實驗報告血紅蛋白

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實驗報告

課程名稱：生化實驗B實驗日期：

班級：姓名學號：

血紅蛋白凝膠過濾

一、背景及目的

血紅蛋白是高等生物體內(nèi)負責運載氧的一種蛋白質(zhì)。存在于脊椎動物、某些無脊椎動物血液和豆科植物根瘤中。人體內(nèi)的血紅蛋白由兩個α亞基和兩個β亞基組成。每個亞基均成球狀，內(nèi)部有一個血紅素。血紅素上的亞鐵離子可以可逆的與氧分子結(jié)合，起到運輸氧氣的作用。當攜帶氧氣時，血紅蛋白呈鮮紅色，無氧時為暗紅色。

凝膠過濾法又稱凝膠排阻層析或分子篩層析，主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和形狀，即蛋白質(zhì)的質(zhì)量進行分離和純化。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質(zhì)，使蛋白質(zhì)混合物中的物質(zhì)按分子大小的不同進行分離。一般是大分子先流出來，小分子后流出來。凝膠過濾的突出優(yōu)點是層析所用的凝膠屬于惰性載體，不帶電荷，吸附力弱，操作條件比較溫和，可在相當廣的溫度范圍下進行，不需要有機溶劑，并且對分離成分理化性質(zhì)的保持有獨到之處。對于高分子物質(zhì)有很好的分離效果。

影響分離效果的因素主要有以下幾點：1.基質(zhì)的(本文來自：小草范文網(wǎng):實驗報告血紅蛋白)顆粒大小、均勻度

2.篩孔直徑和床體積的大小3.洗脫液的流速4.樣品的種類等，5.緩沖液的pH

6.而最直接的影響是Kav值的差異性，Kav值差異性大，分離效果好；Kav值差異性小，則分離效果很差，或根本不能分開。

影響凝膠過濾的因素主要有：

1、層析柱的選擇：長的層析柱分辨率要比短的高，但層析柱長度不能過長。

2、加樣量：加樣過多，會造成洗脫峰的重疊；加樣過少，提純后各組分量少、濃度較低。

3、凝膠柱的鑒定：凝膠柱填裝后用肉眼觀察應均勻、無紋路、無氣泡。

4、洗脫速度：洗脫速度應保持適中。

目前凝膠過濾技術(shù)的應用主要是以下幾點：

1、脫鹽2、用于分離提純3、測定高分子物質(zhì)的分子量4、高分子溶液的濃縮5、蛋白質(zhì)的復性

二、實驗原理

層析法是基于不同物質(zhì)在流動相和固定相之間的分配系數(shù)不同而將混合組分分離的技術(shù)。當流動相(液體或氣體)流經(jīng)固定相(多孔的固體或覆蓋在固體支持物上的液體)時，各組分沿固定相移動的速度不同而分離。能用于微量樣品的分析和大量樣品的純化制備。按操作形式可以劃分為：柱層析、紙層析、薄層層析、高效液相層析等。按流動相與固定相的不同劃分：氣相層析、液相層析。按層析的機理可以劃分為：吸附層析、分配層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、親和層析等。2

凝膠過濾是一種按分子量大小分離物質(zhì)的層析方法。該方法是把樣品加到充滿著凝膠顆粒的層析柱中，然后用緩沖液洗脫，大分子不能進入凝膠顆粒的靜止相中，只能在凝膠顆粒間隨流動相移動，因而可以被較快洗出，而小分子則能夠自由進出凝膠顆粒，并很快在流動相和靜止相之間形成動態(tài)平衡，因此需要花費較長時間流經(jīng)柱床，從而使不同大小的分子得到分離。

本實驗利用凝膠過濾的特點，先向?qū)游鲋屑尤隖eSO4溶液，形成一個還原帶，然后加入血紅蛋白樣品（血紅蛋白與高鐵氰化鉀的混合液）。由于血紅蛋白分子量大，在凝膠床中流速快，當其流經(jīng)還原帶時，褐色的高鐵血紅蛋白立即被還原為紫紅色的亞鐵血紅蛋白。亞鐵血紅蛋白繼續(xù)下移，與緩沖液溶解的O2結(jié)合，形成鮮紅色的氧合血紅蛋白。鐵氰化鉀是小分子量化合物，呈黃色帶遠遠地落在后邊。這樣，就可以形1

21百度百科凝膠過濾層析/81744.htm百度百科層析/15375.htm#2

象直觀地觀察到凝膠過濾的分離效果。

本實驗操作簡便，直觀性強，趣味性濃，通過肉眼就可以檢驗分離效果。

三、儀器與試劑、實驗材料

1、儀器

⑴層析柱⑵恒流泵（HL-2恒流泵，上海滬西分析儀器廠）⑶膠頭滴管

⑷50ml燒杯3個⑸玻璃棒

2、試劑

⑴磷酸緩沖液（老師已配好）

⑵還原層試劑（1:1的40nMFeSO4和80mMNa2H2EDTA,0.2MNaHPO4,,老師提供）

⑶SephadexG-25

3、實驗材料

血紅蛋白樣品（1ml抗凝血加10mlpH7的20mM磷酸緩沖液，再加入固體鐵氰化鉀，濃度達5mg/ml，老師提供）

四、實驗步驟

1、凝膠溶脹：老師已準備好

2、檢驗：旋上層析柱下端柱帽，加少量去離子水，看水是否順利流出，如果流速過緩，用洗耳球自上端吹氣，使其暢通。上下端倒置，按上述步驟檢驗。

3、裝柱及平衡：取下上端柱帽，裝入5cm左右的洗脫液，溶脹好的凝膠邊攪拌邊倒入柱中，同時開始洗脫，使柱中的凝膠一直處在溶液中，裝柱長15cm左右。溶液液面應該高于凝膠面3-5cm，防止凝膠因脫水而毀柱。實驗中沉降完成后，液面高于凝膠面4cm左右。此時觀察柱面，上下均一，無界面，裂隙。旋上上端柱帽，細管管接上磷酸鹽緩沖液，下端柱帽的細管接恒流泵，開始平衡洗脫。過程中調(diào)節(jié)好流速，6滴/分。平衡過程20分鐘。

4、上樣：事先剪好略小于層析柱內(nèi)徑的濾紙片，打開上柱帽，將濾紙片放入層析柱中，使其自然飄落覆蓋在凝膠面上，防止上樣時液滴對床面的沖擊。確定流速后準備上樣。利用恒流泵排氣鍵加速洗脫，直至洗脫液面與膠床液面相切，停止洗脫。用滴管加0.7ml還原試劑，小心注入膠床液面中央。開始洗脫，待液面與凝膠床面相齊時，關(guān)泵。上1ml磷酸緩沖液,開啟泵,至液面與膠面相齊。關(guān)泵。上0.7ml血紅蛋白樣，開泵，至液面與膠面相齊，關(guān)泵。上1ml磷酸緩沖液,開啟泵,至液面與膠面相齊。關(guān)泵。上5ml的磷酸緩沖液。接上上端柱帽與磷酸緩沖液，連續(xù)洗脫，觀察現(xiàn)象，并用燒杯分別收集血紅蛋白樣品與鐵氰化鉀。

5、待黃色液體全部流出，開排氣鍵，加速洗脫10分鐘

五、結(jié)果

1、實驗現(xiàn)象

還原層上樣時，溶液呈黃色，當還原液面與凝膠床面相切時，床面以下兩厘米左右呈現(xiàn)黃色。

加上褐色的血紅蛋白樣品時，開啟泵。此時褐色下滲，在未加入緩沖液之前，褐色帶下端已經(jīng)開始變?yōu)榘导t色。層析柱上的色帶由上至下依次為黃色，褐色，暗紅色。

當上5ml緩沖液并開始洗脫時候，褐色全部變?yōu)榘导t色，紅色帶下端顏色變淺。此時即為兩個色帶，上端黃色下端暗紅。

開始洗脫七分鐘時，暗紅帶下端開始變鮮紅色，隨時間推移，暗紅帶全部轉(zhuǎn)變?yōu)轷r紅色。

過程中，紅色帶在下，黃色帶在上。兩色帶一直下移。色帶邊界不是很清晰，而且與其他組的同學相比，鮮紅色較淺。

隨色帶的下移，兩色帶間距變大。

當開始流出紅色液體時，用小燒杯接收，待紅色全部流出用了30分鐘。

當開始有黃色液滴流出時，用小燒杯接收，黃色液體全部流出用了7分鐘。

2、現(xiàn)象解釋

血紅蛋白樣品中的鐵離子最初為三價，顯褐色。當經(jīng)過還原帶時，三價鐵被還原成二價，生成暗紅色的還原型血紅蛋白。還原型血紅蛋白繼續(xù)下移，與緩沖液中的氧氣結(jié)合生成鮮紅色的氧合血紅蛋白。

血紅蛋白分子量很大，分子直徑大，不能進入凝膠孔穴內(nèi)部，只能在凝膠顆粒間移動，所以洗脫速度較快。而鐵氰化鉀分子量小，分子直徑小，能夠進入凝膠顆?？籽▋?nèi)部，故洗脫速度較慢。

3、凝膠過濾效果

相比于其他組的實驗現(xiàn)象，我們組的效果不是太好。剛開始的時候，兩個色帶分離效果不好，沒有形成比較清晰的界限，但在最后終于是分開了，而且隨著時間的推移，兩色帶間距拉大。理論上講，兩色帶的間距應該保持不變，間距變大的原因，可能是膠床面上的濾紙片沒有放平，而且床柱的內(nèi)部有裂隙，在外部無法觀察到。

最后變成的鮮紅色帶相對顏色較淺，分析原因，是因為在加血紅蛋白樣品時沒有震動試管，而血紅蛋白分子又容易沉降，導致加入的血紅蛋白樣品較少。

六、思考題

總結(jié)分析柱層析技術(shù)操作的關(guān)鍵步驟和操作要領(lǐng)和技巧。

1、裝柱。如果裝柱不均勻（沒有填嚴實），使得柱子出現(xiàn)太多氣泡，導致分離效果不好。濕法裝柱比干

法裝柱效果要好。

這就要求在濕裝時，要邊攪拌邊加入填柱料（硅膠或凝膠）。而干法裝柱時則要注意密實程度。填完后應該從側(cè)面敲打，使床柱更密實。

要求柱面上下均一，無界面，裂隙。

裝柱后加濾紙片的時候應使其自然飄落在凝膠液面上。

2、恒流泵流速。根據(jù)實驗要求的不同要選擇不同的流速。像本次試驗要求流速6滴/分，如果過快的話，

分子小的物質(zhì)來不及擴散，隨分子大的物質(zhì)一起被洗脫下來，達不到分離目的。如果過慢，則耗

時太長。

3、上樣。上樣的時候每次加樣之前一定要停止洗脫。否則很可能造成液面到達膠面以下而毀柱。另外加

樣的時候要用滴管把液體送到接近濾紙的地方再輕輕滴加，防止液體沖擊對膠面造成影響。

七、參考文獻

1、百度百科凝膠過濾層析

2、百度百科層析/15375.htm#2

3、趙武玲主編，《基礎生物化學》，中國農(nóng)業(yè)大學出版社，XX年9月第一版

4、有參考胡老師課件

八、實驗小結(jié)

這次實驗差點就失敗了，應該是裝柱的時候出了點問題，而在取血紅蛋白樣品的時候也沒有提前搖勻。實驗前應該多考慮，多思考，并在實驗中注意團隊合作。

老師在實驗前講了好多道理，給了我們很大的啟發(fā)。我喜歡這樣不單單教授理論知識的老師。

在實驗之前老師提出了一個問題，血紅蛋白中的亞鐵離子為什么不會被氧氣氧化。查了好多資料，可惜看不太懂，無法理解，還是自己的基礎知識沒有學充分啊。

篇二：血紅蛋白測定

血紅蛋白測定

【實驗目的】

掌握血紅蛋白測定的臨床意義

熟悉毛細管采血過程，分光光度計的操作

了解血紅蛋白測定的注意事項

【實驗原理】

血液在血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中表面活性劑的作用下溶血后，血紅蛋白（除SHb外）被高鐵氰

-化鉀（K3Fe（CN）6）氧化為高鐵血紅蛋白（Hi），Hi再與氰化鉀（KCN）中的氰離子（CN）

結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）。HiCN最大吸收波峰在540nm,最小吸收谷為504nm?？捎梅止夤舛扔嬛苯訙y定或用HiCN標準液比色法測定。即可求出待測血紅蛋白濃度。此法稱HiCN法。

【試劑】

血紅蛋白轉(zhuǎn)化液（文齊氏液，Vankampen-Zijlstra’液）：

-氰化鉀50mg，提供氰離子（CN）

高鐵氰化鉀200mg，氧化劑

無水磷酸二氫鉀140mg，緩沖液成分，維持溶液的pH值，

【實驗操作】

（1）取一支試管加入5.0mlHiCN試劑，取全血20μl，加入到5.0mlHiCN試劑中，混勻后靜置5min，使血紅蛋白轉(zhuǎn)化完全。

0（2）分光光度計，波長540nm，比色杯光徑1.0cm，杯溫20-30C，以蒸餾水或空白

轉(zhuǎn)化液調(diào)零，測定樣品吸光度值（A）。

【計算】

根據(jù)比爾定律，濃度與吸光度成正比，所以實際操作中我們還可以直接用待測液的吸光度A測/標準液的吸光度A標＝待測液的濃度C測/標準液的濃度C標來直接計算待測液的濃度。

【參考值】

男性：120~160g／L，女性：110~150g／L，新生兒：170~200g／L。

【臨床意義】

照書上寫

圖1紅細胞和血紅蛋白的生理變化曲線

紅細胞計數(shù)醫(yī)學決定水平：高于6.8×1012/L，應采取相應治療措施；低于3.5×1012/L可診斷貧血；低于1.5×1012/L應考慮輸血。

篇三：診斷學實驗報告

實驗診斷學實驗報告

紅細胞計數(shù)試驗

實驗目的：通過紅細胞計數(shù)實驗

1、掌握紅細胞計數(shù)方原理、方法及注意事項。

2、掌握血細胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)試驗器材：血細胞計數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、試管、血紅蛋白吸管、生理鹽水實驗原理：一定量的血液經(jīng)一定量等滲性稀釋液稀釋后，充入血細胞計數(shù)池中顯微鏡下計數(shù)一定容積內(nèi)的細胞，再換算成每升標本的細胞數(shù)報告。操作步驟：1、取紅細胞稀

釋液2.0ml毫升，放入一小試管內(nèi)。

2、用血紅蛋白吸管吸血至l0ul處。

3、擦去管尖外部余血將血液迅速輕輕吹入盛有紅細胞稀釋液的試管內(nèi)，上清液嗽洗吸

管2-3次，立即搖勻。

4、將計數(shù)池與蓋玻片用軟布料擦凈，將蓋玻片覆蓋于計數(shù)池上。

5、用吸管吸取混勻的紅細胞懸液，充入計數(shù)池中。

6、待2—3分鐘，讓紅細胞完全下沉后，將計數(shù)板平放在顯微鏡臺上，用低倍鏡觀察，

如紅細胞分布均勻即可換高倍鏡進行計數(shù)。紅細胞計數(shù)的區(qū)域：中心大方格中的5個中方格(正中一個和四角各一個)。計數(shù)原則：

數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的計數(shù)原則即凡壓在中方格邊線(雙線)上的紅細胞，只計上側(cè)與左

側(cè)線上的細胞，而壓在下側(cè)與右側(cè)線上者不計入。計算：紅細胞數(shù)/l=5個中方格內(nèi)紅細胞數(shù)×5×10×201×106或

紅細胞數(shù)/l=5個中方格內(nèi)紅細胞數(shù)÷100×1012式中×55個中方格換算成1個大方格×101個大方格容積為0.1ul，換算成1.0ul?！?01血液的稀釋倍數(shù)×106由u1換算成l

數(shù)據(jù)處理：rbc:×l0/l

12參考值男:(4～5.5)×10/l12女：（3.5～5）×10/l

12新生兒：（6～7）×10/l12答案不唯一，言之有理即可注意事項：1、吸管、試管要注意清潔、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有

血

凝塊應重新采血。

2充液前，紅細胞復液要充分搖勻，紅細胞懸液注入計數(shù)池內(nèi)要求分布均勻，不可有氣

泡，亦不可有多余液體外溢。

3、中方格內(nèi)紅細胞分布應均勻，健康成人每中方格紅細胞數(shù)約為80—100個，各中方

格內(nèi)之紅細胞相近，如懸殊過大(超過10個細胞以上的)應重混勻再充填。實驗診斷學實驗

報告

血紅蛋白測定

實驗目的：通過血紅蛋白測定

1、氰化高鐵血紅蛋白比色法原理及技術(shù)。

2、掌握紅血紅蛋白測定的原理、方法及注意事項。試驗儀器：試管、微量吸管、分光光度計實驗原理：血紅蛋白中的亞鐵離子（fe2+）被高鐵氰化鉀氧化成高離子（fe3+），血紅

蛋白轉(zhuǎn)化成高鐵血紅蛋白，高鐵血紅蛋白與氰離子（cn-）結(jié)合，生成穩(wěn)定的氰化高鐵血紅

蛋白。用光電比色計在540nm波長比色。從hicn參考液制作的標準曲線上讀取血紅蛋白克數(shù)。操作步驟：1、取試劑5毫升加入血液20ul混勻置5分鐘

2、用721光電比色儀，540nm波長，試劑為空白調(diào)0點比色，讀取光密度，查標準曲

線得結(jié)果。

計算：血紅蛋白（g/l）=測定管吸光度×367.7數(shù)據(jù)處理：答案不唯一，言之有理即可hb：g／l參考值男0.40～0.54l/l女:0.37～0.48l/l

兒童：0.35～0.49l/l新生兒：0.50～0.60l/l注意事項：1、做血紅蛋白測定，白細胞計數(shù)和分類計數(shù)，在采血時應先做血膜再做紅

細胞，然后做白細胞，血紅蛋白檢驗，避免紅細胞破壞。篇二：實驗診斷學實驗報告(牡丹江

醫(yī)學院)

實驗診斷學試驗操作報告目錄

一、紅細胞計數(shù)試驗

二、血紅蛋白測定

三、白細胞計數(shù)

四、白細胞分類計數(shù)

五、尿比重

六、尿沉渣定性檢查

七、尿蛋白檢查磺基水楊酸法

八、尿干化學分析

九、尿葡萄糖定性檢查（班氏法）

十、abo血型測定紅細胞計數(shù)試驗

實驗目的：通過紅細胞計數(shù)實驗

1、掌握紅細胞計數(shù)方原理、方法及注意事項。

2、掌握血細胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)試驗器材：血細胞計數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、試管、血紅蛋白吸管、生理鹽水

實驗原理：一定量的血液經(jīng)一定量等滲性稀釋液稀釋后，充入血細胞計數(shù)池中顯微鏡

下

計數(shù)一定容積內(nèi)的細胞，再換算成每升標本的細胞數(shù)報告。操作步驟：1、取紅細胞稀釋液2.0ml毫升，放入一小試管內(nèi)。

2、用血紅蛋白吸管吸血至l0ul處。

3、擦去管尖外部余血將血液迅速輕輕吹入盛有紅細胞稀釋液的試管內(nèi)，上清液嗽洗吸

管2-3次，立即搖勻。

4、將計數(shù)池與蓋玻片用軟布料擦凈，將蓋玻片覆蓋于計數(shù)池上。

5、用吸管吸取混勻的紅細胞懸液，充入計數(shù)池中。

6、待2—3分鐘，讓紅細胞完全下沉后，將計數(shù)板平放在顯微鏡臺上，用低倍鏡觀察，

如紅細胞分布均勻即可換高倍鏡進行計數(shù)。

紅細胞計數(shù)的區(qū)域：中心大方格中的5個中方格(正中一個和四角各一個)。計數(shù)原則：數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的計數(shù)原則即凡壓在中方格邊線(雙線)上的紅

細胞，只計上側(cè)與左側(cè)線上的細胞，而壓在下側(cè)與右側(cè)線上者不計入。計算：紅細胞數(shù)/l=5個中方格內(nèi)紅細胞數(shù)×5×10×201×106或

紅細胞數(shù)/l=5個中方格內(nèi)紅細胞數(shù)÷100×1012式中×55個中方格換算成1個大方格×101個大方格容積為0.1ul，換算成1.0ul?！?01血液的稀釋倍數(shù)×106由u1換算成l

數(shù)據(jù)處理：rbc:×l0/l12參考值男:(4～5.5)×10/l12女：（3.5～5）×10/l12新生兒：（6～7）×10/l12答案不唯一，言之有理即可注意事項：1、吸管、試管要注意清潔、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有

血

凝塊應重新采血。

2充液前，紅細胞復液要充分搖勻，紅細胞懸液注入計數(shù)池內(nèi)要求分布均勻，不可有氣泡，亦不可有多余液體外溢。

3、中方格內(nèi)紅細胞分布應均勻，健康成人每中方格紅細胞數(shù)約為80—100個，各中方格內(nèi)之紅細胞相近，如懸殊過大(超過10個細胞以上的)應重混勻再充填。血紅蛋白測定

實驗目的：通過血紅蛋白測定

1、氰化高鐵血紅蛋白比色法原理及技術(shù)。

2、掌握紅血紅蛋白測定的原理、方法及注意事項。試驗儀器：試管、微量吸管、分光光度計實驗原理：血紅蛋白中的亞鐵離子（fe2+）被高鐵氰化鉀氧化成高離子（fe3+），血

紅蛋

白轉(zhuǎn)化成高鐵血紅蛋白，高鐵血紅蛋白與氰離子（cn-）結(jié)合，生成穩(wěn)定的氰化高鐵血紅

蛋白。用光電比色計在540nm波長比色。從hicn參考液制作的標準曲線上讀取血紅蛋白克數(shù)。操作步驟：1、取試劑5毫升加入血液20ul混勻置5分鐘

2、用721光電比色儀，540nm波長，試劑為空白調(diào)0點比色，讀取光密度，查標準曲線得結(jié)果。計算：血紅蛋白（g/l）=測定管吸光度×367.7數(shù)據(jù)處理：答案不唯一，言之有理即可hb：g／l參考值男0.40～0.54l/l女:0.37～0.48l/l

兒童：0.35～0.49l/l

新生兒：0.50～0.60l/l注意事項：1、做血紅蛋白測定，白細胞計數(shù)和分類計數(shù)，在采血時應先做血膜再做紅

細胞，然后做白細胞，血紅蛋白檢驗，避免紅細胞破壞。白細胞計數(shù)

實驗目的：掌握白細胞計數(shù)顯微鏡計數(shù)法原理及技術(shù)。

實驗器材：顯微鏡、微量吸管、計數(shù)板、蓋玻片、白細胞稀釋液。實驗原理：用稀醋酸液將血液稀釋并破壞紅細胞，混勻后充入計數(shù)池中，于顯微鏡下

計

數(shù)一定體積內(nèi)的白細胞數(shù)，經(jīng)過換算求得每升血液內(nèi)的白細胞數(shù)。操作步驟：1、取試管1支，加白細胞稀釋液0.38ml。

2、用清潔干燥的微量吸管準確吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。

3、擦去管尖外部余血、輕輕注入稀釋液底部，再吸取上清液清洗3次，搖勻。

4、將計數(shù)板與蓋玻片用軟布擦凈，將蓋玻片覆蓋于計數(shù)池上，再用微量吸管吸取懸液，充入計數(shù)池與蓋玻片間的細縫隙中，靜止2-3分鐘，待白細胞下

沉。

5、用低倍鏡計數(shù)四角的四個大方格內(nèi)的白細胞數(shù)。計算：(四個大方格內(nèi)wbc數(shù)/4)×10×20×106=wbc數(shù)/20×109/升數(shù)據(jù)處理：答案不唯一，言之有理即可正常參考值：

成人：（4-10）×109/升新生兒：（15-20）×109/升

6月-2歲：（11-12）×109/升白細胞分類計數(shù)

實驗目的：掌握白細胞分類計數(shù)、原理及技術(shù)。實驗器材：顯微鏡、染色缸和架，載玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。實驗原理：把血液制成細胞分布均勻的薄膜涂片，經(jīng)wright染色后，顯微鏡下觀察，

根

據(jù)白細胞形態(tài)特點逐個分類計數(shù)。得出各種白細胞的相對比值，并注意觀察其形態(tài)和質(zhì)

量的變化。

操作步驟：1、取末梢血1滴。置于載玻片的一端，以邊緣平滑的推片制成血涂片，空氣干燥。

2、用蠟筆在血膜兩端劃線，以防染液溢出，然后將血片放于染色架上。

3、先加瑞氏染液數(shù)滴，使其覆蓋整個血膜，固定染色細胞0.5-1分鐘。

4、按1：1或1：2加緩沖液與染料混勻，染色10分鐘左右。

5、在血膜染10分鐘后，用緩沖液或接近中性的水沖去洗液，待自然干燥或濾紙吸干后，用鏡油觀察。計算：1、先用低倍鏡觀察血片染色情況，白細胞多少和細胞分布情況。

2、選擇血涂片的體尾交界處，染色良好的區(qū)域，在油鏡下計數(shù)100-200個白細胞，按其形態(tài)特征進行分類計數(shù)，求出各自白細胞所占數(shù)值（百分率）。

3、白細胞分類計數(shù)方法很多，常用的有，完全記錄法、半記錄法、分類計數(shù)器計數(shù)法。

4、每個病人應分類白細胞數(shù)，視白細胞總數(shù)多少而定。

5、各類細胞所占的百分率乘以白細胞總數(shù)/升，既得每升血液中各類白細胞的度。數(shù)據(jù)處理：

答案不唯一，言之有理即可篇三：診斷學實驗總結(jié)(官方版)實驗診斷學總結(jié)

第一章總論

概念

[1]臨床檢驗：以離體的血液、體液、排泄物等為標本，通過試劑、儀器等進行檢測，

并對檢測的過

程進行全面的質(zhì)量控制，最終得到可靠的檢測結(jié)果或數(shù)據(jù)。

[2]實驗診斷：通過臨床檢驗得到的信息為預防、診斷、治療和預后評價所作的臨床醫(yī)

學活動。

[3]床邊檢驗：在病人醫(yī)療現(xiàn)