目的基因的獲取課件(實(shí)用)

基因工程的基本操作程序?qū)ｎ}１基因工程基因工程的基本操作程序?qū)ｎ}１基因工程1DNA重組技術(shù)的基本工具“分子手術(shù)刀”“分子縫合針”“分子運(yùn)輸車”復(fù)習(xí)——限制酶——DNA連接酶——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體運(yùn)載體DNA重組技術(shù)的基本工具“分子手術(shù)刀”“分子縫合針”“分子運(yùn)2基因工程培育抗蟲棉的簡要過程：普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因與運(yùn)載體DNA拼接導(dǎo)入棉花細(xì)胞棉花植株(有抗蟲特性)(含抗蟲基因)基因工程培育抗蟲棉的簡要過程：普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽3基因工程的基本操作程序主要包括四個基本步驟一目的基因的獲取二基因表達(dá)載體的構(gòu)建三將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞四目的基因的檢測與鑒定基因工程的基本操作程序一目的基因的獲取4------結(jié)構(gòu)基因或調(diào)控因子2.獲取目的基因的常用方法（1）從基因文庫中獲取（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增（3）人工合成一、獲取目的基因

1.目的基因是指或從細(xì)胞中分離與人工合成------結(jié)構(gòu)基因或調(diào)控因子2.獲取目的基因的常用方法（5編碼蛋白質(zhì)，連續(xù)不間斷原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)：非編碼區(qū)①不編碼蛋白質(zhì)。②調(diào)控遺傳信息表達(dá)。編碼蛋白質(zhì)，連續(xù)不間斷原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)：非編碼區(qū)①6原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游

編碼區(qū)下游

與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動子終止子轉(zhuǎn)錄部位為基因編碼區(qū)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下7真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)：外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的

序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)

的序列有調(diào)控作用，上游有RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)(啟動子)。非編碼序列：包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)：外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的8真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游

內(nèi)含子外顯子

轉(zhuǎn)錄部位為基因編碼區(qū)真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位9結(jié)構(gòu)基因外顯子內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄、加工修飾mRNA結(jié)構(gòu)基因外顯子內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄、加工修飾mRNA10非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)外顯子內(nèi)含子原核真核基因的結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)外顯子內(nèi)含子原核真核基因的結(jié)構(gòu)11種類部分基因文庫

（如:cDNA文庫）①.基因文庫的概念和種類(1)從基因文庫中獲取目的基因概念：基因組文庫基因文庫種類部分基因文庫

（如:cDNA文庫）①.基因文庫的概念和12供體細(xì)胞中的DNA許多DNA片段重組質(zhì)粒限制酶分別與運(yùn)載體連接不同的受體細(xì)胞分別導(dǎo)入②構(gòu)建基因文庫基因組文庫供體細(xì)胞中的DNA許多DNA片段重組質(zhì)粒限制酶分別與運(yùn)載體13B反轉(zhuǎn)錄法：②.構(gòu)建基因文庫DNA聚合酶反轉(zhuǎn)錄酶cDNAmRNA雙鏈DNA基因重組重組質(zhì)粒部分基因文庫B反轉(zhuǎn)錄法：②.構(gòu)建基因文庫DNA聚合酶反轉(zhuǎn)錄酶cDNA14基因文庫中不是直接保管相應(yīng)基因，而是保存受體菌，菌中含基因基因文庫中不是直接保管相應(yīng)基因，而是保存受體菌，菌中含基因15依據(jù)目的基因的有關(guān)信息如：根據(jù)基因的核苷酸序列基因在染色體上的位置基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA基因表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性。③如何從基因文庫中得到所需要的基因？依據(jù)目的基因的有關(guān)信息如：根據(jù)基因的核苷酸序列③如何從基16(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因①概念②原理③前提條件基本條件④方式⑤結(jié)果⑥過程模板、原料、酶、能量引物變性、退火、延伸三步曲(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因①概念模板、原料、酶、能量17延伸：加熱至70～75℃以目的基因?yàn)槟０?，合成互補(bǔ)的新DNA鏈變性：加熱至90～95℃雙鏈DNA解鏈成為單鏈DNA退火：冷卻至55~60℃部分引物與模板的單鏈DNA的特定互補(bǔ)部位相配對和結(jié)合變性延伸退火延伸：加熱至70～75℃以目的基因?yàn)槟０?，合成互補(bǔ)的新DNA18模板DNA95℃模板DNA95℃19PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)50℃引物1引物2DNA引物PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件50℃引物1引物2DNA引物20PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)引物1引物2DNA引物72℃Taq酶Taq酶PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件引物1引物2DNA引物72℃T21PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)72℃第1輪結(jié)束第2輪開始PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件72℃第1輪結(jié)束第2輪開始22蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推測推測目的基因化學(xué)合成⑶人工合成目的基因——根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推23目的基因可從基因文庫中獲得，下列有關(guān)基因文庫的描述正確的是A.某生物的全套基因就是一個基因文庫B.將含有某種生物不同的許多DNA片段導(dǎo)入某個生物體內(nèi)，則這個生物就是一個基因文庫C.含有一種生物所有基因的基因文庫叫做基因組文庫D.含有一種生物的一部分基因的基因文庫叫cDNA文庫練習(xí)目的基因可從基因文庫中獲得，下列有關(guān)基因文庫的描述正確的是242.在遺傳工程中，若有一個控制有利性狀的DNA分子片段為ATGTG／TACAC，要使其數(shù)量增多，可用PCR技術(shù)進(jìn)行人工復(fù)制，復(fù)制時應(yīng)給予的條件是①雙鏈DNA分子為模板②ATGTG或TACAC模板鏈③四種脫氧核苷酸④四種核苷酸⑤DNA聚合酶⑥熱穩(wěn)定DNA聚合酶⑦引物⑧溫度變化⑨恒溫A.①③④⑦⑨B.①④⑥⑦⑧C.①⑤⑥⑦⑨D.①③⑥⑦⑧2.在遺傳工程中，若有一個控制有利性狀的25

3.下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是①從基因文庫中獲取目的基因②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因③反轉(zhuǎn)錄法④通過DNA合成儀利用化學(xué)方法人工合成

A.①②③④B.①②③C.②③④ D.②③3.下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是26

4.在基因工程中，把選出的目的基因（共1000個脫氧核苷酸對，其中腺嘌嶺