抗菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

抗菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程腸桿菌科紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程……235假單胞菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程……238不動(dòng)桿菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程…………………240嗜麥芽窄食單胞菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程…………242洋蔥伯克霍爾德菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程…………244葡萄球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程…………………246腸球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程……249鏈球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程……251超廣譜β-內(nèi)酰胺酶測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程………………253深部真菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程…………………256XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)腸桿菌科紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：XXX-JY-CZ-WSW-05111版本：20140601生效日期：20140615共3頁(yè)1．目的規(guī)范腸桿菌科細(xì)菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保藥敏結(jié)果的準(zhǔn)確。2．適用范圍本操作規(guī)程適用于腸桿菌科細(xì)菌。3．選藥原則在本規(guī)程所列受試抗菌藥物主要根據(jù)以下因素選擇。3.1現(xiàn)行版本的CLSIM02和M100對(duì)腸桿菌科細(xì)菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)的要求。3.2細(xì)菌耐藥監(jiān)控網(wǎng)每年發(fā)布的監(jiān)控要求。3.3本單位上一年度假單胞菌屬細(xì)菌耐藥監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)。4．質(zhì)控用大腸埃希菌ATCC25922、大腸埃希菌ATCC35218（用于β-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺抑制劑合劑）進(jìn)行質(zhì)量控制，質(zhì)控菌株可接受的抑菌圈范圍參見(jiàn)現(xiàn)行版本的CLSIM100-A19。質(zhì)控頻率參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。5．材料和儀器M-H培養(yǎng)基，無(wú)菌生理鹽水，藥敏紙片，無(wú)菌棉簽，35℃孵育箱，測(cè)量尺，標(biāo)準(zhǔn)比濁管或比濁儀。6．操作步驟參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。7．判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5-45.表5-45腸桿菌科細(xì)菌紙片擴(kuò)散試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)（mm）藥敏紙片備注敏感中介耐藥氨芐西林（10μg）≥1714~16≤13參見(jiàn)結(jié)果解釋哌拉西林（100μg）≥2118~20≤17氨芐西林/舒巴坦（10/10μg）≥1512~14≤11哌拉西林/他唑巴坦（100/10μg）≥2118~20≤17頭孢唑林（30μg）≥1815~17≤14頭孢克洛（30μg）≥1815~17≤14頭孢呋辛（30μg）≥1815~17≤14頭孢噻肟（30μg）≥2315~22≤14參見(jiàn)結(jié)果解釋頭孢他啶（30μg）≥1815~17≤14參見(jiàn)結(jié)果解釋頭孢吡肟（30μg）≥1815~17≤14頭孢他啶/克拉維酸（30/10μg）參見(jiàn)結(jié)果解釋頭孢噻肟/克拉維酸（30/10μg）參見(jiàn)結(jié)果解釋亞胺培南（10μg）≥1614~15≤13參見(jiàn)結(jié)果解釋美羅培南（10μg）≥1614~15≤13參見(jiàn)結(jié)果解釋阿米卡星（30μg）≥1715~16≤14參見(jiàn)結(jié)果解釋?xiě)c大霉素（10μg）≥1513~14≤12參見(jiàn)結(jié)果解釋環(huán)丙沙星（5μg）≥2116~20≤15參見(jiàn)結(jié)果解釋左氧氟沙星（5μg）≥1714~16≤13參見(jiàn)結(jié)果解釋復(fù)方新諾明（1.25/23.75μg）≥1611~15≤10參見(jiàn)結(jié)果解釋呋喃妥因（300μg）≥1715~16≤14頭孢哌酮/舒巴坦（75/75μg）≥2116~20≤158．注意事項(xiàng)8.1抑菌圈直徑量取的范圍為包括藥敏紙片在內(nèi)的被藥物完全抑制的區(qū)域（肉眼判斷）。藥敏平板應(yīng)置于無(wú)反光的黑色背景下，用反射光源肉眼觀測(cè)。測(cè)量區(qū)域應(yīng)為肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)區(qū)域，忽略只有用放大鏡才能觀察到的位于抑菌圈外緣的細(xì)菌菌落。變形桿菌屬細(xì)菌可蔓延生長(zhǎng)到某些抗菌藥物的抑菌圈中，在量取抑菌圈直徑時(shí)可忽略抑菌圈中薄的蔓延生長(zhǎng)區(qū)域。測(cè)量復(fù)方磺胺藥敏紙片的抑菌圈時(shí)，可忽略微弱的生長(zhǎng)區(qū)域，而從細(xì)菌明顯生長(zhǎng)處量取抑菌圈直徑。8.2沙門(mén)菌屬和志賀菌屬的細(xì)菌對(duì)一代、二代頭孢菌素及頭霉素體外試驗(yàn)敏感，但臨床治療無(wú)效，因此不應(yīng)報(bào)告敏感。8.3腸桿菌屬，枸櫞酸桿菌屬和沙雷菌屬的細(xì)菌在使用三代頭孢菌素治療的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生耐藥性，因此原本敏感的菌株可能會(huì)在使用抗菌藥物治療3~4日時(shí)產(chǎn)生耐藥性，因此重復(fù)進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)是必要的。9．結(jié)果分析9.1分離自糞便標(biāo)本的志賀菌屬和沙門(mén)菌屬的細(xì)菌僅需進(jìn)行氨芐西林、一種氟喹諾酮類(lèi)藥物及復(fù)方新諾明的藥物敏感試驗(yàn)，如從腸道外標(biāo)本中分離到這些菌株，還需增加氯霉素和1種三代頭孢菌素的藥物敏感試驗(yàn)。9.2對(duì)于腦脊液中分離到的腸桿菌科細(xì)菌，必須進(jìn)行頭孢他啶和頭孢噻肟的藥物敏感試驗(yàn)，以代替頭孢噻肟和頭孢唑林的藥物敏感試驗(yàn)。9.3對(duì)于沙門(mén)菌屬和志賀菌屬的細(xì)菌而言，氨基糖苷類(lèi)抗菌藥物可能在體外表現(xiàn)有抗菌活性，但在臨床上無(wú)抗感染作用，所以這些細(xì)菌不能報(bào)告對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗菌藥物敏感。9.4腸道外沙門(mén)菌感染的病人所分離的沙門(mén)菌屬細(xì)菌如對(duì)萘啶酸耐藥，而對(duì)氟喹諾酮類(lèi)敏感，在臨床使用氟喹諾酮類(lèi)時(shí)可能會(huì)治療失敗或?qū)垢腥局委煼磻?yīng)遲緩。因此對(duì)腸道外感染的沙門(mén)菌屬細(xì)菌需要其對(duì)萘啶酸的耐藥性。如在臨床上分離到這種細(xì)菌，應(yīng)通知臨床醫(yī)師避免使用氟喹諾酮類(lèi)藥物。9.5有關(guān)產(chǎn)ESBL大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌和奇異變形桿菌的篩選和確證試驗(yàn)參見(jiàn)CLSI-M100-S19中的附件A。9.6有關(guān)碳青霉稀酶腸桿菌科細(xì)菌的篩選和確證試驗(yàn)參見(jiàn)CLSIM100-S19中的附件G。參考文獻(xiàn)[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第三版.南京：東南大學(xué)出版社，2006編寫(xiě)人：AAA、BBB操作人：本室操作人員批準(zhǔn)人：XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)假單胞菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：XXX-JY-CZ-WSW-05112版本：20140601生效日期：20140615共2頁(yè)1．目的規(guī)范假單胞菌屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保藥敏結(jié)果的準(zhǔn)確。2．適用范圍本操作規(guī)程適用于是假單胞菌屬細(xì)菌。3．選藥原則在本規(guī)程所列受試抗菌藥物主要根據(jù)以下因素選擇。3.1現(xiàn)行版本的CLSIM02和M100對(duì)假單胞屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)的要求。3.2細(xì)菌耐藥監(jiān)控網(wǎng)每年發(fā)布的監(jiān)控要求。3.3本單位上一年度假單胞菌屬細(xì)菌耐藥監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)。4．質(zhì)控紙片藥敏試驗(yàn)應(yīng)使用大腸埃希菌ATCC25922、大腸埃希菌ATCC35218（用于β-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺抑制劑合劑）和銅綠假單胞菌ATCC27853進(jìn)行質(zhì)量控制，質(zhì)控菌株可接受的抑菌圈范圍參見(jiàn)現(xiàn)行版本的CLSIM100-A19。質(zhì)控頻率參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。5．試驗(yàn)材料和儀器M-H培養(yǎng)基，無(wú)菌生理鹽水，藥敏紙片，無(wú)菌棉簽，35℃孵育箱，測(cè)量尺、標(biāo)準(zhǔn)比濁管或比濁儀。6．操作步驟參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。7．判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5-46.表5-46假單胞菌屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)（mm）藥敏紙片備注敏感中介耐藥哌拉西林（100μg）≥18≤17參見(jiàn)結(jié)果解釋哌拉西林/他唑巴坦（100/10μg）≥18≤17頭孢他啶（30μg）≥1815~17≤14頭孢哌酮（75μg）≥2116~20≤15頭孢吡肟（30μg）≥1815~17≤15亞胺培南（10μg）≥1814~15≤15美羅培南（10μg）≥1814~15≤15氨曲南（30μg）≥1816~21≤15阿米卡星（30μg）≥1815~16≤15參見(jiàn)結(jié)果解釋?xiě)c大霉素（10μg）≥1813~14≤15參見(jiàn)結(jié)果解釋環(huán)丙沙星（5μg）≥1816~20≤15參見(jiàn)結(jié)果解釋多粘菌素（300U）≥18≤15頭孢哌酮/舒巴坦（75/75μg）≥1816~20≤158．注意事項(xiàng)8.1抑菌圈直徑量取的范圍為包括藥敏紙片在內(nèi)的被藥物完全抑制的區(qū)域（肉眼判斷）。藥敏平板應(yīng)置于無(wú)反光的黑色背景下，用反射光源肉眼觀測(cè)。測(cè)量區(qū)域應(yīng)為肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)區(qū)域，忽略只有用放大鏡才能觀察到的位于抑菌圈外緣的細(xì)菌菌落。8.2分離自囊性纖維化病人的銅綠假單胞菌的紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)結(jié)果可靠，但藥敏平板一定要孵育24小時(shí)方可報(bào)告。8.3銅綠假單胞菌在抗感染治療期間對(duì)藥物會(huì)產(chǎn)生耐藥性，因此初分離到的敏感菌在抗感染治療3~4日后應(yīng)重復(fù)進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。9．結(jié)果解釋對(duì)青霉素類(lèi)藥物，敏感的試驗(yàn)結(jié)果提示在臨床治療銅綠假單胞菌嚴(yán)重感染時(shí)應(yīng)使用高劑量的治療方案。單劑治療可能會(huì)失敗，這時(shí)應(yīng)考慮聯(lián)合使用其他菌株對(duì)其敏感的抗感染藥物，如氟喹諾酮類(lèi)或氨基糖苷類(lèi)。參考文獻(xiàn)[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第三版.南京：東南大學(xué)出版社，2006編寫(xiě)人：AAA、BBB操作人：本室操作人員批準(zhǔn)人：XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)不動(dòng)桿菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：XXX-JY-CZ-WSW-05113版本：20140601生效日期：20140615共2頁(yè)1．目的規(guī)范不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)操作規(guī)程，確保藥敏結(jié)果的準(zhǔn)確。2．適用范圍本操作規(guī)程適用于不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌。3．選藥原則在本規(guī)程所列受試抗菌藥物主要根據(jù)以下因素選擇。現(xiàn)行版本的CLSLM02和M100對(duì)假單胞屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散藥物敏感試驗(yàn)的要求。3.2細(xì)菌耐藥監(jiān)控網(wǎng)每年發(fā)布的監(jiān)控要求。3.3本單位上一年度不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌耐藥監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)。4．質(zhì)控紙片藥敏試驗(yàn)應(yīng)使用大腸埃希菌ATCC25922、大腸埃希菌ATCC35218（用于β內(nèi)酰胺/β內(nèi)酰胺抑制劑合劑）和銅綠假單胞菌ATCC27853進(jìn)行質(zhì)量控制，質(zhì)控菌株可接受的抑菌圈范圍參見(jiàn)現(xiàn)行版本的CLSIM100-A19。質(zhì)控頻率參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。5．試驗(yàn)材料和儀器M-H培養(yǎng)基、無(wú)菌生理鹽水、藥敏紙片、無(wú)菌棉簽、35℃孵育箱、測(cè)量尺、標(biāo)準(zhǔn)比濁管或比濁儀。6．操作步驟參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。7．判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5-47.表5-47不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)（mm）藥敏紙片備注敏感（S）中介（I）耐藥（R）哌拉西林（100μg） ≥2118~20≤17哌拉西林/他唑巴坦（100/10μg）≥2118~20≤17頭孢他啶（30μg）≥1815~17≤14頭孢噻肟（30μg）≥2315~22≤14頭孢吡肟（30μg）≥1815~17≤14亞胺培南（10μg）≥1614~15≤13美羅培南（10μg）≥1614~15≤13阿米卡星（30μg）≥1715~16≤14慶大霉素（10μg）≥1513~14≤13環(huán)丙沙星（5μg）≥2116~20≤15頭孢哌酮/鈉舒巴坦（75/75μg）≥2116~20≤158．注意事項(xiàng)抑菌圈直徑量取的范圍為包括藥敏紙片在內(nèi)的被藥物完全抑制的區(qū)域（肉眼判斷）。藥敏平板應(yīng)置于無(wú)反光的黑色背景下，用反射光源肉眼觀測(cè)。測(cè)量區(qū)域應(yīng)為肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)的區(qū)域，忽略微弱的生長(zhǎng)區(qū)域，而從細(xì)菌明顯生長(zhǎng)處量取抑菌圈直徑。參考文獻(xiàn)[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第三版.南京：東南大學(xué)出版社，2006編寫(xiě)人：AAA、BBB操作人：本室操作人員批準(zhǔn)人：XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)嗜麥芽窄食單胞菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：XXX-JY-CZ-WSW-05114版本：20140601生效日期：20140615共2頁(yè)1．目的規(guī)范嗜麥芽窄食單胞菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保藥敏結(jié)果的準(zhǔn)確。2．適用范圍本操作規(guī)程適用于是嗜麥芽窄食單胞菌。3．選藥原則3.1現(xiàn)行版本的CLSIM02和M100對(duì)假單胞屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)的要求。3.2本單位處方手冊(cè)中的抗菌藥物名冊(cè)。3.3本單位上一年度嗜麥芽窄食單胞菌耐藥監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)。4．質(zhì)控紙片藥敏試驗(yàn)應(yīng)使用大腸埃希菌ATCC25922、大腸埃希菌ATCC35218（用于β-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺抑制劑合劑）和銅綠假單胞菌ATCC27853進(jìn)行質(zhì)量控制，質(zhì)控菌株可接受的抑菌圈范圍參見(jiàn)現(xiàn)行版本的CLSIM100-A19。5．試驗(yàn)材料和儀器M-H培養(yǎng)基，無(wú)菌生理鹽水，藥敏紙片，無(wú)菌棉簽，35℃孵育箱，測(cè)量尺。6．操作步驟參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。7．判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5-48.表5-48嗜麥芽窄食單胞菌紙片擴(kuò)散試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)（mm）藥敏紙片備注敏感中介耐藥米諾環(huán)素（30μg）≥1915~18≤14左氧氟沙星（5μg）≥1914~16≤13復(fù)方新諾明（1.25/23.75μg）≥1911~15≤10頭孢哌酮/舒巴坦（75/75μg）≥1916~20≤158．注意事項(xiàng)抑菌圈直徑量取的范圍為包括藥敏紙片在內(nèi)的被藥物完全抑制的區(qū)域（肉眼判斷）。藥敏平板應(yīng)置于無(wú)反光的黑色背景下，用反射光源肉眼觀測(cè)。測(cè)量區(qū)域應(yīng)為肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)區(qū)域，忽略只有用放大鏡才能觀察到的位于抑菌圈外緣的細(xì)菌菌落。測(cè)量復(fù)方磺胺藥敏紙片的抑菌圈時(shí)，可忽略微弱的生長(zhǎng)區(qū)域，而從細(xì)菌明顯生長(zhǎng)處量取抑菌圈直徑。參考文獻(xiàn)[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第三版.南京：東南大學(xué)出版社，2006編寫(xiě)人：AAA、BBB操作人：本室操作人員批準(zhǔn)人：XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)洋蔥伯克霍爾德菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：XXX-JY-CZ-WSW-05115版本：20140601生效日期：20140615共2頁(yè)1．目的規(guī)范洋蔥伯克霍爾德菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保藥敏結(jié)果的準(zhǔn)確。2．適用范圍本操作規(guī)程適用于是洋蔥伯克霍爾德菌。3．選藥原則3.1現(xiàn)行版本的CLSIM02和M100對(duì)假單胞屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)的要求。3.2本單位處方手冊(cè)中的抗菌藥物名冊(cè)。3.3本單位上一年度洋蔥伯克霍爾德菌耐藥監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)。4．質(zhì)控紙片藥敏試驗(yàn)應(yīng)使用大腸埃希菌ATCC25922、大腸埃希菌ATCC35218（用于β-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺抑制劑合劑）和銅綠假單胞菌ATCC27853進(jìn)行質(zhì)量控制，質(zhì)控菌株可接受的抑菌圈范圍參見(jiàn)現(xiàn)行版本的CLSIM100-A19。5．試驗(yàn)材料和儀器M-H培養(yǎng)基，無(wú)菌生理鹽水，藥敏紙片，無(wú)菌棉簽，35℃孵育箱，測(cè)量尺。6．操作步驟參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。7．判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5-49.表5-49洋蔥伯克霍爾德菌紙片擴(kuò)散試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)（mm）藥敏紙片備注敏感中介耐藥頭孢他啶（30μg）≥2118~20≤17美羅培南（10μg）≥2016~19≤15米諾環(huán)素（30μg）≥1915~18≤14復(fù)方新諾明（1.25/23.75μg）≥1611~15≤10頭孢哌酮/舒巴坦（75/75μg）≥2116~20≤158．注意事項(xiàng)抑菌圈直徑量取的范圍為包括藥敏紙片在內(nèi)的被藥物完全抑制的區(qū)域（肉眼判斷）。藥敏平板應(yīng)置于無(wú)反光的黑色背景下，用反射光源肉眼觀測(cè)。測(cè)量區(qū)域應(yīng)為肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)區(qū)域，忽略只有用放大鏡才能觀察到的位于抑菌圈外緣的細(xì)菌菌落。測(cè)量復(fù)方磺胺藥敏紙片的抑菌圈時(shí)，可忽略微弱的生長(zhǎng)區(qū)域，而從細(xì)菌明顯生長(zhǎng)處量取抑菌圈直徑。參考文獻(xiàn)[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第三版.南京：東南大學(xué)出版社，2006（倪語(yǔ)星韓立中）編寫(xiě)人：AAA、BBB操作人：本室操作人員批準(zhǔn)人：XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)葡萄球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：XXX-JY-CZ-WSW-05116版本：20140601生效日期：20140615共3頁(yè)1．目的規(guī)范葡萄球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保藥敏結(jié)果的準(zhǔn)確。2．適用范圍本操作規(guī)程適用于葡萄球菌屬的細(xì)菌。3．選藥原則在本規(guī)程所列受試抗菌藥物主要根據(jù)以下因素選擇。3.1現(xiàn)行版本的CLSIM02和M100對(duì)葡萄球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)的要求。3.2本單位處方手冊(cè)中的抗菌藥物名冊(cè)。3.3本單位上一年度葡萄球菌屬細(xì)菌耐藥監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)。4．質(zhì)控紙片藥敏試驗(yàn)應(yīng)使用金黃色葡萄球菌ATCC25923和大腸埃希菌ATCC35218（用于β-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺抑制劑合劑）進(jìn)行質(zhì)量控制，質(zhì)控菌株可接受的抑菌圈范圍參見(jiàn)現(xiàn)行版本的CLSIM100-A19。5．材料和儀器M-H培養(yǎng)基，無(wú)菌生理鹽水，藥敏紙片，無(wú)菌棉簽，35℃孵育箱，測(cè)量尺。6．操作步驟根據(jù)CLSIM2-A10和M100-S19制定本操作步驟。6.1菌液制備從孵育了18~24小時(shí)的非選擇性培養(yǎng)基（如血瓊脂）平板上，挑取單個(gè)菌落，直接用無(wú)菌生理鹽水制成懸液作為接種物，將濁度調(diào)整至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。應(yīng)在接種物制備后15分鐘內(nèi)接種M-H瓊脂平板。用無(wú)菌棉拭蘸取菌液，在管內(nèi)壁液面上方旋轉(zhuǎn)緊壓，將多余菌液擠去，然后在瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60°以確保接種菌的均勻分布，最后沿平板內(nèi)緣涂抹一周。6.2接種好的平板可敞開(kāi)蓋子在室溫下干燥3~5分鐘（不要超過(guò)15分鐘），然后用紙片分配器將紙片放入瓊脂表面并輕壓，使紙片與瓊脂表面完全接觸。各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，通常150mm平板至多放置12個(gè)紙片，90~100mm平板至多放置6個(gè)紙片。由于某些藥物在紙片放入瓊脂平板后幾乎立即擴(kuò)散，所以一旦紙片放入后就不能再移動(dòng)，若要重新放置，可用一個(gè)新的紙片放在平板的另一個(gè)位置。6.3應(yīng)在紙片貼好后15分鐘內(nèi)將平板倒置放入35℃孵箱，若超過(guò)15分鐘將使紙片中的抗菌藥物提早擴(kuò)散。非苛養(yǎng)菌的藥敏解釋性標(biāo)準(zhǔn)是建立在這些菌株在空氣中孵育的基礎(chǔ)上，一些藥物（如氨基糖苷類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)和四環(huán)素）的抑菌圈直徑受CO2的影響有較大的改變，所以本菌屬細(xì)菌不能孵育在CO2孵箱。7．判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5-50.表5-50葡萄球菌屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)（mm）藥敏紙片備注敏感中介耐藥青霉素（10U）≥29≤28參見(jiàn)結(jié)果解釋9.1、9.3氨芐西林/舒巴坦（10/10μg）≥1512~14≤11參見(jiàn)結(jié)果解釋9.3頭孢唑林（30μg）≥1815~17≤14參見(jiàn)結(jié)果解釋9.3頭孢西?。?0μg）≥22≤21金黃色葡萄球菌和鄧葡萄球菌，參見(jiàn)結(jié)果解釋9.2、9.3≥25≤24路鄧葡萄球菌以外的凝固酶陰性的葡萄球菌，參見(jiàn)結(jié)果解釋9.2、9.3紅霉素（15μg）≥2314~22≤13克林霉素（2μg）≥2115~20≤14參見(jiàn)結(jié)果解釋9.4替考拉寧（30μg）≥1411~13≤10參見(jiàn)結(jié)果解釋9.5慶大霉素（10μg）≥1513~14≤12左氧氟沙星（5μg）≥1914~18≤15復(fù)方新諾明（1.25/23.75μg）≥1611~15≤10利福平（5μg）≥2017~19≤16參見(jiàn)結(jié)果解釋9.6利奈唑胺（30μg）≥21參見(jiàn)結(jié)果解釋9.78．注意事項(xiàng)8.1抑菌圈直徑量取的范圍為包括藥敏紙片在內(nèi)的被藥物完全抑制的區(qū)域（肉眼判斷）。藥敏平板應(yīng)置于無(wú)反光的黑色背景下，用反射光源肉眼觀測(cè)。但利奈唑胺和苯唑西林紙片應(yīng)使用透射光源進(jìn)行觀測(cè)。測(cè)量區(qū)域應(yīng)為肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)的區(qū)域，忽略只有用放大鏡才能觀察到的位于抑菌圈外緣的細(xì)菌菌落。測(cè)量復(fù)方磺胺藥敏紙片的抑菌圈時(shí)，可忽略微弱的生長(zhǎng)區(qū)域，而從細(xì)菌明顯抑制處量取抑菌圈直徑。如在苯唑西林、利奈唑胺抑菌圈內(nèi)任何可辨別的菌落生長(zhǎng)，則報(bào)告該菌株對(duì)相應(yīng)抗菌藥耐藥。8.2在直接從血平板上挑取菌落配制細(xì)菌懸液時(shí)需注意，來(lái)自血瓊脂培養(yǎng)基的菌落可能帶有足夠的甲氧芐啶或磺胺拮抗物，因此細(xì)菌可在甲氧芐啶/磺胺甲噁唑抑菌圈內(nèi)部沿著敏感菌株的周?chē)a(chǎn)生模糊生長(zhǎng)。8.3MRS檢測(cè)的要點(diǎn)提示：用30μg頭孢西丁紙片檢測(cè)MRS；用直接菌落懸液（DCS）接種法（而不是生長(zhǎng)法）;在33~35℃（不超過(guò)35℃）、空氣中孵育，金黃色葡萄球菌18小時(shí)，凝固酶陰性葡萄球菌24小時(shí)；用反射光仔細(xì)查看抑菌圈，如有任何小菌落或薄膜出現(xiàn)均報(bào)告耐藥；如果懷疑可能為MRSA,需用OXA-Nacl篩選試驗(yàn)確認(rèn)，培養(yǎng)基中必須加Nacl（2%W/V）；MRS必須報(bào)告對(duì)所有頭孢類(lèi)和其他β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物均耐藥，并提示可能對(duì)氨基糖苷類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、克林霉素和四環(huán)素等抗菌藥物多重耐藥；攜帶mecA基因，或產(chǎn)生PBP2a的葡萄球菌菌株，必須報(bào)告為MRS.9．結(jié)果分析9.1對(duì)于青霉素抑菌圈直徑≥29mm的菌株，需要檢測(cè)該菌株是否產(chǎn)誘導(dǎo)性β-內(nèi)酰胺酶，非產(chǎn)酶菌株才可報(bào)告為敏感，見(jiàn)產(chǎn)色素頭孢菌素試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。9.2頭孢西丁紙片代替苯唑西林紙片用于試驗(yàn)，根據(jù)頭孢西丁的試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告苯唑西林的敏感、中介或耐藥。9.3青霉素敏感的菌株對(duì)所有青霉素類(lèi)、β-內(nèi)酰胺類(lèi)/β-內(nèi)酰胺抑制劑合劑、頭孢菌素、碳青霉稀類(lèi)敏感；青霉素耐藥且苯唑西林敏感的菌株對(duì)于青霉素酶不穩(wěn)定的青霉素耐藥，但對(duì)青霉素酶穩(wěn)定的青霉素類(lèi)、β-內(nèi)酰胺類(lèi)/β-內(nèi)酰胺抑制劑合劑、相關(guān)的頭孢菌素、碳青霉稀類(lèi)仍然敏感；對(duì)苯唑西林耐藥的菌株應(yīng)報(bào)告對(duì)所有的β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥。9.4紅霉素耐藥，克林霉素敏感的菌株應(yīng)檢測(cè)菌株對(duì)克林霉素的誘導(dǎo)耐藥性，對(duì)克林霉素的誘導(dǎo)耐藥性可通過(guò)“D”試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)，即將紅霉素和克林霉素紙片間隔15~26mm，35℃孵育16~18小時(shí)觀察結(jié)果，如克林霉素抑菌圈在朝向紅霉素紙片的方向出現(xiàn)“D”型變化，該菌株為對(duì)克林霉素誘導(dǎo)耐藥的菌株，該菌株對(duì)克林霉素的藥敏結(jié)果應(yīng)修正為耐藥。9.5葡萄球菌屬對(duì)糖肽類(lèi)抗菌藥的敏感試驗(yàn)要點(diǎn)提示：紙片擴(kuò)散試驗(yàn)不能區(qū)分對(duì)萬(wàn)古霉素敏感菌株（MIC0.5~2μg/ml）與敏感性下降的菌株（MIC4~8μg/ml）；須仔細(xì)檢查MRSA對(duì)萬(wàn)古霉素的MIC；可用與腸球菌同樣的萬(wàn)古霉素瓊脂做篩選試驗(yàn)，在35℃孵育24小時(shí)，并同時(shí)用陰性質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌ATCC29213作對(duì)照，用VanC型VRE做陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性結(jié)果需用MIC試驗(yàn)確認(rèn)對(duì)VAN的MIC；如出現(xiàn)對(duì)萬(wàn)古霉素敏感性下降的菌株（MIC≥4μg/ml），應(yīng)該重復(fù)鑒定和藥敏試驗(yàn)，并保留菌種，送參考實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)；如果實(shí)驗(yàn)室用自動(dòng)分析儀做萬(wàn)古霉素的敏感試驗(yàn)，必須加做CLSI推薦的BHI-萬(wàn)古霉素（6μg/ml）瓊脂篩選試驗(yàn)，或用CLSI參考方法或E試驗(yàn)測(cè)定MIC；替考拉寧紙片擴(kuò)散試驗(yàn)折點(diǎn)對(duì)于將替考拉寧敏感菌株從替考拉寧耐藥或中介的菌株中鑒別出來(lái)的能力尚待進(jìn)一步的評(píng)估。9.6利福平不能單獨(dú)用于抗感染治療。9.7利奈唑胺紙片的抑菌圈應(yīng)用透視光量取，如出現(xiàn)利奈唑胺不敏感的菌株，應(yīng)用MIC法進(jìn)行確認(rèn)。參考文獻(xiàn)[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第三版.南京：東南大學(xué)出版社，2006編寫(xiě)人：AAA、BBB操作人：本室操作人員批準(zhǔn)人：XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)腸球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：XXX-JY-CZ-WSW-05117版本：20140601生效日期：20140615共2頁(yè)1．目的規(guī)范腸球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保藥敏結(jié)果的準(zhǔn)確。2．適用范圍本操作規(guī)程適用于腸球菌屬的細(xì)菌。3．選藥原則3.1現(xiàn)行版本的CLSIM02和M100對(duì)腸球菌屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)的要求。3.2本單位處方手冊(cè)中的抗菌藥物名冊(cè)。3.3本單位上一年度腸球菌屬細(xì)菌耐藥監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)。4．質(zhì)控紙片藥敏試驗(yàn)應(yīng)使用金黃色葡萄球菌ATCC25923進(jìn)行質(zhì)量控制，質(zhì)控菌株可接受的抑菌圈范圍參見(jiàn)現(xiàn)行版本的CLSIM100-A19。5．材料和儀器M-H培養(yǎng)基，無(wú)菌生理鹽水，藥敏紙片，無(wú)菌棉簽，35℃孵育箱，測(cè)量尺、標(biāo)準(zhǔn)比濁管或比濁儀。6．操作步驟參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。7．判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5-51.表5-51腸球菌屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)（mm）藥敏紙片備注敏感（S）中介(I)耐藥(R)氨芐西林（10μg）≥17≤16參見(jiàn)結(jié)果解釋9.1、9.2萬(wàn)古霉素（30μg）≥1715~16≤14參見(jiàn)結(jié)果解釋9.3替考拉寧（30μg）≥1411~13≤10慶大霉素（120μg）≥106參見(jiàn)結(jié)果解釋9.4、9.5左氧氟沙星（5μg）≥1714~16≤13呋喃妥因（300μg）≥1715~16≤14利奈唑胺（30μg）≥2321~22≤20磷霉素（200μg）≥2113~15≤12氯霉素（30μg）≥1813~17≤128．注意事項(xiàng)8.1抑菌圈直徑量取的范圍為包括藥敏紙片在內(nèi)的被藥物完全抑制的區(qū)域（肉眼判斷）。藥敏平板應(yīng)置于無(wú)反光的黑色背景下，用反射光源肉眼觀測(cè)。但萬(wàn)古霉素的抑菌圈應(yīng)該用透視光源量取。測(cè)量區(qū)域應(yīng)為肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)的區(qū)域，忽略只有用放大鏡才能觀察到的位于抑菌圈外緣的細(xì)菌菌落。如在抑菌圈內(nèi)任何可辨別的菌落生長(zhǎng)，則報(bào)告該菌株對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥。8.2對(duì)腸球菌屬細(xì)菌而言，頭孢菌素、氨基糖苷類(lèi)（高濃度除外）、克林霉素和復(fù)方新諾明體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果可能敏感，但臨床治療無(wú)效，因此不應(yīng)報(bào)告為敏感。9．結(jié)果解釋9.1氨芐西林的藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果可代表細(xì)菌對(duì)氨芐西林和阿莫西林的敏感性。在非產(chǎn)酶的腸球菌中，氨芐西林敏感提示菌株對(duì)阿莫西林-克拉維酸、氨芐西林-舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦敏感。9.2紙片擴(kuò)散法和稀釋法均無(wú)法準(zhǔn)確判斷菌株是否由于產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶而引起對(duì)氨芐西林和青霉素的耐藥性，因此對(duì)于從血液和腦脊液分離的菌株需要用頭孢噻吩進(jìn)行檢測(cè)菌株是否產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶，見(jiàn)產(chǎn)色素頭孢菌素試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。9.3在進(jìn)行腸球菌的萬(wàn)古霉素藥物敏感試驗(yàn)時(shí)，藥敏平板孵育要足24小時(shí)，須用透視光源量取抑菌圈直徑，對(duì)于萬(wàn)古霉素中介的腸球菌應(yīng)用MIC進(jìn)行檢測(cè)，有關(guān)耐萬(wàn)古霉素腸球菌的檢測(cè)參見(jiàn)《萬(wàn)古霉素腸球菌篩選試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。9.4氨芐西林、青霉素或萬(wàn)古霉素與一種氨基糖苷類(lèi)抗菌藥需要先進(jìn)行菌株對(duì)高濃度氨基糖苷類(lèi)的藥物敏感試驗(yàn)（慶大霉素和鏈霉素），其他氨基糖苷類(lèi)抗菌藥的效果并不比這兩種更好，因此無(wú)需檢測(cè)。9.5敏感提示可以與細(xì)胞壁活性的抗菌藥（如氨芐西林、青霉素和萬(wàn)古霉素等）抗菌藥聯(lián)合使用，7~9mm為不確定，應(yīng)進(jìn)行瓊脂稀釋法或肉湯稀釋法進(jìn)行確認(rèn)，耐藥表明不能與細(xì)胞壁活性抗菌聯(lián)合使用。參考文獻(xiàn)[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第三版.南京：東南大學(xué)出版社，2006（倪語(yǔ)星韓立中）編寫(xiě)人：AAA、BBB操作人：本室操作人員批準(zhǔn)人：XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)鏈球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：XXX-JY-CZ-WSW-05118版本：20140601生效日期：20140615共2頁(yè)1．目的規(guī)范鏈球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保藥敏結(jié)果的準(zhǔn)確。2．適用范圍本操作規(guī)程適用于鏈球菌屬的細(xì)菌。3．選藥原則在本規(guī)程所列受試抗菌藥物主要根據(jù)以下因素選擇。3.1現(xiàn)行版本的CLSIM02和M100對(duì)鏈球菌屬紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)的要求。3.2本單位處方手冊(cè)中的抗菌藥物名冊(cè)。3.3本單位上一年度鏈球菌屬細(xì)菌耐藥監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)。4．質(zhì)控紙片藥敏試驗(yàn)應(yīng)使用肺炎鏈球菌ATCC49619進(jìn)行質(zhì)量控制，質(zhì)控菌株可接受的抑菌圈范圍參見(jiàn)現(xiàn)行版本的CLSIM100-A19。5．材料和儀器加5%羊血的MHA培養(yǎng)基、無(wú)菌生理鹽水、藥敏紙片、無(wú)菌棉簽、35℃孵育箱、測(cè)量尺、標(biāo)準(zhǔn)比濁管或比濁儀。6．操作步驟參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。7．判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5-52.表5-52葡萄球菌屬細(xì)菌紙片擴(kuò)散試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)（mm）藥敏紙片備注敏感（S）中介（I）耐藥（R）青霉素（10U）≥24參見(jiàn)結(jié)果解釋9.1頭孢曲松（30μg）≥24紅霉素（15μg）≥2116~20≤15參見(jiàn)結(jié)果解釋9.29.3克林霉素（2μg）≥1916~18≤15參見(jiàn)結(jié)果解釋9.29.3萬(wàn)古霉素（30μg）≥17左氧氟沙星（5μg）≥1714~16≤138．注意事項(xiàng)抑菌圈直徑量取的范圍為包括藥敏紙片在內(nèi)的被藥物完全抑制的區(qū)域（肉眼判斷）。量取時(shí)應(yīng)打開(kāi)藥敏平板蓋子，用反射光源，用肉眼觀測(cè)，從上側(cè)測(cè)量抑菌圈直徑。測(cè)量區(qū)域應(yīng)為肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)的區(qū)域，忽略只有用放大鏡才能觀察到的位于抑菌圈外緣的細(xì)菌菌落。9．結(jié)果解釋9.1對(duì)青霉素敏感的鏈球菌菌株可以認(rèn)為對(duì)氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉維酸、氨芐西林-舒巴坦、頭孢克洛、頭孢唑林、頭孢迪尼、頭孢吡肟、頭孢羅齊、頭孢噻肟、頭孢布坦（僅對(duì)A群鏈球菌）、頭孢曲松、頭孢呋新、頭孢泊肟、頭孢唑肟、頭孢噻吩、頭孢吡硫、厄他培南、亞胺培南、洛拉卡比、美羅培南等抗菌藥敏感，無(wú)需對(duì)這些抗菌藥進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。9.2青霉素和氨芐西林被推薦用于B群鏈球的圍產(chǎn)期預(yù)防用藥。頭孢唑啉被推薦用于非嚴(yán)重青霉素過(guò)敏的婦女的治療，嚴(yán)重過(guò)敏的病人應(yīng)使用紅霉素或克林霉素。B群鏈球?qū)Π逼S西林、青霉素和頭孢唑啉敏感，但可能會(huì)對(duì)克林霉素和（或）紅霉素耐藥。如果從對(duì)青霉素嚴(yán)重過(guò)敏的懷孕婦女分離到B群鏈球菌，必須進(jìn)行克林霉素和紅霉素的藥物敏感試驗(yàn)并報(bào)告結(jié)果。9.3紅霉素耐藥，克林霉素敏感的菌株應(yīng)檢測(cè)菌株對(duì)克林霉素的誘導(dǎo)耐藥性，對(duì)克林霉素的誘導(dǎo)耐藥性可通過(guò)“D”試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)，即將紅霉素和克林霉素紙片間隔15~26mm，35℃孵育16~18小時(shí)觀察結(jié)果，如克林霉素抑菌圈在朝向紅霉素紙片的方向出現(xiàn)“D”型變化，該菌株為對(duì)克林霉素誘導(dǎo)耐藥的菌株，該菌株對(duì)克林霉素的藥敏結(jié)果應(yīng)修正為耐藥。參考文獻(xiàn)[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第三版.南京：東南大學(xué)出版社，2006（倪語(yǔ)星韓立中）編寫(xiě)人：AAA、BBB操作人：本室操作人員批準(zhǔn)人：XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：XXX-JY-CZ-WSW-051119版本：20140601生效日期：20140615共2頁(yè)1．目的規(guī)范肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、大腸埃希菌和奇異變形桿菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）篩選和確證試驗(yàn)。2．適用范圍本操作規(guī)程適用于肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、大腸埃希菌和奇異變形桿菌。3．選藥原則在本規(guī)程所列受試抗菌藥物主要根據(jù)現(xiàn)行版本的CLSIM02和M100選擇ESBLs篩選和確證試驗(yàn)所需的藥敏紙片。4．質(zhì)控紙片藥敏試驗(yàn)應(yīng)使用大腸埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603進(jìn)行質(zhì)量控制，質(zhì)控菌株可接受的抑菌圈范圍參見(jiàn)現(xiàn)行版本的CLSIM100-A19。肺炎克雷伯菌ATCC700603可接受的抑菌圈范圍為：頭孢泊肟（10μg）抑菌環(huán)9~16mm頭孢他啶（30μg）抑菌環(huán)10~18mm氨曲南（30μg）抑菌環(huán)9~17mm頭孢噻肟（30μg）抑菌環(huán)17~25mm頭孢曲松（30μg）抑菌環(huán)16~24mm5．材料和儀器M-H培養(yǎng)基、無(wú)菌生理鹽水、藥敏紙片、無(wú)菌棉簽、35℃孵育箱、測(cè)量尺。6．操作步驟參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。7．判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5-53.表5-53紙片法檢測(cè)克雷伯菌、大腸埃希菌和奇異變形桿菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶方法初步篩選試驗(yàn)表型確證試驗(yàn)培養(yǎng)基Mueller-Hinton瓊脂Mueller-Hinton瓊脂抗微生物藥物紙片濃度肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌和大腸埃希菌：頭孢泊肟10μg或頭孢他啶30μg或氨曲南30μg或頭孢噻肟30μg或頭孢曲松30μg奇異變形桿菌：頭孢泊肟10μg或頭孢他啶30μg或頭孢噻30μg使用一種以上的藥物進(jìn)行篩選將會(huì)提高檢測(cè)的敏感性頭孢他啶30μg，頭孢他啶/克拉維酸30/10μg和頭孢噻肟30μg，頭孢噻肟/克拉維酸30/10μg確認(rèn)試驗(yàn)需要同時(shí)使用頭孢噻肟和頭孢他啶，單獨(dú)和聯(lián)合克拉維酸的復(fù)合制劑接種按標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法的規(guī)定進(jìn)行按標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法的規(guī)定進(jìn)行孵育條件35℃空氣35℃空氣孵育時(shí)間16~18h16~18h判讀結(jié)果肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌和大腸埃希菌：頭孢泊肟抑菌圈直徑≤17mm頭孢他啶抑菌圈直徑≤22mm氨曲南抑菌圈直徑≤27mm頭孢噻肟抑菌圈直徑≤27mm頭孢曲松抑菌圈直徑≤25mm奇異變形桿菌：頭孢泊肟抑菌圈直徑≤22mm頭孢他啶抑菌圈直徑≤22mm頭孢噻肟抑菌圈直徑≤27mm上述抑菌環(huán)直徑提示菌株可能產(chǎn)生ESBLs2個(gè)藥物中有任何一個(gè)，在加克拉維酸后，抑菌環(huán)直徑與不加克拉維酸的抑菌環(huán)相比，增大值≥5mm時(shí)，判定為產(chǎn)ESBLs（例如，頭孢他啶的抑菌環(huán)=16mm；頭孢他啶/克拉維酸的抑菌環(huán)=21mm）質(zhì)控意見(jiàn)當(dāng)執(zhí)行ESBL篩選試驗(yàn)時(shí)，肺炎克雷伯菌ATCC700603被用于質(zhì)量評(píng)估（如訓(xùn)練，能力或試驗(yàn)評(píng)價(jià)），肺炎克雷伯菌ATCC700603或大腸埃希菌ATCC25922用于常規(guī)QC（如每周或每日）大腸埃希菌ATCC25922（應(yīng)在敏感范圍）肺炎克雷伯菌ATCC700603頭孢泊肟抑菌環(huán)9~16mm頭孢他啶抑菌環(huán)10~18mm氨曲南抑菌環(huán)9~17mm頭孢噻肟抑菌環(huán)17~25mm頭孢曲松抑菌環(huán)16~24mm當(dāng)執(zhí)行ESBL確認(rèn)試驗(yàn)時(shí)，肺炎克雷伯菌ATCC700603和大腸埃希菌ATCC25922用于常規(guī)QC（每周或每日）大腸埃希菌ATCC25922：所測(cè)試藥物聯(lián)合克拉維酸后的抑菌環(huán)直徑與單藥抑菌環(huán)相比，增大≤2mm肺炎克雷伯菌ATCC700603：頭孢他啶/克拉維酸抑菌環(huán)直徑增大≥5mm頭孢噻肟/克拉維酸抑菌環(huán)直徑增大≥3mm8．注意事項(xiàng)只有確定分離到的奇異變形桿菌與臨床感染性疾病有關(guān)，才需要進(jìn)行ESBLs的篩選和確