細菌的分離培養(yǎng)與鑒定-課件

細菌的分離培養(yǎng)與鑒定一培養(yǎng)基的制備 二消毒與滅菌三細菌的接種和培養(yǎng)四細菌的生化反應(yīng)

細菌的分離培養(yǎng)與鑒定一培養(yǎng)基的制備 1一培養(yǎng)基的制備步驟：1稱量藥品2溶解3調(diào)節(jié)PH5過濾分裝6包扎標記7滅菌一培養(yǎng)基的制備步驟：2二消毒滅菌法物理滅菌法：干熱滅菌法：150-170℃維持1-2h；

高壓蒸汽滅菌法121℃（101.53kPa）15-30min；

其他：過濾除菌法、紫外線滅菌法?；瘜W(xué)滅菌法：主要使用一些化學(xué)消毒劑進行，如：75％酒精、1％的新潔爾滅等。

二消毒滅菌法物理滅菌法：3三細菌的分離、接種與培養(yǎng)細菌的分離方法：

稀釋法、平板分區(qū)劃線法。細菌的接種方法：斜面培養(yǎng)基接種法、液體培養(yǎng)基接種法、穿刺接種法、傾注平板法、平板涂布法。細菌的培養(yǎng)方法：需氧培養(yǎng)法CO2培養(yǎng)法厭氧培養(yǎng)法三細菌的分離、接種與培養(yǎng)細菌的分離方法：43.1細菌的分離培養(yǎng)方法連續(xù)稀釋法平板分區(qū)劃線

分區(qū)劃線分離法：此法常用于含菌量較多的標本如混合細菌的分離。

連續(xù)劃線分離法：此法常用于含菌量不多的標本或培養(yǎng)物中的細菌分離培養(yǎng)

3.1細菌的分離培養(yǎng)方法連續(xù)稀釋法5細菌的分離培養(yǎng)與鑒定-課件61區(qū)2區(qū)3區(qū)4區(qū)1234平板分區(qū)劃線法（學(xué)生操作）1區(qū)2區(qū)3區(qū)4區(qū)1234平板分區(qū)劃線法（學(xué)生操作）7注意事項劃完前一區(qū)后，需重新灼燒接種環(huán)后再進行下一區(qū)的劃線。相鄰兩區(qū)要有重疊區(qū)域。結(jié)果觀察：觀察各區(qū)的生長情況，并看是否有單一菌落長出；菌落的形態(tài)、顏色、大小、邊緣、透明度都需記錄。注意事項劃完前一區(qū)后，需重新灼燒接種環(huán)后再進行下一區(qū)的劃線。8平皿送37℃溫箱培養(yǎng)24小時結(jié)果(要求)兩種單個菌落分四區(qū)無雜菌瓊脂不破平皿送37℃溫箱培養(yǎng)24小時結(jié)果(要求)9℃℃103.2細菌的接種斜面接種法該法主要用于單個菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細菌的某些特性。液體接種法多用于一些液體生化試驗管或發(fā)酵的接種。穿刺接種法此法主要用于半固體培養(yǎng)基、明膠及雙糖管的接種。3.2細菌的接種斜面接種法11(1)斜面瓊脂培養(yǎng)基接種法（2人一組）大腸埃希菌/枯草芽孢桿菌/葡萄球菌送培養(yǎng)24小時(2支/組)一組37℃溫箱一組60℃溫箱一組4℃冰箱用接種環(huán)挑菌后在斜面表面劃折線(1)斜面瓊脂培養(yǎng)基接種法（2人一組）送培養(yǎng)24小時(2支12(2)液體培養(yǎng)基接種法（2人一組）1.菌種(任選一種）大腸埃希菌/枯草芽孢桿菌/葡萄球菌2.接種每一菌種分別接種pH5.0/7.2/9.0的營養(yǎng)肉湯各一支3.送37℃溫箱培養(yǎng)24小時(2)液體培養(yǎng)基接種法（2人一組）1.菌種(任選一種）13液體培養(yǎng)基沉淀生長混濁生長表面生長液體培養(yǎng)基沉淀生長混濁生長表面生長14(3)瓊脂半固體接種法（1人一份）1.菌種大腸埃希菌/枯草芽孢桿菌/葡萄球菌2.接種用接種針穿刺接種3.送37℃溫箱培養(yǎng)24小時(3)瓊脂半固體接種法（1人一份）1.菌種153.半固體培養(yǎng)法－觀察細菌是否有動力1、3：有動力：呈云霧狀2：無動力：沿穿刺線生長，并變粗3.半固體培養(yǎng)法－觀察細菌是否有動力1、3：有動力：呈16四、細菌的生化反應(yīng)1糖發(fā)酵試驗(Fermentationofsugars)2IMViC試驗靛基質(zhì)產(chǎn)生試驗（吲哚試驗）甲基紅試驗V-P試驗枸櫞酸鹽利用試驗3硫化氫產(chǎn)生試驗4尿素分解試驗

四、細菌的生化反應(yīng)1糖發(fā)酵試驗(Fermentation17糖發(fā)酵試驗

不同細菌分解糖類的能力和代謝產(chǎn)物不同。例如大腸桿菌能發(fā)酵葡萄糖和乳糖；而痢疾桿菌可發(fā)酵葡萄糖，但不能發(fā)酵乳糖。即使兩種細菌均可發(fā)酵同一糖類，其結(jié)果也不盡相同，如大腸桿菌有甲酸脫氫酶，能將葡萄糖發(fā)酵生成的甲酸進一步分解為CO2和H2，故產(chǎn)酸并產(chǎn)氣；而痢疾桿菌缺乏該酶，發(fā)酵葡萄糖僅產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。

糖發(fā)酵試驗18吲哚（靛基質(zhì)）試驗(Productionofindole)

有些細菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而產(chǎn)生靛基質(zhì)，靛基質(zhì)無色，不能直接查見，此時滴加數(shù)滴吲哚試劑于培養(yǎng)基的液面上，上層呈玫瑰紅色者為陽性，仍呈黃色者為陰性。吲哚（靛基質(zhì)）試驗(Productionofindole19甲基紅（methylred）試驗

將細菌接種于葡萄糖蛋白胨水中，37℃培養(yǎng)48h后，再向其中加入甲基紅試劑3滴。大腸桿菌等細菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，但丙酮酸不被縮合成乙酰甲基甲醇，而轉(zhuǎn)化成甲酸、乙酸等酸性物質(zhì)，培養(yǎng)基中酸多，pH值低，故呈紅色，為陽性。而產(chǎn)氣桿菌將丙酮酸縮合成乙酰甲基甲醇，培養(yǎng)基中酸少，pH值高，故呈黃色，為陰性。甲基紅（methylred）試驗20VP（Voges-Proskauer）試驗

大腸桿菌和產(chǎn)氣大腸桿菌均能發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，兩者不能區(qū)別。但產(chǎn)氣桿菌能使丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲醇，后者在堿性溶液中被氧化生成二乙酰，二乙酰與含胍基化合物反應(yīng)生成紅色化合物，是為VP試驗陽性。大腸桿菌不能生成乙酰甲基甲醇，故VP試驗陰性，

VP（Voges-Proskauer）試驗21枸櫞酸鹽利用試驗(Utilizationofcitrate)

將細菌接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)48h。產(chǎn)氣桿菌等細菌能利用枸櫞酸鹽作為碳源，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，培養(yǎng)基中的指示劑（溴麝香草酚藍）由淡綠色轉(zhuǎn)為深藍色，為枸櫞酸鹽利用試驗陽性。大腸桿菌則不能分解枸櫞酸鹽，培養(yǎng)基顏色不變，為陰性。枸櫞酸鹽利用試驗(Utilizationofcitrat22硫化氫產(chǎn)生試驗(ProductionofH2S)

將細菌穿刺接種于醋酸鉛培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。有些細菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸，生成硫化氫，穿刺部位呈黑褐色，是為反應(yīng)陽性。培養(yǎng)基顏色無變化，則為陰性。

硫化氫產(chǎn)生試驗(ProductionofH2S)23尿素分解試驗(Splittingofurea)

將細菌接種于尿素培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)18～24h。變形桿菌能迅速(2～4h)分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基變堿而呈紫紅色，是為陽性反應(yīng)。尿素分解試驗(Splittingofurea)