腫瘤個體化分子病理檢測和臨床應用

腫瘤個體化分子病理檢測

以及臨床應用

山東省醫(yī)學科學院附屬醫(yī)院病理科楊香山腫瘤個體化分子病理檢測及臨床應用一、開展腫瘤個體化分子病理檢測的意義二、分子病理檢測的標本選擇三、分子病理檢測的方法四、分子病理檢測的項目一.開展腫瘤個體化分子檢測的意義--個體化分子診斷是個體化治療的基石。--靶向治療是為攻擊特異性靶分子而設計，所以用藥前，必需檢測患者是否存在對應的靶點，才能發(fā)揮其療效。衛(wèi)生部原發(fā)性肺癌診療規(guī)范(2011)-------IV期肺癌在開始治療前，建議先獲取腫瘤組織進行表皮生長因子受體(EGFR)是否突變的檢測，根據(jù)EGFR突變狀況制定相應的治療策略。中國腫瘤界正在致力于推動腫瘤個體化分子病理診斷的規(guī)范化，同時也希望臨床能夠與病理科緊密配合，共同實現(xiàn)規(guī)范化診斷、規(guī)范化治療的目標，以造?；颊?。外科手術標本(石蠟切片）

10umX2

切片活檢標本（石蠟切片）

10umX4

切片穿刺標本（新鮮組織）至少芝麻粒大小胸腹水標本不少于10mL。二.分子病理檢測的標本選擇--盡量避開腫瘤間質(zhì)、出血灶、壞死物質(zhì)等--腫瘤細胞所占的比例也是必須要考慮的因素。--目前尚不清楚滿足分子學檢測需要的最低限度腫瘤細胞的數(shù)量。--獲得質(zhì)、量俱佳的腫瘤標本是EGFR檢測的重要前提條件，涉及到從臨床標本采集到完成最終檢測實驗等多個環(huán)節(jié)。--離體后及時（30分鐘內(nèi)）固定于10%中性緩沖福爾馬林液中。--固定時間：小標本6-12h，大標本6-48h。腫瘤組織標本病理學評估組織切片非小細胞性肺癌診斷及病理類型足夠的腫瘤細胞比例：測序法，至少50%腫瘤細胞；ARMS法，至少2%的腫瘤細胞(不考慮遺傳異質(zhì)性)足夠多的腫瘤細胞總數(shù)：>200個腫瘤細胞標識腫瘤豐富的區(qū)域富集腫瘤細胞取一張切片H&E染色用于病理評估其余白片用于提取DNA建議切片數(shù)量：

—手術標本，5μm×5

—小活檢標本，5μm×10固定包埋組織手術標本：可得足量腫瘤DNA，但DNA片段化小活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化新鮮/冰凍組織手術標本：最好標本，可得高質(zhì)量腫瘤DNA小活檢標本：量少，但腫瘤DNA質(zhì)量仍好腫瘤組織樣本的采集及病理評估PirkerR,etal.JThoracOncol2010;5(10):1706-1713.1.Dataonfile.2.KimuraH,etal.BritishJournalofCancer2006;95(10):1390-1395.3.ZhangX,etal.LungCancer2008;60(2):175-182.4.SohJ,etal.IntJCancer2006;119(10):2353-2358.胸水標本處理流程收集胸水50-500ml室溫1000轉離心10分鐘，吸去上清沉淀物-80℃保存沉淀物均勻涂玻片室溫晾干涂片涂片區(qū)域滴加75%酒精室溫晾干涂片常溫運輸涂片沉淀物用棉絮紙包裹0.1%水性伊紅漂染1秒10%中性福爾馬林固定24-48小時后續(xù)處理與組織標本相同低溫保存酒精固定涂片福爾馬林固定切片三.分子病理檢測的方法基因試劑盒價格適中、靈敏度，特異性高、所需時間短。PCR通用設備平臺基因芯片特定設備，價格高測序法檢測PCR通用設備平臺，靈敏度，特異性低、所需時間長。價格便宜

（一）技術簡介腫瘤個體化治療是指實施治療前根據(jù)患者的個體差異（基因差異），“量體裁衣”（基因檢測）地制定某個患者的治療方案，即檢查某種靶向藥物對患者是否有效或是在多種化療藥物中篩選最有效的藥物?；焸€體化可顯著提高治療效果，有效緩解疾病，避免藥物的毒副作用，提高患者的生活質(zhì)量，避免因反復嘗試不同藥物帶來的身體損害、錯過最佳治療時間以及浪費金錢。使用靶向藥物前必須基因檢測，從而判斷該藥是否適用該患者。

熒光定量PCR與基因測序法檢測基因突變的比較

熒光定量PCR與基因測序法檢測基因突變的比較基因檢測過程示意圖標本采集與運輸要求基因突變檢測方法

----國際肺癌協(xié)會共識測序法與ARMS法比較測序法和ARMS法在不同標本類型中突變率的比較

ARMS法更適合用于小標本檢測四.分子病理檢測的項目分子靶向治療基因檢測：●藥物敏感基因檢測：□ERCC1基因表達EGFR（29種、4種）□P53基因突變（6種突變）KRAS（7種突變）□BRCA1基因表達BRAF基因突變（V600E突變）□RRM1基因表達Jak2基因突變（V617F突變）□TYMS基因表達PIK3CA基因突變（5種熱點突變）□DPD基因表達C-KIT基因突變（D816V突變）□STMN1基因表達RET基因突變（M918T突變）□TYMP基因表達PDGFRA基因突變（D842V突變）□BRCA1基因表達BCR-ABL基因突變（T315I突變）□TOP2A基因表達EML4-ALK融合基因（RT-PCR法)□TUBB3基因表達