柱層析的操作步驟和注意事項

柱層析的操作步驟和注意事項來過柱的體會寫些心得,期望能有所關(guān)心。

柱子可以分為:加壓,常壓,減壓。

壓力可以增加淋洗劑的流淌速度,削減產(chǎn)品收集的時間,但是會減低柱子的塔板數(shù)。

所以其他條件一樣的時候,常壓柱是效率最高的,但是時間也最長,比方自然化合物的分別,一個柱子幾個月也是有的。

減壓柱能夠削減硅膠的使用量,感覺能夠節(jié)省一半甚至更多,但是由于大量的空氣通過硅膠會使溶劑揮發(fā)〔有時在柱子外面有水汽分散〕,以及有些比較易分解的東西可能得不到,而且還必需同時使用水泵抽氣〔很大的噪音,而且時間長〕。

以前曾經(jīng)大量的過減壓柱,對它有比較深厚的感情,但是自從嘗試了加壓后,就幾乎再也沒動過減壓的念頭了。

加壓柱是一種比較好的方法,與常壓柱類似,只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。

壓力的供應(yīng)可以是壓縮空氣,雙連球或者小氣泵〔給魚缸供氣的就行〕。

非但凡在輕易分解的樣品的分別中適用。

壓力不行過大,不然溶劑走的太快就會減低分別效果。

個人覺得加壓柱在一般的有機(jī)化合物的分別中是比較適用的。

關(guān)于柱子的尺寸,應(yīng)當(dāng)是粗長的最好。

柱子長了,相應(yīng)的塔板數(shù)就高。

柱子粗了,上樣后樣品的原點就小〔反映在柱子上就是樣品層比較薄〕,這樣相對的減小了分別的難度。

試想假設(shè)柱子十厘米,而樣品就有二厘米,那么分別的難度可想而知,生怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。

,那么各組分就比較輕易得到完全分別了。

當(dāng)然承受粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了,不過這些本錢相對于產(chǎn)品來說或許就不算什么了〔有些不環(huán)保的說,不過溶劑回收重蒸后也就減小了局部鋪張〕。

現(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在1:5~10,書中寫硅膠量是樣品量的30~40倍,詳細(xì)的選擇要詳細(xì)分析。

假設(shè)所需組分和雜質(zhì)分的比較開〔~,〕,就可以少用硅膠,用小柱子〔例如200毫克的樣品,用220的柱子〕;,就要加大柱子,我覺得可以增加柱子的直徑,比方用3的,也可以減小淋洗劑的極性等等。

關(guān)于無水無氧柱,適用于對氧,水敏感,易分解的產(chǎn)品。

可以濕柱,也可以干柱。

不過在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次,由于溶劑和硅膠飽和時放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解,究竟要分別的是敏感的東東,留神不為過。

也是由于分別的東西比較敏感,所以接收瓶確定要用可密封的,遵循操作。

至于是加壓、常壓、減壓,隨需而定。

由于是操作,所以點板是個問題,假設(shè)樣品是顯色的,恭喜了,不用點板,直接看柱子上的色帶就行了。

假設(shè)樣品無色,只好預(yù)備幾十個瓶,一瓶一瓶的點,不過幾次之后就知道樣品在哪,也就可以省些了。

像我以前過一根無水無氧柱,需要六個,現(xiàn)在只一個就能把所要的全收集到。

無水無氧柱中用的比較多的是用氧化鋁作固定相。

由于硅膠中有大量的羥基暴露在外,很輕易是樣品分解,非但凡金屬有機(jī)化合物和含磷化合物。

而氧化鋁可以做成堿性、中性和酸性的,選擇余地比較大,但是比硅膠要貴些。

聽說有個方法,就是用石英做柱子,然后用254做固定相,這樣在柱子外面用紫外燈一照就知道產(chǎn)品在哪里了,沒有驗證過。

哪位做過可以提出來大家參詳參詳。

--※關(guān)于濕法、干法上樣。

濕法省事,一般用淋洗劑溶解樣品,也可以用二***甲烷、乙酸乙酯等,但溶劑越少越好,不然溶劑就成了淋洗劑了。

許多樣品在上柱前是粘乎乎的,一般沒關(guān)系。

可是有的上樣后在硅膠上又會析出,這一般都是比較大量的樣品才會毀滅,是由于硅膠對樣品的吸附飽和,而樣品本身又是比較好的固體才會發(fā)生,這就應(yīng)領(lǐng)先重結(jié)晶,得到大局部的產(chǎn)品后再柱分,假設(shè)不能重結(jié)晶那就不管它了,直接過就是了,樣品隨著淋洗劑流淌會溶解的。

有些樣品溶解性差,能溶解的溶劑又不能上柱〔比方,等,會隨著溶劑3一起走,顯色是一個很長的脫尾〕,這時就必需用干法上柱了。

樣品和硅膠的量有一種說法是1:1,我覺得是越少越好,但是要保證在旋干后,不能看到明顯的固體顆粒〔那說明有的樣品沒有吸附在硅膠上〕。

溶劑的選擇。

當(dāng)然是最廉價,最平安,最環(huán)保的了。

所以大多項選擇用石油醚,乙酸乙酯。

文獻(xiàn)中有寫用正己烷的,太貴了,除非非凡需要不要用不然銀子嘩嘩的,流的比淋洗劑還快,不過由于極性很小,有時還是非它不行。

***也可以用,但是就是輕易睡覺,留意保持糊涂別讓溶劑流干了,那樣柱子也就不爽了。

二***甲烷也有用的,但是要知道,它和硅膠的吸附是一個放熱過程,所以夏天的時候經(jīng)常會在柱子里產(chǎn)生氣泡,天氣冷的時候會好一些。

甲醇,據(jù)說能溶解局部的硅膠,所以產(chǎn)品假設(shè)想過元素分析的話要留神,應(yīng)當(dāng)經(jīng)過后繼處理,比方說重結(jié)晶等。

其他的溶劑用的相對較少,要依個人的不同需要選擇了。

由于某些緣由,用到的淋洗劑多是大包裝的〔廉價嘛〕,我們這里是用10升或25升的塑料桶裝的,就要留意這些工業(yè)品的純度是較低的。

經(jīng)常能夠從送來的大桶底部觀看有色的雜質(zhì),其他的雜質(zhì)就可想而知了,所以在比較嚴(yán)格的柱分時就要對溶劑重蒸。

當(dāng)然過原料時就可以免去這一步了,反正下面還有提純的方法。

另外溶劑在過柱子后最好也回收使用,一方面環(huán)保,另一方面也能節(jié)省局部經(jīng)費,缺點是要消耗確定的人工。

這里要留意的是,一般在過柱同時進(jìn)展的是減壓旋蒸,石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會導(dǎo)致極性的變化,一般會使得極性變大,在梯度淋洗時比較相宜,正好極性越來越大了。

在過完柱子后,溶劑最終回收要承受常壓,由于在減壓旋蒸時會有局部低沸點的雜質(zhì)一起出來,常壓時就會削減這種現(xiàn)象,假設(shè)雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反響那就慘了。

關(guān)于操作問題。

裝柱。

柱子下面的活塞確定不要涂潤滑劑,會被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的,可以承受四***節(jié)3門的。

干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)分,只要能把柱子裝實就行。

裝完的柱子應(yīng)當(dāng)要適度的緊密〔太密了淋洗劑走的太慢〕,確定要勻稱〔不然樣品就會從一側(cè)斜著下來〕。

書中寫的都是不能見到氣泡,我覺得在大多數(shù)狀況下有些小氣泡沒太大的影響,一加壓氣泡就全下來了。

當(dāng)然假設(shè)你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練了。

但是柱子更忌諱的是開裂,甭管豎的還是橫的,都會影響分別效果,甚至作廢!加樣。

用少量的溶劑溶樣品加樣,加完后將下面的活塞翻開,待溶劑層下降至石英砂面時,再加少量的低極性溶劑,然后俅蚩釗绱肆餃危話閌⑸熬突臼前咨牧恕參與淋洗劑,一開頭不要加壓,等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離〔2~4就夠了〕,再加壓,這樣避開了溶劑〔如二***甲烷等〕夾帶樣品快速下行。

淋洗劑的選擇。

~。

不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開,過柱子就用那種極性,,,由于柱子是一個屢次爬板的狀態(tài),可以通過公式的比較:,確定不如〔〕的三次方或四次方大。

4樣品的收集。

用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡。

所以假設(shè)樣品與硅膠的吸附比較強(qiáng)的話,就不輕易流出。

這樣就會發(fā)生,后面的點先出,而前面的點后出。

這時可以承受氧化鋁作固定相。

另外,收集的試管大小要以樣品量而定,非但凡小量樣品,假設(shè)用大試管,可能一根就收到了三個樣品,。

假設(shè)都用小試管那工作量又太大。

5最終的處理。

柱分后的產(chǎn)品,由于使用了大量的溶劑,其中的雜質(zhì)也會累積到產(chǎn)品中,所以假設(shè)想送分析,最好用少量的溶劑洗滌一下,由于大局部的雜質(zhì)是溶在溶劑里的,一洗根本就沒了,必要時進(jìn)展重結(jié)晶。

3另外,再過柱的時候,有時會毀滅氣泡,一是和使用的溶劑有關(guān),假設(shè)是易揮發(fā)的溶劑,如***、二***甲烷等,在室溫稍高的狀況下,很輕易毀滅這種現(xiàn)象,因此,在室溫高的時候,可以選擇沸點較高,揮發(fā)相對小的溶劑