獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室人員培訓(xùn)內(nèi)容

：驗(yàn)定驗(yàn)定三、ELISA驗(yàn)考試內(nèi)核(高抗原測(cè)。血凝試驗(yàn)(hemaggltiationtet）是稱。利用特異性抗體或病毒血凝素與紅細(xì)胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合而出現(xiàn)凝。紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)血凝和血凝抑制試驗(yàn) 某些病毒或病毒的血凝素紅細(xì)胞（hemagglutnatin,A，當(dāng)病毒的懸液中先加入特異性抗體,且這種抗體的量足以抑制病毒顆粒其素直接接觸。這時(shí)紅細(xì)胞的凝集現(xiàn)象就被抑制,稱為紅細(xì)胞凝集抑制（hemaggltiatininhibiion，HI稱血凝。血凝抑制（HI）試驗(yàn)禽流感（H)細(xì)胞表，HA試驗(yàn)由此得名。A蛋白受特異性結(jié)能干擾HA。該是前WHO進(jìn)法.株HA亞定,否。HAI試驗(yàn)的優(yōu)是前WHO進(jìn)用的試驗(yàn)方法,可用來鑒定所有的流感病毒分離株，可用來檢測(cè)禽血清體A相致時(shí)現(xiàn)I象雞紅細(xì)胞檢測(cè)哺乳動(dòng)物和水禽的血清時(shí)需要除去存在于血清中的非特異凝集素，對(duì)于其它禽種,也可以考慮選用在調(diào)查研究中的禽種紅細(xì)化;。1氏(levers）配制稱糖。g、檬鈉0.8酸05、化鈉.2g至100mL散后調(diào)pH值至1an高壓滅菌4℃保。2備21血用約1mL少2只SPF如果沒有SPF雞證，約～4m裝L混勻.2。2胞將經(jīng)1501800r/min離心8分鐘,液,合經(jīng)1500~1800r/min心8薄膜,再重復(fù)2液20mL，合成胞懸液，4℃超過5天。2.310％雞紅細(xì)液過5，心15001800r/min8，積)入9積(L)理。2.41％液取混勻的10雞紅懸液1mL，加入9mL。3抗原（HA）3。1的112入0.025mLPBS，滴頭.3.2吸取0.025mL病液第l。33第1取0025mL第2取0.025mL第3第1孔,第1取0。025mL棄換。3.4入0.025mLPBS。3.5每入0.025mL體分為1%雞懸雞。3.6勻,（20~2置n后結(jié)果(如置4℃環(huán)應(yīng)1呈。3。7定斜。表1：準(zhǔn)別 孔底所見 果1 紅，，即100%紅細(xì)胞凝集++++2 紅但圈 +++3 紅大圈,四周塊 +++4 紅點(diǎn)塊 -5 全集能使集(00%凝集+為為1（應(yīng)（。4血（驗(yàn)(）41據(jù)3制U以凝的以4含U的為125，則U是164(56以4。4.2的1孔~11入0LS第12孔加入0.5mLPBS。4.3吸取0025mL血加第1分吸0.025mL于第2孔第10第10取0.025mL。441～11含U液0.025m，室溫（約2℃）少0min。4.5每入0.025mL體為，勻約0mi（約20℃,置4℃件。4。6結(jié)定制4個(gè)U抗為I。只有陰性對(duì)照孔血清滴度不大于21g2，陽性對(duì)照孔血清誤差不超過1個(gè)I價(jià)于21og2判定I；I于31og2；HI或于41og2。正向間接血凝試驗(yàn)的原理是將可溶性抗原吸附于與免疫無關(guān)的載體（紅細(xì)胞）表面，此吸附抗原的紅細(xì)胞與相應(yīng)的抗體結(jié)合,在有電凝對(duì)實(shí)于況下經(jīng)常被應(yīng)用到，因此,正確熟練地操作應(yīng)用，在一些動(dòng)物疫病的免。正向間接血凝為一種微量的定量反應(yīng)試驗(yàn)，因而,任何操作環(huán)節(jié)的紕漏都會(huì)使最后判定的結(jié)果與正確結(jié)論大相徑庭.充分理解正向間接導(dǎo)意義.操作步驟可簡(jiǎn)化為：①稀釋液→②待檢血清→③對(duì)倍稀釋→④。正向間接血凝試驗(yàn)（IHA)口蹄疫1原理試（IA?？乖c其對(duì)應(yīng)的抗體相遇,在一定條件下會(huì)形成抗原復(fù)合物，但小,原附(敏)特應(yīng)靈敏性。這種經(jīng)過口蹄疫純化抗原致敏的紅細(xì)胞與口蹄疫抗體相遇,紅象.2圍主于測(cè)O。3劑3.196孔110°V板,板3。2微量50μL25μL）咀3。3器4O原.5O清3。6O清3。7液3.8待清(約05ml5℃活0鐘4法4.1加液在上—6的1-9第7的1—4第7第8的-12液0μL。4。2清取1清50μL加入第1排第1孔,，右拇輕彈簧1-2次氣泡出50μL移入第2混取出50μL移入第3第9混出50μL第1排1-9倍數(shù))1:⑴14⑵18⑶:6⑷1:32⑸1:64⑹：128⑺156、1:12⑼。取2第2取3第3均。4。3清在血第7第1孔血清50μ第4孔，出50μL為1：2⑴14⑵1:8⑶、1:16⑷。第—7。4.4清在板第8第1清0μL第12出0μL為1：1：4096。4.5加原液對(duì)均加O型血凝抗原）25μL。4。6振勻上1-2分鐘,混勻亦可,然后將血凝板放在白紙上觀察各孔紅血球是否混勻，不出現(xiàn)血沉為格蓋?；?℃下靜置1-2定。4。7判準(zhǔn)清1:16孔,稀液孔圓點(diǎn)，或僅出現(xiàn)“+”凝集（血球大部沉于孔底,邊緣稍有少量血球懸浮。陽清照12—256““++凝格。在孔+凝如1清15孔“+”-“+++"凝6—7孔“+”第8呈+第9體為:28.到:1第7牛到:第8孔)+疫。注：，使用效果.用不同批次的血凝抗原檢測(cè)同一份血清時(shí)，應(yīng)事先用陽性血清準(zhǔn)確測(cè)定各批次血凝抗原的效價(jià),取抗原效價(jià)相同或相近的血凝抗差。ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（Enzm-kdty)LIA特性量抗原起質(zhì)的比例.加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果,或。E