小鼠品系及給藥次數(shù)對鏈脲霉素誘導(dǎo)1型糖尿病模型的影響

小鼠品系及給藥次數(shù)對鏈脲霉素誘導(dǎo)1型糖尿病模型的影響

糖尿病是一種常見的多發(fā)性代謝疾病。近年來全球糖尿病患病率呈急劇增加趨勢,給人們的健康帶來了嚴重的威脅,對社會、家庭帶來了沉重的經(jīng)濟負擔。1型糖尿病即胰島素依賴性糖尿病能引起低血糖癥、酮癥及酮酸中毒、感染、高血壓和心腦血管病等并發(fā)癥。建立穩(wěn)定可靠的實驗動物模型是治療1型糖尿病藥物研發(fā)的必要手段。目前制備糖尿病動物模型的方法有切除胰腺法和化學藥物誘導(dǎo)法等,其中化學誘導(dǎo)法由于簡單易行得到了較為廣泛的應(yīng)用。鏈脲霉素是目前國內(nèi)外使用較多的制備糖尿病模型的藥物1材料和方法1.1材料表面1.1.1動物合格號20只3月齡健康ICR雄性小鼠購自中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所,動物合格證號:SCXK(京)2011-0012;100只8周齡健康C57BL/6J雄性小鼠購自中國食品藥品檢定研究院實驗動物資源研究所,動物合格證號:SCXK(京)2009-0017。1.1.2主試劑1.1.3材料和儀器穩(wěn)豪型(OneTouchUltra)血糖儀,購自強生(中國)醫(yī)療材料有限公司,生產(chǎn)許可證號:20000349;血糖試紙(商品名:穩(wěn)豪型)。1.2方法1.2.1鏈哌素單次注射對大鼠體內(nèi)收率的影響20只3月齡雄性健康ICR小鼠、20只8周齡雄性健康C57BL/6J小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后,禁食12h,按體質(zhì)量均隨機分為正常對照組和鏈脲霉素200mg/kg單次給藥組,正常對照組單次腹腔注射檸檬酸鈉緩沖液(0.1mol/L新鮮檸檬酸鈉緩沖液,pH4.5),200mg/kg單次給藥組單次腹腔注射鏈脲霉素溶液0.1mL/10g。1.2.2鏈哌素單次注射30只8周齡雄性健康C57BL/6J小鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后,禁食12h,按體質(zhì)量隨機分為正常對照組、鏈脲霉素100mg/kg單次給藥組和100mg/kg多次給藥組,正常對照組單次腹腔注射檸檬酸鈉緩沖液,100mg/kg單次給藥組單次腹腔注射鏈脲霉素溶液,100mg/kg多次給藥組每天腹腔注射鏈脲霉素溶液1次,連續(xù)3d,0.1mL/10g。1.2.3單次給藥組和單次給藥組單次注射鏈哌激素50只8周齡健康C57BL/6J雄性小鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后,禁食12h,按體質(zhì)量隨機分為正常對照組和鏈脲霉素100、150、180、200mg/kg單次給藥組,正常對照組單次腹腔注射檸檬酸鈉緩沖液,鏈脲霉素100、150、180、200mg/kg單次給藥組單次腹腔注射相應(yīng)劑量鏈脲霉素溶液0.1mL/10g。72h后檢測空腹血糖值,血糖值≥11mmol/L做為糖尿病小鼠成模的標準1.3小鼠體質(zhì)量和血糖值的統(tǒng)計學處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,小鼠體質(zhì)量和血糖值均以均數(shù)±標準差(ue0af±s)表示,采用單因素方差分析(OneWayANOVA),P<0.05為差異有顯著性。2結(jié)果2.1不同給藥對小鼠體重和血糖值的影響注射鏈脲霉素3d后,檢測各組ICR小鼠空腹體重和血糖值,經(jīng)統(tǒng)計學分析各組間體質(zhì)量和血糖值均無明顯差異,各組小鼠全部存活;檢測各組C57BL/6J小鼠空腹體重和血糖值,200mg/kg單次給藥3d后,小鼠體質(zhì)量明顯降低,與正常組比較均有顯著性差異(P<0.05),血糖值明顯升高,與正常組比較均有極顯著性差異(P<0.01)(表1)。結(jié)果提示,ICR小鼠對鏈脲霉素不敏感,不適合用于做糖尿病模型,C57BL/6J小鼠可用于做糖尿病模型。2.2小鼠血糖值的變化各組小鼠于注射鏈脲霉素前及注射后3、7、14及21d分別檢測空腹體重,注射后3、7、14及21d分別檢測空腹血糖值。100mg/kg單次給藥3d后,小鼠體質(zhì)量明顯降低,與正常組比較有顯著性差異(P<0.05),血糖值有一定的升高,但與正常組比較沒有顯著性差異,主要是由于組內(nèi)數(shù)據(jù)差異太大,其中,5只小鼠血糖值>11mmol/L,另外5只小鼠血糖值<11mmol/L,在給藥后3~21d期間,其體質(zhì)量和血糖值均處于平穩(wěn)狀態(tài),10只小鼠均存活。100mg/kg多次給藥3d后,小鼠體質(zhì)量明顯降低,血糖值明顯升高,與正常組比較有極顯著性差異(P<0.01),其中,8只小鼠血糖值>11mmol/L,另外2只小鼠血糖值<11mmol/L,在給藥后3~21d期間,其體質(zhì)量和血糖值均處于平穩(wěn)狀態(tài),10只小鼠均存活(表2)。2.3單次給藥對小鼠體質(zhì)量和血糖值的影響各組小鼠于注射鏈脲霉素前及注射后3、7、14、21d分別檢測空腹體質(zhì)量,注射后3、7、14及21d分別檢測空腹血糖值。100mg/kg單次給藥3d后,小鼠體質(zhì)量明顯降低,與正常組比較有顯著性差異(P<0.05),血糖值有一定的升高,但與正常組比較沒有顯著性差異,主要是由于組內(nèi)數(shù)據(jù)差異太大,其中,5只小鼠血糖值>11mmol/L,另外5只小鼠血糖值<11mmol/L,在給藥后3~21d期間,其體質(zhì)量和血糖值均處于平穩(wěn)狀態(tài),10只小鼠均存活。150mg/kg單次給藥3d后,小鼠體質(zhì)量明顯降低,與正常組比較有顯著性差異(P<0.05),血糖值明顯升高,與正常組比較有極顯著性差異(P<0.01),10只小鼠其中,7只小鼠血糖值>11mmol/L,另外3只小鼠血糖值<11mmol/L,在給藥后3~21d期間,其體質(zhì)量和血糖值均處于平穩(wěn)狀態(tài),10只小鼠均存活。180mg/kg單次給藥3d后,小鼠體質(zhì)量明顯降低,與正常組比較有顯著性差異(P<0.05),血糖值明顯升高,與正常組比較有極顯著性差異(P<0.01),10只小鼠其中,8只小鼠血糖值>11mmol/L,另外2只小鼠血糖值<11mmol/L,在給藥后3~21d期間,其體質(zhì)量和血糖值均進一步降低,給藥21d后10只小鼠存活9只。200mg/kg單次給藥3d后,小鼠體質(zhì)量明顯降低,血糖值明顯升高,與正常組比較有顯著性差異(P<0.05),10只小鼠存活8只,其中,7只小鼠血糖值>11mmol/L,另外1只小鼠血糖值<11mmol/L,在給藥后7d后,僅剩1只小鼠,而且其血糖值<11mmol/L(表3)。3鏈哌素單次給藥誘導(dǎo)1型糖尿病模型的成模率及成功率本研究首先考察了不同小鼠品系對鏈脲霉素誘導(dǎo)1型糖尿病模型的影響,結(jié)果顯示:單次腹腔注射200mg/kg的鏈脲霉素對ICR小鼠體質(zhì)量和血糖值均沒有影響,表明ICR小鼠對鏈脲霉素不敏感,不適合用于制備糖尿病模型;單次腹腔注射200mg/kg的鏈脲霉素能升高C57BL/6J小鼠的血糖值,同時也能降低其體質(zhì)量,表明C57BL/6J小鼠對鏈脲霉素較敏感,可以用于制備糖尿病模型。其次考察了不同給藥次數(shù)對鏈脲霉素誘導(dǎo)1型糖尿病模型的影響,結(jié)果顯示:100mg/kg單次給藥誘導(dǎo)糖尿病的成模率是50%,100mg/kg多次給藥誘導(dǎo)糖尿病的成模率是80%,結(jié)果提示,鏈脲霉素小劑量多次給藥誘導(dǎo)小鼠1型糖尿病模型成模率較高,但操作繁多,成本較高。最后詳細考察了不同劑量鏈脲霉素對其誘導(dǎo)1型糖尿病模型的影響,結(jié)果顯示:單次腹腔注射100、150、180、200mg/kg的鏈脲霉素均能不同程度地降低小鼠體質(zhì)量、升高血糖值,100mg/kg單次給藥誘導(dǎo)糖尿病的成模率是50%;150mg/kg單次給藥誘導(dǎo)糖尿病的成模率是70%;180mg/kg單次給藥誘導(dǎo)糖尿病的成模率是80%,但有10%的小鼠死亡;200mg/kg單次給藥致90%小鼠死亡。結(jié)果提示,單次腹腔注射鏈脲霉素(150~180mg/kg)誘導(dǎo)小鼠1型糖尿病模型小鼠死亡率低、成模率高,操作簡便且成本較低。綜合本研究結(jié)果得出,