免疫學實驗供臨床醫(yī)學本科用授課課件

免疫學實驗供臨床醫(yī)學本科用免疫學實驗供臨床醫(yī)學本科用1臨床醫(yī)學本科實驗內(nèi)容及安排臨床醫(yī)學本科實驗內(nèi)容及安排2非臨床醫(yī)學本科實驗內(nèi)容及安排非臨床醫(yī)學本科實驗內(nèi)容及安排3AB型A、B—用途：檢測類風濕因子等。（3）溫度：37℃掌握血清學反應概念、特點。已知Ab：標準血清——抗A、抗B用途：輔助診斷腸熱癥等。廢棄的使用品仍-入垃圾桶內(nèi)。(4)若抗A、抗B均不凝集——O型血掌握血清學反應概念、特點。一、免疫學實驗注意事項(4)加RBC各1滴；B型B抗A光鏡下無形態(tài)，肉眼觀呈澄清透明，如蛋白質、多糖抗原等。臨床上用檢測類風濕因子以輔助診斷類風濕關節(jié)炎。2～5%紅細胞(RBC)懸液；一、免疫學實驗注意事項1.學生進實驗室必須穿白大褂，不得穿拖鞋。2.學生在實驗過程中應遵守實驗操作規(guī)程和實驗室秩序，按要求完成實驗。3.學生應愛護實驗設備、器材等公物，厲行節(jié)約；若損壞實驗用品，要及時報告。4.需回收的玻璃器材如載玻片等，放于指定陶瓷缸內(nèi)；廢棄的使用品仍-入垃圾桶內(nèi)。5.實驗結束，清理好桌面，由班干部安排值日學生做清潔；做完清潔，關好水電、門窗，由帶教老師檢查認可后，值日學生方可離去。AB型A、B4二、免疫實驗課目的1.驗證所學理論知識。2.訓練基本操作技能，培養(yǎng)獨立工作能力。三、要求1.嚴肅認真。2.多想、多看、多做。3.當堂完成實驗報告。二、免疫實驗課目的5四、Ag-Ab反應的相關知識血清學反應——即體外進行的Ag-Ab反應。由于機體絕大部分抗體存在于血清中，故稱之為血清學反應。1.Ag-Ab反應的基本原則（1）用已知抗體檢測未知抗原；（2）用已知抗原檢測未知抗體。四、Ag-Ab反應的相關知識6

2.Ag-Ab反應的特點：（1）特異性（2）可逆性（3）可見性

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3.影響Ag-Ab反應的因素（1）電解質：0.85%NaCl（2）酸堿度：pH6～8（3）溫度：37℃3.影響Ag-Ab反應的因素84.Ag-Ab反應類型：（1）凝集反應（2）沉淀反應（3）補體結合反應（4）中和反應（5）免疫標記技術4大經(jīng)典免疫實驗4.Ag-Ab反應類型：（1）凝集反應4大經(jīng)典免疫實驗9實驗一凝集反應實驗一凝集反應10一、目的要求1.掌握血清學反應概念、特點。2.熟悉凝集反應的概念、常用凝集反應的實驗方法及結果判定。3.了解凝集反應的原理、類型及其用途。一、目的要求11二、實驗內(nèi)容1.直接凝集試驗(玻片法)——ABO血型鑒定(每人做)2.間接凝集試驗——類風濕因子檢測(小組做)二、實驗內(nèi)容12三、凝集反應相關知識

（一）概念

顆粒性抗原(細菌、細胞等)與相應抗體結合，在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集物，稱為凝集反應。顆粒性Ag又稱凝集原相應Ab又稱凝集素三、凝集反應相關知識顆粒性Ag又稱凝集原13(4)加RBC各1滴；血清學反應——即體外進行的Ag-Ab反應。臨床醫(yī)學本科實驗內(nèi)容及安排B型B抗A廢棄的使用品仍-入垃圾桶內(nèi)。直接凝集試驗(玻片法)2～5%紅細胞(RBC)懸液；(1)若抗A凝集，抗B不凝集——A型血光鏡下無形態(tài)，肉眼觀呈澄清透明，如蛋白質、多糖抗原等。實驗一凝集反應(4)加RBC各1滴；(4)加RBC各1滴；（2）用已知抗原檢測未知抗體。用途：輔助診斷腸熱癥等?！ゎw粒性抗原：光鏡下可見，肉眼觀呈渾濁懸液，如細菌、RBC等?！た扇苄钥乖汗忡R下無形態(tài)，肉眼觀呈澄清透明，如蛋白質、多糖抗原等。(4)加RBC各1滴；·顆粒性抗原：·可溶性抗原：14（二）凝集反應類型1.直接凝集反應2.間接凝集反應（二）凝集反應類型1.直接凝集反應2.間接凝集反應151.直接凝集——玻片法已知Ab,測Ag，為定性實驗；用途：鑒定菌種、菌種分型、血型鑒定?！嚬芊ǎㄈ绶蔬_氏反應）已知Ag,測Ab，為半定量實驗；用途：輔助診斷腸熱癥等。

1.直接凝集162.間接凝集反應RBC——間接血凝試驗用途：某些病毒感染和變態(tài)反應患者血清中的相抗體量。乳膠——間接乳膠凝集試驗用途：檢測類風濕因子等。2.間接凝集反應RBC——間接血凝試驗乳膠——間接乳膠凝集試17間接凝集抑制試驗——妊娠試驗（已知）（已知）（已知）（已知）間接凝集抑制試驗——妊娠試驗（已知）（已知）（已知）（已知）18學生應愛護實驗設備、器材等公物，厲行節(jié)約；（2）用已知抗原檢測未知抗體。(3)加血清(Ab)各1滴；(4)若抗A、抗B均不凝集——O型血廢棄的使用品仍-入垃圾桶內(nèi)。2～5%紅細胞(RBC)懸液；(4)加RBC各1滴；O型—抗A、抗B用途：輔助診斷腸熱癥等。一、直接凝集反應（玻片法）——ABO血型鑒定（2）用已知抗原檢測未知抗體。(1)無菌操作采血(無名指尖)于NS試管→形成約廢棄的使用品仍-入垃圾桶內(nèi)。四、Ag-Ab反應的相關知識類風濕關節(jié)炎患者血清中存在：反向間接凝集試驗——某些傳染病和原發(fā)性肝癌的早期診斷。學生應愛護實驗設備、器材等公物，厲行節(jié)約；反向間接凝集試驗—19四、實驗操作內(nèi)容

（一）玻片法——ABO血型鑒定（每人做）用已知血型Ab,測未知血型Ag；為定性實驗。

ABO血型系統(tǒng)血型紅細胞表面的血型Ag血清中的血型Ab

A型A抗B

B型B抗A

AB型A、B—O型—抗A、抗B

四、實驗操作內(nèi)容201.材料已知Ab：標準血清——抗A、抗B待測Ag：紅細胞血型抗原1.材料212.操作步驟

(1)無菌操作采血(無名指尖)于NS試管→形成約2～5%紅細胞(RBC)懸液；

(2)準備1張載波片；

(3)加血清(Ab)各1滴；

(4)加RBC各1滴；

(5)搖晃混勻；

(6)結果判斷(10-15分鐘后)。2.操作步驟(1)無菌操作采血(無名指尖)于NS試管→形22待測Ab：待檢血清中的類風濕因子(3)加血清(Ab)各1滴；——試管法（如肥達氏反應）若損壞實驗用品，要及時報告。了解凝集反應的原理、類型及其用途。(4)若抗A、抗B均不凝集——O型血學生應愛護實驗設備、器材等公物，厲行節(jié)約；已知Ab：標準血清——抗A、抗B一、直接凝集反應（玻片法）——ABO血型鑒定用途：輔助診斷腸熱癥等。（1）電解質：0.乳膠——間接乳膠凝集試驗學生進實驗室必須穿白大褂，不得穿拖鞋。直接凝集試驗(玻片法)陰性者現(xiàn)象：呈乳白色均勻混濁。3.結果判斷凝集者：出現(xiàn)紅色顆粒狀或塊狀凝集物；不凝集者：呈紅色均勻混濁。(1)若抗A凝集，抗B不凝集——A型血(2)若抗A不凝集，抗B凝集——B型血(3)若抗A、抗B均凝集——AB型血(4)若抗A、抗B均不凝集——O型血在白背景上觀察凝集不凝集待測Ab：待檢血清中的類風濕因子3.結果判斷在白背景上觀23

4.注意事項

(1)適度的RBC懸液濃度，約2-5%；

(2)抗A和抗B不能混用；

(3)在白色背景上觀察效果較好。4.注意事項24（二）間接乳膠凝集試驗—類風濕因子檢測類風濕關節(jié)炎患者血清中存在：變性IgG—Ag抗變性IgG抗體(類風濕因子)—Ab

臨床上用檢測類風濕因子以輔助診斷類風濕關節(jié)炎。（二）間接乳膠凝集試驗251.材料已知Ag：致敏乳膠(乳膠顆粒表面有變性IgG)待測Ab：待檢血清中的類風濕因子待測Ab已知Ag1.材料待測Ab已知Ag26

2.檢測步驟：(1)取黑底紙片三片；

(2)加待測血清、陽性和陰性對照血清各1滴；(3)各加1滴致敏乳膠,用牙簽混勻；(4)5分鐘后觀察結果，以黑背景觀察為佳。陽性者現(xiàn)象：呈乳白色細沙狀（乳膠凝集）；陰性者現(xiàn)象：呈乳白色均勻混濁。2.檢測步驟：陽性者現(xiàn)象：呈乳白色細沙狀（乳膠凝集）；27