生化檢驗實驗室基本知識

生化檢驗實驗室基本知識鄧益斌內(nèi)容簡介一、生化檢驗標本二、生化試劑盒三、檢驗項目四、生化儀器五、室內(nèi)質(zhì)量控制六、實驗室信息系統(tǒng)（LIS）七、常用生化分析技術(shù)一、生化檢驗標本生化檢驗最常用的標本為血液標本，其他有尿液、腦脊液和胸腹水等不恰當?shù)臉吮臼占c保存，不注意影響標本成分變化的各種因素，往往是導致實驗結(jié)果不可靠的主要原因（一）標本采集1.血標本采集方法采血部位：靜脈、動脈、毛細血管2.血標本類型與選擇血標本可分為全血、血漿與血清血清與血漿有何區(qū)別？血清與血漿有何區(qū)別？1.血漿是抗凝血釋出，而血清是非抗凝血釋出2.血漿中含有纖維蛋白原，而血清中不含有纖維蛋白原3.血清與血漿中：ALT、AST、GLU、CK、TBIL、BUN、Ca2+等無統(tǒng)計學意義;Alb、TG、ALP、UA、鈉磷等有統(tǒng)計學意義無臨床意義（二）影響血標本成分變化因素1.生理因素：年齡、性別、體型、情緒、運動2.飲食因素：3.藥物因素：4.溶血因素：5.儲存因素：Cho/UA/ALP性激素TG皮質(zhì)醇、催乳素、生長素、GLU下降：Alb、鐵、鉀、總膽增高：ALT/AST/ACP/ALP/TP/BUN/CR/UA/GLU/AMY受飲食影響的項目項目：GLU、TG、ALP、血酯、丙酮酸、乳酸、BUN、UA、轉(zhuǎn)氨酶等原則：空腹6-12h后采血受藥物影響的項目藥物影響檢驗結(jié)果途徑：1.藥物本身對檢驗方法的影響2.藥物代謝產(chǎn)物對檢驗方法的影響3.藥物對代謝器官功能的影響原則：檢驗受某種藥物影響的項目之前3天，停止該藥物的使用受溶血因素影響的項目當待測物在紅細胞內(nèi)的濃度高于血清時，溶血可使該待測物結(jié)果偏高，如LDH，AST，ALT，ACP，K+等紅細胞溶解所釋放出來的大量血紅素，可干擾某些項目的檢測，如CHO的酶法測定，BIL的重氮反應，光譜分析等防止溶血的幾個環(huán)節(jié)：一是采血過程;一是血清分離過程防止溶血的辦法：？1.采血器要潔凈;2.扎脈時間要短;3.抽血后，排血動作要輕、慢;4.血清分離動作輕受儲存條件影響的項目原則：采血后，2h內(nèi)盡快將血清與細胞分離，并檢測完畢。為什么受放置時間影響最大的項目有：增高：TP、ALB、CHO、K+、Na+、AST、ALP、GGT降低：GLU、TBIL、CL-、ALT因為細胞仍然活著，仍進行代謝活動，消耗能量，并產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，影響血清成分變化3h:GLU、CO28h：GLU、CO2、TP、K+、AST24h:GLU、CO2、TP、K+、AST、ALB、TBIL、CHO、Na+、CL-、ALT、ALP、GGT二、生化試劑盒商品化試劑盒的廣泛應用，對檢驗醫(yī)學的發(fā)展產(chǎn)生了深遠的影響，它不僅使檢驗操作更簡便，而且使試劑生產(chǎn)和檢驗操作更易標準化和規(guī)范化，尤其是有利于提高檢驗質(zhì)量二、生化試劑盒化學法酶法方法學免疫法物理性狀液體型試劑（自配）凍干型試劑片劑或凍干粉劑液體型試劑（商品）組合方式多劑型試劑單劑型試劑雙劑（多劑）試劑操作方式手工多步驟操作離心式自動分析儀分列式多功能分析儀二、生化試劑盒（一）液體型試劑與粉劑型試劑優(yōu)點缺點液體1.組分均一、瓶間差異小、重復性好;2.無外源水質(zhì)影響，試劑性能穩(wěn)定，準確性好保存時間短，不便運輸粉劑保存時間較長，便于運輸1.重復性差2.準確性差二、生化試劑盒（二）單試劑與雙試劑優(yōu)點缺點單操作簡單、快速1.抗干擾能力差2.分析誤差較大雙1.簡便、快速;2.抗干擾能力強，穩(wěn)定性好;3.分析誤差小，準確性高試劑Ⅰ：消耗或清除干擾物試劑Ⅱ：與待測物起反應比如：TG測定，試劑1（含甘油激酶、3-磷酸甘油氧化酶、辣根過氧化物酶、壞血酸氧化酶，但不含脂蛋白脂肪酶），消耗游離甘油。試劑2（含脂蛋白脂肪酶）起動TG反應。比如酶法測定GLU、CHO、UA、HDL等，試劑1含維生素C氧化本科酶，清除維C對Trinder反應的干擾二、生化試劑盒（三）試劑盒質(zhì)量評價1.線性范圍2.酶促反應時間曲線或化學反應速度時間曲線（1）終點法：空白值、反應時間（2）連續(xù)監(jiān)測法：空白、斜率、反應曲線3.穩(wěn)定性試驗三、生化檢驗項目(一)常規(guī)檢驗項目1.單檢驗項目實用性：經(jīng)濟、快速可靠性：針對性強2.組合檢驗項目全面性：提供全面的檢驗信息高效性：提高檢驗和診斷效率三、生化檢驗項目（二）急診生化檢驗項目急診項目：指對臨床危急、重癥病人的診斷、搶救和治療有重要指導意義的檢驗項目。一般要求從“標本采取”到“檢驗報告”發(fā)出控制在2h內(nèi)。如血氣分析、腎功、電解質(zhì)、心功等常規(guī)項目急診項目危急值檢驗項目三、生化檢驗項目（三）特殊項目指標本采集技術(shù)高，或標本數(shù)量少，或含有傳染性病毒或細菌的標本，這些標本中的項目不管是急診還是常規(guī)項目均屬于特殊項目四、生化儀器(一)離心機(二)電解質(zhì)分析儀(三)血氣分析儀(四)生化分析儀（一）離心機離心機：利用離心力分離液體與固體顆粒或液體與液體的混合物中各組分的機械（一）離心機利用離心機轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的強大離心力，加快液體中顆粒的沉降速度，把樣品不同沉降系數(shù)和浮力物質(zhì)的密度分離開來。微粒移動速度與其大小、形態(tài)和密度有關(guān)，又與重力場的強度及液體的粘度有關(guān)1.按分離因素：常速、高速和超速2.按操作方式：間隙式、連續(xù)式（一）離心機注意事項1.離心前要平衡2.離心機套管底部要墊棉花或試管墊3.離心管必須對稱放入套管中，防止機身振動4.電動離心機如有噪音或機身振動時，應立即切斷電源，即時排除故障5.啟動離心機時，應蓋上離心機頂蓋后6.分離結(jié)束后，先關(guān)閉離心機，在離心機停止轉(zhuǎn)動后，方可打開離心機蓋，取出樣品(二)電解質(zhì)分析儀溶液中被測離子接觸電極時，在離子選擇電極基質(zhì)的含水層內(nèi)發(fā)生離子遷移，遷移離子的電荷改變存在電勢，使膜面間的電位發(fā)生變化，在測量電極與參比電極間產(chǎn)生一個電位差，測量電位差大小可求得待測離子濃度(三)血氣分析儀血氣分析儀不僅能在幾分鐘內(nèi)檢測出病人血液中的氧氣、二氧化碳等氣體的含量和血液酸堿度及相關(guān)指標的變化，還能快速反映血液中鉀、鈉、鈣的含量，為危重病人搶救中快速、準確的檢測提供了有利的保障。(四)生化分析儀日立7060v:400T/h日立7600v:3200T/h五、室內(nèi)質(zhì)量控制1.標本質(zhì)量控制2.試劑質(zhì)量控制3.儀器質(zhì)量控制4.操作過程質(zhì)量控制（標準化與規(guī)范化）5.質(zhì)量控制標準的建立6.失控原因分析與處理六、實驗室信息系統(tǒng)LIS:laboratoryinformationsystem,實驗室信息系統(tǒng)，是通過計算機對實驗室日常工作、科研管理、學科建設(shè)等多個方面所需信息，進行收集、處理、存儲和應用的系統(tǒng)HIS：hospitalinformationsystem,醫(yī)院信息系統(tǒng)六、實驗室信息系統(tǒng)七、常用生化分析技術(shù)（一）光譜分析技術(shù)（二）電泳技術(shù)（三）離心技術(shù)（四）層析技術(shù)（五）電化學分析技術(shù)（六）生物芯片技術(shù)（一）光譜分析技術(shù)定義：利用各種化學物質(zhì)所具有的發(fā)射、吸收或散射光譜譜系的特征，來確定其性質(zhì)、結(jié)構(gòu)或含量的技術(shù)，稱之為光譜分析技術(shù)。根據(jù)光譜譜系特征，可分為發(fā)射光譜分析、吸收光譜分析和散射光譜分析三大類（一）光譜分析技術(shù)類型優(yōu)點缺點種類吸收光譜分析1.靈敏度高，達10-5mol/L;2.操作簡單、快速，選擇性好和應用廣泛;1.比色法需有標準品;2.紫外法的吸收池需用石英杯;3.原子吸收法需特定元素的空心陰極燈1.可見光及紫外光分光度法2.原子吸收分光光度法發(fā)射光譜分析1.熒光分析法靈敏度高，取樣量少，檢測范圍廣，臨床應用廣泛;1.火焰光度法操作繁雜、干擾因素多，被離子選擇性電極法取代;1.火焰光度法2.熒光分析法散射光譜分析操作簡單、快速，主要用于免疫球蛋白、載脂蛋白和補體等項目檢測1.易受混懸液中微粒的分散度影響;2.混懸液的穩(wěn)定性較差常用法為免疫比濁法（一）光譜分析技術(shù)影響光譜分析的主要因素：1.化學因素：濃度、pH、時間、雜質(zhì)2.主觀因素：操作不當有關(guān)3.光學因素：儀器性能有關(guān)（二）電泳技術(shù)定義：在電場中，帶電粒子向所帶電荷相反的電板移動的現(xiàn)象稱為電泳。根據(jù)電泳原理可分為移動界面電泳、區(qū)帶電泳和穩(wěn)態(tài)電泳等（二）電泳技術(shù)類型優(yōu)點缺點種類