，進(jìn)樣分析合格后分裝，冰凍儲存，每次取足夠數(shù)量的樣品使用，剩余丟棄。52ppt課件質(zhì)控樣品QualityControl，QC6.精密度Precision

考察方法：測定四個濃度的QC樣品，分別為LLOQ，lowQC，mediumQC，highQC，每個濃度至少測定5份；結(jié)果要求：批內(nèi)：統(tǒng)計(jì)每個濃度QC樣品測定結(jié)果間的CV%值

應(yīng)小于15%，LLOQ處小于20%；

批間：統(tǒng)計(jì)每個濃度所有QC樣品測定結(jié)果間的CV%值應(yīng)小于15%，LLOQ處小于20%。53ppt課件6.精密度Precision考察方法：測定四個濃度的Q7.稀釋完整性Dilutionintegrity考察方法：將5倍于ULOQ濃度的QC樣品，使用空白基質(zhì)連

續(xù)稀釋。每個濃度單獨(dú)稀釋，至少測定5份樣品；結(jié)果要求：每個稀釋濃度的準(zhǔn)確度偏差和精密度應(yīng)在15%

之內(nèi)。54ppt課件7.稀釋完整性Dilutionintegrity考察方8.穩(wěn)定性Stability8.1分析物和內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)貯備液(Stock)和標(biāo)準(zhǔn)工作液(Working)的穩(wěn)定性8.2樣品冰凍/融三次解穩(wěn)定性，F(xiàn)reeze/Thaw，F(xiàn)/T8.3樣品融解后短期穩(wěn)定性，Thawed8.4樣品冰凍的長期穩(wěn)定性，Long-term8.5處理后樣品溶液在進(jìn)樣器中的穩(wěn)定性55ppt課件8.穩(wěn)定性Stability8.1分析物和內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)貯備穩(wěn)定性考察內(nèi)容和操作主要是根據(jù)樣品的實(shí)際儲存條件設(shè)計(jì)，所考察的凍/融循環(huán)數(shù)和儲存時(shí)間均應(yīng)相等或超過實(shí)際樣品。標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性考察應(yīng)將stocksolution稀釋至合適的濃度范圍之內(nèi)，結(jié)果新/舊兩份標(biāo)準(zhǔn)溶液的Diff%值應(yīng)在±5%之內(nèi)。樣品的穩(wěn)定性應(yīng)使用Low和High濃度的QC樣品進(jìn)行考察，每個濃度測定三份，結(jié)果的均值與理論濃度的DEV%值應(yīng)在±15%之內(nèi)。56ppt課件穩(wěn)定性考察內(nèi)容和操作主要是根據(jù)樣品的實(shí)際儲存條件9.基質(zhì)效應(yīng)Matrixeffect考察方法：在LQC和HQC兩個濃度基礎(chǔ)上，取至少6份不

同來源的空白生物基質(zhì)，提取后加入標(biāo)準(zhǔn)和內(nèi)

標(biāo)溶液做為考察組；對照組使用不含有基質(zhì)的

純?nèi)芤?，濃度相?dāng)于加入的LQC和HQC的濃度；

計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)因子MF和內(nèi)標(biāo)校正的MF。