微生物基礎(chǔ)知識(shí)培訓(xùn)(霍文瑩)

霍文瑩2015年12月微生物基礎(chǔ)知識(shí)培訓(xùn)目的無菌定義微生物污染的相關(guān)知識(shí)醫(yī)療器械生產(chǎn)過程中微生物污染的來源和預(yù)防《藥典》對(duì)無菌保證的定量標(biāo)準(zhǔn)理想狀態(tài)：沒有任何活的微生物。藥典定義（無菌保證值）：經(jīng)滅菌后，產(chǎn)品中污染菌存活的概率不大于百萬分之一（10-6）。什么是微生物？

它們是非常小的單細(xì)胞或多細(xì)胞生物，肉眼無法看到。它們對(duì)營養(yǎng)的要求非常低。它們是一類繁殖非?？斓纳铩Ｋ鼈兎浅Ｈ菀装l(fā)生變異。它們無處不在。大多數(shù)微生物對(duì)人類有益。有些微生物對(duì)人類有害。微生物的分類：一、微生物按結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性分類：★原核類:僅有原始核質(zhì)，無核仁或核膜，細(xì)胞器很不完善。如細(xì)菌、放線菌、支原體、立克次氏體、衣原體、螺旋體?！镎婧祟?細(xì)胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體，細(xì)胞器完整。如真菌（酵母菌和霉菌）、原生動(dòng)物、藻類。★非細(xì)胞類:體積微小，能通過除菌過濾器。如病毒和朊病毒等。二、按其致病性可分為:★病原性微生物★非病原性微生物微生物的特點(diǎn)：個(gè)體小,面積大：小于0.1mm。肉眼不可見。分布廣,種類多（10萬多種）：自然界中到處都有，如水、空氣、土壤等,

土壤中的數(shù)量最多。代謝強(qiáng)，轉(zhuǎn)化快：發(fā)酵乳糖的細(xì)菌在1小時(shí)內(nèi)可分解其自重1000～10000倍的乳糖。生長旺，繁殖快：微生物有驚人的繁殖速度，大多數(shù)微生物幾十分鐘內(nèi)就可以繁殖一代。適應(yīng)性強(qiáng)，易變異（耐藥性產(chǎn)生的原因）。葡萄球菌

酵母菌（芽痕）棒狀桿菌大腸桿菌弧狀菌鏈球菌菌落單位：菌落單位----CFU

定義：由單個(gè)菌細(xì)胞或幾個(gè)同種菌細(xì)胞在培養(yǎng)基上長成肉眼可見的菌落，每個(gè)菌落就是1CFU。光滑型菌落粗糙型菌落微生物的分布土壤：是微生物生活的最適環(huán)境。水：僅次于土壤的微生物分布、定居的第二場所。空氣：空氣中的微生物主要來源于帶有微生物菌體及孢子的灰塵，這類微生物大多數(shù)是腐生性的，還來源于人和動(dòng)物，它們大多數(shù)是通過呼吸道排出的，其中也包含有病原微生物，懸浮在大氣中。

正常人體微生物的分布微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)一、細(xì)菌細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短、結(jié)構(gòu)簡單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌，以二分裂方式無性繁殖的原核微生物，分布廣泛。細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)

（1）球菌多數(shù)球菌直徑在1微米左右，外觀呈球形或近似球形。由于繁殖時(shí)分裂平面不同可形成不同的排列方式，分為雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌等。（2）桿菌形態(tài)多數(shù)呈直桿狀，也有的菌體稍彎，多數(shù)呈分散存在，也有的呈鏈狀排列，分為棒狀桿菌、鏈狀桿菌、球桿菌等。（3）螺形菌菌體彎曲，呈弧形或螺旋形。如幽門螺桿菌。

細(xì)菌雖小，仍具有一定的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和核質(zhì)等各種細(xì)菌都有，是細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)。球菌(coccus)雙球菌(diplococcus)鏈球菌(streptococcus)球菌(coccus)八疊球菌(sarcina)四聯(lián)球菌(tetrad)桿菌(bacillus)

不同桿菌的大小、長短、粗細(xì)很不一致。中大腸埃希菌2-3μm小布魯菌0.6-1.5μm炭疽芽胞桿菌3-10μm大桿菌(bacillus)

分枝桿菌雙歧桿菌螺形菌(spiralbacterium)

弧菌螺菌螺桿菌細(xì)菌的繁殖

細(xì)菌生長速度很快，一般約20min分裂一次。若按此速度計(jì)算，細(xì)菌群體將龐大到難以想象的程度。但事實(shí)上由于細(xì)菌繁殖中營養(yǎng)物質(zhì)的逐漸消耗，有害代謝產(chǎn)物的逐漸積累，細(xì)菌不可能始終保持高速度的無限繁殖。經(jīng)過一段時(shí)間后，細(xì)菌繁殖速度逐漸減慢，死亡菌數(shù)增多，活菌增長率隨之下降并趨于停滯。微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)二、真菌真菌是一類有細(xì)胞壁，無葉綠素，以寄生或腐生方式生存，少數(shù)為單細(xì)胞，多數(shù)為多細(xì)胞，能進(jìn)行無性或有性繁殖的一類真核細(xì)胞型微生物。真菌包括單細(xì)胞與多細(xì)胞兩類。單細(xì)胞真菌呈圓形或卵圓形，稱為酵母菌；多細(xì)胞真菌由菌絲和孢子組成，并交織成團(tuán)，稱絲狀菌或霉菌。真菌生長的最適的溫度為22～28℃，最適的pH值為4～6。其繁殖能力強(qiáng)，但生長速度比細(xì)菌慢，常需1-4周才形成菌落。真菌對(duì)熱的抵抗力不強(qiáng)，一般加熱60~70℃1小時(shí)即被殺死，但對(duì)干燥、日光、紫外線和一些化學(xué)消毒劑有抵抗力，但對(duì)2.5％碘酒、10％甲醛則較敏感。微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)三、病毒病毒屬非細(xì)胞型微生物，在自然界分布非常廣泛，可在人、動(dòng)物、植物、真菌和細(xì)菌中寄居并引起感染。病毒是體積最小、結(jié)構(gòu)最簡單的微生物，它僅有一種核酸（DNA或RNA）作其遺傳物質(zhì)。病毒必須在宿主活細(xì)胞內(nèi)寄生，依靠細(xì)胞提供的能量、營養(yǎng)物質(zhì)及生物大分子合成機(jī)制，完成病毒的復(fù)制過程。病毒與人類的關(guān)系極為密切，人類的傳染病約75％是由病毒引起的。有些病毒傳染性強(qiáng)，可引起世界大流行（如流感、艾滋病等）。熱原與內(nèi)毒素?zé)嵩涸S多細(xì)菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產(chǎn)生熱原。熱原是微量即可引起恒溫動(dòng)物體溫異常升高的物質(zhì)的總稱。主要物質(zhì)為細(xì)菌內(nèi)毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗體復(fù)合物、半抗體原物質(zhì)和某些藥物（類固醇）等。內(nèi)毒素：細(xì)菌內(nèi)毒素一般指革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分，主要是脂多糖。熱原與內(nèi)毒素的理化特性：①耐熱性：120℃加熱4h，可破壞98%。180℃加熱2h或250℃加熱30min，才可徹底破壞。②濾過性：其體積小，約在1~5nm之間，故能通過濾器進(jìn)入濾液中。③具有水溶性及不揮發(fā)性。④能被強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和氧化劑破壞。微生物的益處

絕大多數(shù)微生物對(duì)人和動(dòng)物是有益的，已廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、食品、醫(yī)藥、釀造、化工、制革、石油等行業(yè)，發(fā)揮了越來越重要的作用。例如與我們?nèi)粘Ｉ蠲芮邢嚓P(guān)的如酸奶、酒類、抗生素、疫苗等。啤酒，葡萄酒的生產(chǎn)面包酵母的生產(chǎn)奶酪的生產(chǎn)醋的生產(chǎn)酸奶的生產(chǎn)維生素的生產(chǎn)類固醇的生產(chǎn)抗菌素、干擾素的生產(chǎn)分解廢物，循環(huán)利用幫助腸道中的食物消化微生物的害處

微生物中也有一部分能引起人及動(dòng)、植物發(fā)生病害，這些具有致病性的微生物，稱為病原微生物。如人類的許多傳染?。ǜ忻?、傷寒、痢疾、結(jié)核、脊髄灰質(zhì)炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。從醫(yī)療器械生產(chǎn)的衛(wèi)生學(xué)而言，微生物對(duì)醫(yī)療器械的原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品的污染是造成生產(chǎn)失敗、成品不合格的重要因素。

導(dǎo)致傷口感染導(dǎo)致胃腸不適引起感冒，咳嗽尿道感染敗血癥癌癥腦脊膜炎破傷風(fēng)艾滋病感冒血常規(guī)常識(shí)（看三項(xiàng)）：白細(xì)胞增高：炎癥中性粒細(xì)胞增高：細(xì)菌性感冒淋巴細(xì)胞增加：病毒性感冒微生物的主要類群：桿菌(大腸桿菌)

微生物的主要類群：桿菌(碳疽)

沙門氏菌

微生物的主要類群：葡萄球菌

微生物的主要類群：鏈球菌微生物的主要類群：弧狀菌

微生物的主要類群：四疊球菌

細(xì)菌的繁殖：二分裂繁殖

微生物的主要類群：黑曲霉菌

微生物的主要類群：絲狀真菌

真菌的繁殖：分生孢子

醫(yī)療器械生產(chǎn)中微生物控制

為什么要對(duì)醫(yī)療器械生產(chǎn)進(jìn)行微生物控制？微生物可以致病。特別是對(duì)無菌、植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品的危害。如果細(xì)菌得到了必要的養(yǎng)料、一定量的水份和合適的溫度，它們就能迅速繁殖，它們繁殖的速度快得驚人。通常一個(gè)細(xì)菌在僅僅24小時(shí)后可產(chǎn)生出281兆(百萬)個(gè)的細(xì)菌。

生產(chǎn)過程中的主要的微生物污染源

空氣水設(shè)備原輔料人員微生物的污染途徑自身污染：由于患者和員工自身攜帶微生物而污染。接觸污染：由于和非無菌的用具、器械或人的接觸而污染?？諝馕廴荆河捎诳諝庵兴⑸锏某两怠⒏街虮晃攵廴?。其他污染：由于其他因素（如昆蟲）而污染?？刂莆⑸锏奈廴就緩?/p>

有效地阻止室外的污染侵入室內(nèi)。迅速有效地排除室內(nèi)已發(fā)生的污染。控制污染源，減少污染發(fā)生量?？刂莆⑸镂廴就緩剑ㄈ?、機(jī)、料、法、環(huán)）污染途徑及解決措施人、機(jī)、料、法、環(huán)歐盟GMP2002微粒指標(biāo)A級(jí)風(fēng)速為：0.36-0.54m/s（指導(dǎo)值）級(jí)別分動(dòng)態(tài)及靜態(tài)；5μm：<1應(yīng)視作不檢出；2005年9月21日修改，考慮光散射及電子噪聲等可能誤報(bào)，標(biāo)準(zhǔn)為<20個(gè)/m3

應(yīng)對(duì)A級(jí)區(qū)的空氣粒子進(jìn)行連續(xù)測(cè)定，并建議對(duì)B級(jí)區(qū)也連續(xù)測(cè)定控制微生物污染途徑三、料A、原輔料；B、內(nèi)包材；C、與醫(yī)療器械接觸的其它部分（氣體、溶劑）

控制微生物污染途徑四、機(jī)設(shè)備和器具與醫(yī)療器械的直接接觸。特別是設(shè)備或設(shè)施的衛(wèi)生死角?？刂莆⑸镂廴就緩皆O(shè)備和器具的清洗清潔程序必須經(jīng)過驗(yàn)證嚴(yán)格按清洗周期清洗清洗和存放設(shè)備、器具處應(yīng)與生產(chǎn)區(qū)域潔凈等級(jí)相同注重與物料接觸設(shè)施及部件處理控制微生物污染途徑五、法上述各種控制方法應(yīng)該以相關(guān)SOP形式存在。SOP的概念SOP是StandardOperationProcedure三個(gè)單詞中首字母的大寫，即標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)程序，就是將某一事件的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟和要求以統(tǒng)一的格式描述出來，用來指導(dǎo)和規(guī)范日常的工作。SOP是一種標(biāo)準(zhǔn)的作業(yè)程