復方沙坦酯片含量測定方法的建立

復方沙坦酯片含量測定方法的建立

氨基葡萄糖醇粉末是一種由苯磺酸氨基丙烯酸酯（aml）和氨基丙烯酸（cnc）組成的治療高血壓的復合劑。本產(chǎn)品是由各種血管緊張素受體阻滯劑和鈣抗劑組成的藥物。已有國內(nèi)外文獻報道,苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯(化學結構見圖1)的組合在降血壓1sz-33自動雙重純水蒸餾器島津高效液相色譜儀(配有SIL-20AC進樣器、SPD-20AUV檢測器、LC-20AB泵及LCSolutions工作站,日本Shimadzu公司),BT25S電子天平(北京賽多利斯科學儀器有限公司),SZ-93自動雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)。苯磺酸氨氯地平對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:100374-201204,含量質(zhì)量分數(shù)99.9%),坎地沙坦酯對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:100685-200401,含量質(zhì)量分數(shù)100.0%),復方坎地沙坦酯片(規(guī)格:坎地沙坦酯8mg/片,氨氯地平5mg/片,批號:20150501、20150502、20150503,沈陽藥科大學研制),乙腈(色譜純,天津市康科德科技有限公司),甲醇(色譜純,天津市康科德科技有限公司),磷酸二氫鉀(分析純,天津市大茂化學試劑廠),重蒸水(實驗室自制)。2方法和結果2.1溶液制備2.1.1對照品儲備液的制備取苯磺酸氨氯地平對照品約14mg(以氨氯地平計約為10mg)、坎地沙坦酯對照品約16mg,精密稱定,共同置于100mL量瓶中,用乙腈-水(體積比為3∶2)溶解并稀釋至刻度,搖勻,得混合對照品儲備液;精密量取混合對照品儲備液5mL,置于100mL量瓶中,加乙腈-水(體積比為3∶2)稀釋至刻度,搖勻,得質(zhì)量濃度分別為5.00和8.00mg·L2.1.2供試品溶液的制備取本品10片,精密稱定,研細,精密稱取適量(約相當于氨氯地平5mg、坎地沙坦酯8mg),置100mL量瓶中,加乙腈-水(體積比為3∶2)90mL,超聲(頻率:59kHz,功率:250W)處理15min后,冷卻至室溫,用乙腈-水(體積比為3∶2)稀釋至刻度,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液1mL,置10mL量瓶中稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。2.1.3白色輔助溶液的制備按處方比例稱取除苯磺酸氨氯地平、坎地沙坦酯以外的其余輔料,按“2.1.2”條下的方法操作,制成空白輔料溶液。2.2流動相、對照品、供試品溶液的制備色譜柱:ZirchromKromasilODS-1柱(150mm×4.6mm,5μm),流動相:甲醇-乙腈-20mmol·L取“2.1”條下空白輔料溶液、混合對照品溶液及供試品溶液,按“2.2”條色譜條件進樣測定,記錄色譜圖,典型色譜圖見圖2。在上述色譜條件下,苯磺酸氨氯地平與坎地沙坦酯的分離度均大于1.5,輔料對二者的含量測定均無干擾,理論塔板數(shù)按坎地沙坦酯計算應不低于3000。2.3苯磺酸氨氯地平以氨氯地平計質(zhì)量濃度為5.分別精密量取“2.1”條下混合對照品儲備液各4.0、4.5、5.0、5.5、6.0mL,分置于100mL棕色量瓶中,加乙腈-水(體積比為3∶2)溶液稀釋至刻度,搖勻,配制成苯磺酸氨氯地平(以氨氯地平計)質(zhì)量濃度分別為4.00、4.50、5.00、5.50、6.00mg·L2.4峰面積lm精密量取“2.1”條下混合對照品溶液,進樣20μL,重復進樣6次,記錄峰面積。6次重復進樣苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯峰面積RSD分別為0.4%和0.6%,表明色譜系統(tǒng)精密度良好。2.5重復性評價試驗取同一批號樣品(20150501),按“2.1.2”條下操作,平行制備供試品溶液6份,以“2.2”條下色譜條件測定,計算苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯含量,進行重復性評價。6份供試品溶液中苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯含量的RSD分別為0.8%和0.7%,結果表明方法的重復性良好。2.6空白輔料用量試驗分別取苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯對照品適量,按處方比例加入空白輔料,配制成供試品處方量中主藥成分含量質(zhì)量分數(shù)分別為80%、100%和120%的供試溶液,每個質(zhì)量濃度配制3份,在“2.2”色譜條件下進樣分析。結果均符合測定要求,見表1。2.7進樣峰面積測定取“2.1”條下供試品溶液,按“2.2”條下色譜條件,分別于0、2、4、6、8、10h進樣,記錄各峰面積。苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯在10h內(nèi)峰面積RSD分別為0.5%和0.4%。表明供試品溶液在10h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.8苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯百分標記量的測定取三批樣品,按“2.1.2”條方法操作,制備供試品溶液,另取混合對照品溶液,按“2.2”條下色譜條件分別進樣測定,按外標法以峰面積計算苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯百分標示量,結果見表2。結果表明,復方坎地沙坦酯片中苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯標示量的百分含量符合要求。3討論3.1對照品溶液的測定本品為復方制劑,故檢測波長的選擇需要兼顧二者的吸收情況。采用紫外分光光度儀,以流動相為溶劑對苯磺酸氨氯地平、坎地沙坦酯的對照品溶液分別進行掃描,結果表明苯磺酸氨氯地平在238nm處有最大吸收,坎地沙坦酯在254nm處有最大吸收。根據(jù)兩主藥在各波長下的響應,由于坎地沙坦酯在238nm處吸光強度與在254nm處吸光強度相當且制劑中的輔料在此波長處均無吸收,因此選擇238nm作為測定波長。3.2加入醋酸鹽對藥物保留時間的影響參照已有文獻[13-14]與《中華人民共和國藥典》標準及歐美藥典中的條件,最初嘗試了甲醇-水,乙腈-水系統(tǒng),發(fā)現(xiàn)苯磺酸氨氯地平不出峰。繼續(xù)對乙腈-緩沖鹽(醋酸鹽,磷酸鹽)體系考察,發(fā)現(xiàn)加入醋酸鹽時苯磺酸氨氯地平的峰形較差,不能滿足測定要求,而磷酸鹽可以提高藥物保留時間穩(wěn)定性,且峰形好。pH考察發(fā)現(xiàn)流動相pH對氨氯地平保留時間影響大,pH升高,保留時間延長,可能由于苯磺酸氨氯地平在不同pH條件下的電離平衡移動所致。坎地沙坦酯為非極性物質(zhì),在弱酸條件下峰形好且保