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文檔簡介

脂代謝紊亂檢驗第十章脂代謝紊亂檢驗第十章高脂蛋白血癥冠心病急性事件異常?機體脂類代謝正常?血脂高脂蛋白血癥異常?機體脂類代謝正常?血脂血脂:是血漿中脂類的總稱第一節(jié)概述甘油三酯(TG)

游離膽固醇(FC)膽固醇酯(CE)總膽固醇(TC)磷脂(PL)

游離脂肪酸(FFA)血脂(血漿脂類)

血漿脂蛋白(Lp):血脂+載脂蛋白血脂:是血漿中脂類的總稱第一節(jié)概述甘油三酯(TG)脂蛋白結構示意圖此種結構形式可使脂蛋白顆粒穩(wěn)定、均勻地分散于血漿。并可與酶及細胞表面的受體接觸,在脂蛋白代謝中起關鍵作用。脂蛋白結構示意圖此種結構形式可使脂蛋白顆粒穩(wěn)定、均勻地分散于1、超速離心法乳糜微粒(CM)極低密度脂蛋白(VLDL)中間密度脂蛋白(IDL)低密度脂蛋白(LDL)高密度脂蛋白(HDL)脂蛋白(a)(Lp(a))

血漿脂蛋白的分類1、超速離心法乳糜微粒(CM)極低密度脂蛋白(VLDL)

依據(jù)血漿脂蛋白分子中蛋白質表面電荷多少的不同而分離。通??煞殖桑?/p>

2、電泳CM、β-LP、pre-β-LP、α-LP四條區(qū)帶?

CM

前依據(jù)血漿脂蛋白分子中蛋白質表面電荷多少的不同而分離。離心法電泳法離心法電泳法人血漿脂蛋白主要特征

CMVLDLIDLLDLHDLLp(a)電泳位置原點前-和前之間--前-主要脂質外源性TG內源性TG內源性TG、CECEPLCE、PL主要載脂蛋白B48B100/CⅡ/EB100/EB100AI/AⅡ(a),B100合成部位小腸粘膜細胞肝細胞血漿血漿肝、腸、血漿肝細胞功能轉運外源性TG轉運內源性TG轉運內源性TG、CE轉運內源性CE逆向轉運CE人血漿脂蛋白主要特征電泳位置原點前-和前之間-脂蛋白(a)----Lp(a)的前世今生因此,引起人們對Lp(a)遺傳學、代謝、功能以及與疾病的聯(lián)系進行深入研究。1963年1975年1987年1988年Berg首先發(fā)現(xiàn)并將其命名為lipoprotein(a)簡稱Lp(a)Dal-hen等研究認為Lp(a)是動脈粥樣硬化(AS)的危險因素Mclean等研究發(fā)現(xiàn)Lp(a)中的Apo(a)與纖溶酶原具有高度同源性國際Lp(a)會議將Lp(a)定為冠心病(CHD)獨立危險因素脂蛋白(a)----Lp(a)的前世今生因此,引起人們對LpLp(a)的核心部分由TG、PL、chol、CE等脂質和ApoB100組成,結構類似LDL。且含有特異性抗原成分——

Apo(a)。Lp(a)中1分子ApoB通過二硫鍵與1分子Apo(a)共價結合。Apo(a)與PLG(纖溶酶原)具有高度同源性。肝臟是Apo(a)合成的主要場所。Lp(a)是一類獨立的脂蛋白Lp(a)是動脈粥樣硬化的獨立危險因素,且與血栓形成密切相關。Lp(a)的特點Lp(a)的核心部分由TG、PL、chol、CE等脂質和Ap11載脂蛋白定義:脂蛋白的蛋白部分稱為載脂蛋白(Apo)。種類:

按1972年Alaupovic建議的命名方法,用英文字母順序編碼,分為ApoA、B、C、D、E、F、G、H、J等。由于氨基酸組成的差異,每一型又可分若干亞型。11載脂蛋白定義:ApoAApoBApoCApoE分類載體、運輸聯(lián)系、配體激活功能合成部位肝小腸受體LDL受體殘粒受體清道夫受體ApoAApoBApoCApoE分類載體、運輸載脂蛋白分子量合成場所脂蛋白中分布染色體定位生理功能ApoAI28KD肝臟、小腸HDL、CM1LCAT激活劑,識別HDL受體ApoAⅡ17KD肝臟、小腸HDL、CM1LCAT抑制;參可脂質轉運ApoAIV26KD肝臟、小腸HDL、CM11參與膽固醇逆向轉運;輔助激活LPLApoB100550KD肝臟VLDL、IDL、LDL2參與VLDL合成與分解;識別LDL受體ApoB48275KD小腸CM2參與CM合成與分解;輸運外源性TGApoCI7KD肝臟CM、VLDL、HDL19激活LCAT及LPLApoCⅡ9KD肝臟CM、VLDL、HDL19激活LPLApoCⅢ9KD肝臟CM、VLDL、HDL11抑制與肝細胞受體結合ApoD33KD肝臟HDL3參與膽固醇逆向轉運ApoE34KD肝臟CM、VLDL、IDL、HDL19識別LDL受體及肝ApoE受體

Apo(a)280-800KD肝臟Lp(a)6抑制纖溶酶原活性載脂蛋白分子量合成場所脂蛋白中分布染色體定位生理功脂蛋白受體糖蛋白調節(jié)細胞外脂蛋白的水平LDL受體殘粒受體清道夫受體運送及清除LDL受體:識別ApoB100(ApoE)對維持細胞和全身膽固醇平衡起重要作用識別ApoE,清除血液循環(huán)中CM殘粒和β-VLDL殘粒巨噬細胞表面,介導修飾LDL從血液循環(huán)中清除脂蛋白受體糖蛋白LDL受體運送LDL受體:識別ApoB100膽固醇酯轉運蛋白(CETP)磷脂轉運蛋白(PTP)甘油三酯轉運蛋白(TTP)脂質轉運蛋白------LTP

血漿中脂蛋白部分含有一種特殊的轉運蛋白,能促進血漿各脂蛋白間膽固醇酯、甘油三酯和磷脂的單向或雙向轉運和交換,這類特殊轉運蛋白稱脂質轉運蛋白(LTP)。膽固醇酯轉運蛋白(CETP)脂質轉運蛋白------LTP血漿脂蛋白代謝脂蛋白代謝以肝臟為中心

HDL代謝:膽固醇逆轉運(RCT)

VLDL-IDL-LDL代謝:由肝合成VLDL,再轉變?yōu)镮DL和LDL,并被肝或其它器官代謝的過程CM代謝:飲食攝入的Ch和TG在小腸中合成CM及其代謝過程LP代謝外源性代謝內源性代謝血漿脂蛋白代謝脂蛋白代謝以肝臟為中心HDL代謝血漿脂蛋白代謝總圖血漿脂蛋白代謝總圖CMVLDLIDLLDLHDL電泳位置原點前-和前之間--主要脂質外源性TG內源性TG內源性TG、CECEPL主要載脂蛋白B48B100/CⅡ/EB100/EB100AI/AⅡ合成部位小腸粘膜細胞肝細胞血漿血漿肝、腸、血漿功能轉運外源性TG轉運內源性TG轉運內源性TG、CE轉運內源性CE逆向轉運CELp(a)是一類獨立的由肝臟合成的脂蛋白電泳位置原點前-和前之間--主要脂質外源性TG內源高脂血癥:TC或/和TG

高脂蛋白血癥:CM、VLDL、LDL、HDL

血漿脂蛋白代謝紊亂脂質異常血癥高脂血癥:TC或/和TG高脂蛋白血癥:血漿2020劃分水平血脂項目mmol/L(mg/dl)TCLDL-CHDL-CTG合適范圍<5.18(200)<3.37(130)≥1.04(40)<1.70(150)邊緣升高5.18~6.19(200~239)3.37~4.12(130~159)1.70~2.25(150~199)升高≥6.22(240)≥4.14(160)≥1.55(60)≥2.26(200)降低<1.04(40)我國血脂分層切點(2007)《中國成人血脂異常防治指南》(2007)2020劃分水平血脂項目mmol/L(mg/dl)TCLD高脂血癥的分類臨床表型基因分型法Fredrickson是否繼發(fā)其他疾病高脂血癥的分類臨床表型基因分型法血清(血漿)外觀:在4℃冰箱放置16-24h

后的血清外觀

(2)血脂濃度:血清TG、TC含量

(3)各種血漿脂蛋白升高程度依據(jù)表型血漿4℃過夜外觀TCTGCMVLDLLDL備注Ⅰ奶油上層,下層清↑→↑↑↑↑↑↑↓→易發(fā)胰腺炎Ⅱa透明↑↑→→→↑↑易發(fā)冠心?、騜透明↑↑↑↑→↑↑易發(fā)冠心?、竽逃蜕蠈?下層混濁↑↑↑↑↑↑↓易發(fā)冠心?、艋鞚帷装l(fā)冠心病Ⅴ奶油上層,下層混濁↑↑↑↑↑↑↓→易發(fā)胰腺炎

1967年Fredrickson等首先提出高脂蛋白血癥的分類法(5型)。1970年WHO進行部分修改,將其中Ⅱ型分為Ⅱa和Ⅱb兩型。1.表型分類:血清(血漿)外觀:在4℃冰箱放置16-24h

后的2.按是否繼發(fā)于全身性疾病分類:(1)原發(fā)性高脂血癥(2)繼發(fā)性高脂血癥①糖尿?、诩谞钕俟δ艿拖拢诇p)③腎疾?、芩幬铫萜渌?.按是否繼發(fā)于全身性疾病分類:(1)原發(fā)性高脂血癥(2)繼3.高脂血癥的基因分型法常用名基因缺陷臨床特征表型分類家族性高膽固醇血癥LLDL受體缺陷以膽固醇升高為主,可伴輕度甘油三酯升高,LDL明顯增加,可有肌腱黃色瘤,多有冠心病和高脂血癥家族史。ⅡaⅡb家族性ApoB100缺陷癥ApoB100缺陷同上同上家族性混合型高脂血癥不清楚膽固醇和甘油三酯均升高,VLDL和LDL都增加,無黃色瘤,家族成員中有不同型高脂蛋白血癥,有冠心病家族史。Ⅱb家族性異常β脂蛋白血癥ApoE異常膽固醇和甘油三酯均升高,乳糜微粒和VLDL殘粒以及IDL明顯增加,可有掌皺黃色瘤,多為ApoE2(2/2)表型。Ⅲ家族性高甘油三酯血癥不清楚以甘油三酯升高為主,可有輕度膽固醇升高,VLDL明顯增加。Ⅳ3.高脂血癥的基因分型法常用名基因缺陷臨床特征表型①4℃靜置過夜,表面奶油狀,下層澄清②血清TG↑↑,血清TC正常或輕度↑③血清脂蛋白電泳,CM↑↑Ⅰ型高脂蛋白血癥家族性高乳糜微粒血癥脂蛋白酶缺乏癥生化特征基因突變LPLCM①4℃靜置過夜,Ⅰ型高脂蛋白血癥生化特征基因突變Ⅱa高脂蛋白血癥高β-脂蛋白血癥高膽固醇血癥生化特征①4℃冷置試驗血漿外觀澄清②血清TC↑↑尤其LDL↑↑TG正常③血清脂蛋白電泳β-LP↑↑LDLR缺乏或異常此型臨床常見Ⅱa高脂蛋白血癥生化特征①4℃冷置試驗LDLR缺乏或異Ⅱb型高脂蛋白血癥生化特征①4℃冷置試驗血清外觀澄清或微混②血清TC↑,TG↑VLDL和LDL均↑

③血清脂蛋白電泳β-LP↑,preβ-LP↑

多基因突變LPLLCAT此型臨床很常見Ⅱb型高脂蛋白血癥生化特征①4℃冷置試驗多基因突變Ⅲ型高脂蛋白血癥寬β-脂蛋白血癥①4℃冷置試驗,血清外觀混濁可見一模糊奶油樣薄膜。②血清TC,TG。③血清脂蛋白電泳,β-LP↑,preβ-LP↑融合形成寬β區(qū)帶。生化特征ApoE異常VLDL轉化和清除缺陷Ⅲ型高脂蛋白血癥寬β-脂蛋白血癥①4℃冷置試驗,血清外觀混濁Ⅳ型高脂蛋白血癥①4℃冷置試驗,血清外觀可以是澄清也可呈混濁。②血清TG↑↑

,TC正常或稍↑,VLDL↑

③血清脂蛋白電泳,preβ-LP↑

內源性高三脂酰甘油血癥生化特征臨床表現(xiàn),多見于中青年,較常見Ⅳ型高脂蛋白血癥①4℃冷置試驗,血清外觀可以是內源性高三脂酰Ⅴ型高脂蛋白血癥混合性高三酰甘油血癥①4℃冷置試驗,血清上層為奶油狀,下層混濁。②血漿中TG,TC↑,VLDL。③血清脂蛋白電泳,CM,preβ-LP↑。內源性和外源性TG清除功能缺陷生化特征Ⅴ型高脂蛋白血癥混合性高三酰甘油血癥①4℃冷置試驗,血清上層31黑線峰:正常圖形藍色峰:實際圖形脂蛋白電泳圖譜

31黑線峰:正常圖形脂蛋白電泳圖譜脂代謝檢驗ppt課件

主要有四種類型:

1.家族性低β-脂蛋白血癥2.β-脂蛋白缺乏血癥3.家族性低α-脂蛋白血癥4.

Tangier病(無HDL血癥)低脂蛋白血癥主要有四種類型:3.家族性低α-脂蛋白血癥低脂動脈粥樣硬化(AS)是指動脈內膜因脂質、血液成分的沉積、平滑肌細胞及膠原纖維增生,并伴有不同程度壞死及鈣化等一類慢性進行性的病理改變。脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化動脈粥樣硬化(AS)是指動脈內膜因脂質、血液成分的沉積、平滑最終導致血管壁呈增厚、狹窄,使某些臟器(尤其是心、腦)供血不足而損傷,甚至危及生命。最終導致血管壁呈增厚、狹窄,使某些臟器高血壓年齡冠心病家族史血脂紊亂吸煙糖尿病不可改變的可改變的NCEP

Circulation1994;89:1329–1445.EurHeartJ1994;15:1300–1331.WoodDetal.

EurHeartJ1998;19:1434–1503.冠心病冠心病的主要危險因素高血壓年齡冠心病家族史血脂紊亂吸煙糖尿病不可改變的可改變的NAS主要的危險因素①高脂血癥(高脂蛋白血癥)②高血壓③吸煙④性別⑤遺傳因素⑥內分泌因素高膽固醇血癥AS主要的危險因素①高脂血癥④性別高膽固醇血癥引起動脈粥樣硬化的脂蛋白CM顆粒大,一般不致AS,但易誘發(fā)胰腺炎LDL相對較小,是首要的致AS性脂蛋白VLDL升高已被確認為CHD的危險因子。IDL具有致AS作用LP(a)As的獨立危險因子。

動脈粥樣硬化HDL降低引起動脈粥樣硬化的脂蛋白CMLDLVLDLIDLLP(a)動第二節(jié)血脂、脂蛋白及載脂蛋白測定第二節(jié)血脂、脂蛋白及載脂蛋白測定血漿脂蛋白和脂質測定是臨床生物化學檢驗的常規(guī)測定項目其臨床意義主要是:1、早期發(fā)現(xiàn)與診斷高脂蛋白血癥2、協(xié)助診斷AS癥3、評價AS疾患如冠心病和腦梗塞等危險度4、監(jiān)測評價飲食與藥物治療效果。血漿脂蛋白和脂質測定是臨床生物化學檢驗的常規(guī)測定項目其臨床意41臨床常規(guī)(包括體檢)血脂檢查應至少選擇TC、TG、HDL-C及LDL-C這四項。只測定TC、TG不能反映患者基本血脂情況。血脂項目的合理選擇與應用

41臨床常規(guī)(包括體檢)血脂檢查應至少選擇TC、TG、HDL常規(guī)測定項目:TC、TG、HDL-C、LDL-C

分析前的準備:受試者的準備標本采集合格的試劑校準物的選用檢測方法選擇是否空腹采血體位血液濃縮抗凝劑標本處理存儲條件生物學波動常規(guī)測定項目:TC、TG、分析前的準備:受試者的準備是否空腹總膽固醇(totalcholesterol,TC)甘油三酯(triglyceride,TG)高密度脂蛋白-膽固醇(highdenselipoproteincholesterol,HDL-C)低密度脂蛋白-膽固醇(lowdenselipoproteincholesterol,LDL-C)載脂蛋白AⅠ(apolipoproteinAⅠ,ApoAⅠ)載脂蛋白B(apolipoproteinB,ApoB)Apo(a)臨床血脂分析項目總膽固醇(totalcholesterol,TC)臨床血脂TC升高:Ⅱb型、Ⅲ型空腹血清清澈(TG正常)(TG升高)測定TCTC正常:血脂正常TC升高:Ⅱa混濁上層有“奶油”層(CM升高)下層清澈:Ⅰ型下層混濁:Ⅴ型均勻混濁(VLDL升高)TC正常:Ⅳ型測定TC4℃過夜(VLDL↑)(VLDL正常)一、血清(漿)靜置試驗TC升高:Ⅱb型、Ⅲ型空腹血清清澈(TG正常)(TG升高)測

二、血清(漿)總膽固醇測定測定方法決定性方法—同位素-質譜法參考方法—化學法(ALBK法)/HPLC常規(guī)方法—酶法二、血清(漿)總膽固醇測定測定方法決定性方法—同位素★膽固醇氧化酶法--COD-PAP法CHECODPOD膽固醇酯+H2O膽固醇+游離脂肪酸膽固醇+O2△4-膽甾烯酮+H2O22H2O2+4-AAP+酚醌亞胺(紅色化合物)+4H2O簡便,快速,無腐蝕性,高,好,寬CE水解不全,CHE活性受影響,易受干擾常規(guī)方法方法學評價★膽固醇氧化酶法--COD-PAP法CHECODPOD膽固醇脂代謝檢驗ppt課件三、血清(漿)三酰甘油測定檢測方法同位素稀釋-質譜法酶法(GPO-PAP)*磷酸甘油氧化酶法乳酸脫氫酶法甘油氧化酶法化學法(美)三、血清(漿)三酰甘油測定檢測方法同位素稀釋-質譜法酶法(G1、磷酸甘油氧化酶法(GPO-PAP)LPL三酰甘油+H2O甘油+3-脂肪酸甘油+ATP

3-磷酸甘油+ADP3-磷酸甘油+O2+2H2O磷酸二羥丙酮+2H2O2H2O2+4-AAP+4-氯酚苯醌亞胺+2H2O+HCLGK,Mg2+PODGPO如何消除游離甘油的干擾外空白法內空白法又稱兩步法(雙試劑法)1、磷酸甘油氧化酶法(GPO-PAP)LPL三酰甘油甘油+ATP

3-磷酸甘油+ADP3-磷酸甘油+O2

磷酸二羥丙酮+H2O2H2O2+氧受體氧化的受體(不顯色)+2H2OGKPODGPO第一步反應第二步反應本法酶試劑比較穩(wěn)定,靈敏度高,線性范圍較寬兩步法為中華醫(yī)學會檢驗分會推薦方法三酰甘油+H2O甘油+3-脂肪酸甘油+ATP

3-磷酸甘油+ADP3-磷酸甘油+O2+2H2O磷酸二羥丙酮+2H2O2H2O2+4-AAP+4-氯酚苯醌亞胺+2H2O+HCLGK,Mg2+PODGPOLPL甘油+ATP32.乳酸脫氫酶法【原理】LPL三酰甘油+H2O甘油+3-脂肪酸甘油+ATP

3-磷酸甘油+ADPADP+磷酸烯醇式丙酮酸

丙酮酸+ATP丙酮酸+NADHNAD++乳酸GK,Mg2+LDH丙酮酸激酶2.乳酸脫氫酶法【原理】LPL三酰甘油+H23.甘油氧化酶法第一步:

FG+O2

甘油醛+H2O2H2O2+EMAE無色物質消除游離甘油的影響,3-5min后進行第二步反應:TG+3H2O甘油+3RCOOH甘油+O2

甘油醛+H2O2H2O2+4-AAP+EMAE有色物質EMAE作用與酚相似,是還原劑,但靈敏度比酚高。甘油氧化酶PODPODLPL甘油氧化酶3.甘油氧化酶法第一步:甘油氧化酶PODPOD

血清甘油三酯一般隨年齡增加而升高,體重超過標準者往往偏高。合適范圍:≤1.70mmol/L(150mg/dl),升高:>1.70mmol/L(150mg/dl)。升高:(1)原發(fā)性高TG血癥,包括家族性高TG血癥與家族性高脂(蛋白)血癥等。(2)繼發(fā)性高TG見于糖尿病糖原貯積癥、甲狀腺功能減退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥等降低:甲亢、腎上腺皮質功能減退和肝功能嚴重損傷?!緟⒖紖^(qū)間】【臨床意義】血清甘油三酯一般隨年齡增加而升高,升高:(1)原發(fā)性

四、血清(漿)脂蛋白測定測定方法超速離心法電泳分離法血漿脂蛋白膽固醇測定法四、血清(漿)脂蛋白測定測定方法超速離心法高密度脂蛋白膽固醇測定參考方法:超速離心法

超速離心分離HDL,然后用化學法(ALKB法)或酶法測定其膽固醇含量,此法需特殊設備,而且不易常握。沉淀劑:肝素-錳、硫酸葡聚糖-鎂、聚乙二醇、磷鎢酸-鎂常規(guī)方法:HDL直接測定法抗體包裹法、酶修飾法、選擇性抑制法沉淀分離法高密度脂蛋白膽固醇測定參考方法:超速離心法超速離心分離HDL-C合適范圍:≥1.04mmol/L(40mg/dl)<0.91mmol/L(35mg/dl)為減低

流行病學與臨床研究證明,HDL-C與冠心病發(fā)病呈負相關,HDL-C低于0.9mmol/L是冠心病危險因素。HDL-C大于1.55mmol/L被認為是冠心病的“負”危險因素。HDL-C下降還多見于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TG血癥往往伴以低HDL-C,肥胖者的HDL-C也多偏低。吸煙可使HDL-C下降,適量飲酒、長期體力勞動和運動會使HDL-C升高?!緟⒖贾怠俊九R床意義】HDL-C合適范圍:≥1.04mmol/L(40mg/dl1.Friedewald公式法(影響因素較多)LDL-C=TC-HDL-C-TG/2.2(以mmol/L為單位時)(血清中存在CM、TG>4.56時不適用)2.聚乙烯硫酸鹽沉淀法(不適合自動化)本法并非對LDL-C作直接測定,而是用聚乙烯硫酸(PVS)選擇性沉淀血清中LDL,再以血清TC減去上清液(含HDL與VLDL)膽固醇即得LDL-C值。3.免疫沉淀法試劑成本高,不易臨床推廣4.直接測定法:選擇性抑制法和消除法5.參考方法:超速離心法低密度脂蛋白膽固醇測定1.Friedewald公式法(影響因素較多)2.聚乙烯≤3.12mmol/L,升高:≥3.64mmol/L【參考值】【臨床意義】LDL-C增高是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險因素。由于TC水平同時也受HDL-C水平的影響,所以最好以LDL-C代替TC作為冠心病危險因素指標。≤3.12mmol/L,升高:≥3.64mmol/L【參脂蛋白(α)----Lp(a)測定Lp(α)測定有兩類方法一是以免疫化學原理測定其所含Apo(α),結果以Lp(α)質量表示,也有以Lp(α)顆粒數(shù)mmol/L表示的。另一類方法測定其所含的膽固醇,結果以Lp(α)-C表示。目前大都用免疫學方法測定。脂蛋白(α)----Lp(a)測定Lp(α)測定有兩類

正常人群的Lp(a)水平呈明顯的正偏態(tài)分布,大多在200mg/L以下,平均數(shù)在120~180mg/L,中位數(shù)約100mg/L。Lp(a)水平高于醫(yī)學決定水平(300mg/L),冠心病危險性明顯增高?!緟⒖贾怠俊九R床意義】血清Lp(a)水平是動脈粥樣硬化性疾病的獨立危險因素,與動脈粥樣硬化成正相關。正常人群的Lp(a)水平呈明顯的正偏態(tài)分布,【參考值(1)Apo測定的臨床意義

作為As和心腦血管病的有價值的危

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