生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座

第一章蛋白質(zhì)第一節(jié)蛋白質(zhì)在生命活動(dòng)中主要性一、蛋白質(zhì)功效多樣性

催化功效；傳遞功效；免疫功效；受體；激素；二、蛋白質(zhì)中元素組成

CHON其它50~556.5~7.319~2415~19微量生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第1頁(yè)三、蛋白質(zhì)特征元素---氮

含氮量較恒定，普通在16%左右蛋白質(zhì)系數(shù)——6.25

蛋白質(zhì)含量=樣品含氮量6.25微量元素百分率（%）微量元素百分率（%）Fe0~0.8S0.23~2.4CuIZnP0~0.8Mn生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第2頁(yè)第二節(jié)蛋白質(zhì)基本結(jié)構(gòu)單位----氨基酸COOH|H2NCH|R非蛋白氨基酸（二百余種）氨基酸蛋白氨基酸基本氨基酸稀有氨基酸一、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分類(lèi)1.結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：全部20種基本氨基酸結(jié)構(gòu)通式特點(diǎn)：-氨基酸(脯氨酸除外)L-氨基酸（甘氨酸除外）生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第3頁(yè)漢字：如丙氨酸；英文：三字母符號(hào)（Ala）和單字母符號(hào)（A）2.分類(lèi)依據(jù)各氨基酸R基帶電性將20種氨基酸共分為四組：

非極性R基氨基酸

極性不帶電荷R基氨基酸

帶負(fù)電荷R基氨基酸（酸性氨基酸）

帶正電荷R基氨基酸（堿性氨基酸）表示：生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第4頁(yè)3.稀有氨基酸：蛋白質(zhì)合成后經(jīng)加工修飾而生成氨基酸。4—羥基脯氨酸賴(lài)氨酸5—羥基賴(lài)氨酸生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第5頁(yè)二、必需氨基酸（8種）：

人體不能自我合成，必須從外界中攝取氨基酸賴(lài)氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸、色氨酸生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第6頁(yè)氨基酸丙氨酸纈氨酸亮氨酸異亮氨酸苯丙氨酸色氨酸甲硫氨酸脯氨酸三字母符號(hào)AlaValLeuIlePheTrpMetPro單字母符號(hào)AVLIFWMP非極性R基氨基酸結(jié)構(gòu)式生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第7頁(yè)NH2—CO—CH2—CH2—CH—COO

|NH3

H—CH—COO

|NH3

HO—CH2—CH—COO

|NH3

|CH3HO—CH—CH—COO

|NH3

HS—CH2—CH—COO

|NH3

—CH2—HO—CH—COO

|NH3

NH2—CO—CH2—CH—COO

|NH3

結(jié)構(gòu)式氨基酸甘氨酸絲氨酸蘇氨酸半胱氨酸酪氨酸天冬酰胺谷氨酰胺三字母符號(hào)GlySerThrGysTyrAsnGln單字母符號(hào)GSTCYNQ極性不帶電荷R基氨基酸生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第8頁(yè)NH3

—CH2—CH2—CH2—CH2—CH—COO

|NH3

NH2—C—NH—CH2—CH2—CH2—CH—COO

|NH3

NH2

||HNNH+—CH2—CH—COO

|NH3

–OOC—CH2—CH2—CH—COO

|NH3

–OOC—CH2—CH—COO

|NH3

氨基酸天冬氨酸谷氨酸三字母符號(hào)Asp

Glu單字母符號(hào)DEKRHLys

Arg

HIs賴(lài)氨酸精氨酸組氨酸酸性R基氨基酸堿性R基氨基酸結(jié)構(gòu)式生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第9頁(yè)三、氨基酸理化性質(zhì)1.普通性質(zhì)：溶解度：可溶于水、稀酸、稀堿中

旋光性：丙氨酸+1.8、半胱氨酸-16.5、脯氨酸-86.0

熔點(diǎn)：大部分在200℃以上，丙氨酸297、絲氨酸2802.兩性解離和等電點(diǎn)：氨基酸由酸性基團(tuán)和堿性基團(tuán)，能夠發(fā)生兩性解離：R+R±R–酸堿生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第10頁(yè)等電點(diǎn)定義：某一氨基酸凈電荷等于零時(shí)溶液pH值為該氨基酸等電點(diǎn)不一樣氨基酸有不一樣等電點(diǎn)等電點(diǎn)時(shí)特點(diǎn)：溶解度下降用途：可依據(jù)氨基酸等電點(diǎn)來(lái)分離不一樣氨基酸，如味精生產(chǎn)時(shí)將pH值調(diào)到3.22，谷氨酸沉淀下來(lái)。生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第11頁(yè)pI計(jì)算法：pI=（pK左′+pK右′

）/2

pK左′

:pI處左側(cè)pK′值，pK右′

:pI處右側(cè)pK′值。如：甘氨酸兩性解離為：酸堿pK1′

=2.34pk2′

=9.60pI=(2.34+9.60)/2=5.97生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第12頁(yè)賴(lài)氨酸兩性解離為：與等電點(diǎn)相關(guān)pK值為：pK2′

=8.95pK3′

=10.53

pI=9.74

一、二、三組氨基酸：pI=（pK1′+pK2′

）/2第四組氨基酸：pI=（pK2′

+pK3′

）/2生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第13頁(yè)吸收光譜

全部20種基本氨基酸在可見(jiàn)光區(qū)都無(wú)光吸收，在近紫外區(qū)三種芳香氨基酸含有紫外吸收，即：苯丙氨酸—257nm酪氨酸—275nm色氨酸—280nm生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第14頁(yè)氨基酸表觀解離常數(shù)和等電點(diǎn)生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第15頁(yè)用途：可用于氨基酸定性和定量測(cè)定

脯氨酸是亞氨基酸，只有一步反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物為黃色。水合茚三酮還原茚三酮氨基酸產(chǎn)物（藍(lán)紫色,m=570nm）4.氨基酸主要化學(xué)反應(yīng)

（1）茚三酮反應(yīng)生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第16頁(yè)（2）Sanger反應(yīng)氨基酸與二硝基氟苯（DNFB）反應(yīng)，生成二硝基苯代氨基酸（DNP—氨基酸）二硝基氟苯氨基酸DNP—氨基酸(黃色)室溫用途：測(cè)定肽鏈N-端氨基酸生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第17頁(yè)（3）Edman反應(yīng)異硫氰酸苯酯與氨基酸反應(yīng)生成PTH—氨基酸異硫氰酸苯脂（PITC）弱堿PTC—氨基酸PTH—氨基酸用途：蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)序列測(cè)定生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第18頁(yè)樣品1樣品2被交換離子洗脫液+++離子交換劑配對(duì)離子氨基酸平衡離子5.氨基酸分離方法

離子交換層析生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第19頁(yè)第三節(jié)肽一、概念二、書(shū)寫(xiě)方式

左

右，N

C，可用英文或漢字簡(jiǎn)寫(xiě)，中間用一短杠相連，氨基端加“H”，羧基端加“OH”，每一個(gè)氨基酸要叫氨基酸殘基。例：H-丙-甘-谷-精…………苯丙-組-OHH-Ala-Gly-Glu-Arg…………Phe-His-OH主肽鏈

多肽鏈中由共價(jià)鍵連接成連續(xù)鏈狀結(jié)構(gòu)

肽單位主肽鏈中重復(fù)單位N端C端肽單位肽單位生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第20頁(yè)因?yàn)橛袔€基，所以有氧化還原反應(yīng)GSH+GSH

GS—SG+2H++2e-谷胱甘肽是生物體內(nèi)主要氧化還原物質(zhì)，對(duì)細(xì)胞起到了保護(hù)作用，另外，還是其它細(xì)胞保護(hù)劑還原劑三、主要寡肽及其作用谷胱甘肽（GSH）：谷氨酸半胱氨酸甘氨酸生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第21頁(yè)第四節(jié)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)一、一級(jí)結(jié)構(gòu)：定義：蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸排列次序，包含二硫鍵位置特點(diǎn)：基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定結(jié)構(gòu)牛胰島素一級(jí)結(jié)構(gòu)（局部）：牛胰島素由A、B兩條肽鏈組成，A鏈20個(gè)氨基酸殘基，B鏈30個(gè)氨基酸殘基二、二級(jí)結(jié)構(gòu)：（1）概念：二級(jí)結(jié)構(gòu)定義—在規(guī)則氫鍵指導(dǎo)下局部多肽鏈在空間排列方式

因?yàn)閱捂I能夠自由旋轉(zhuǎn)，所以從理論上說(shuō)肽鏈有沒(méi)有數(shù)種構(gòu)象，但實(shí)際上，蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)只有少數(shù)幾個(gè)，這是因?yàn)殡逆溤谛纬煽臻g結(jié)構(gòu)時(shí)要受到各種原因限制，這些原因有：SSH-Gly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Ala-Ser-Val-Cys-Ser-……AH-Phe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His-Leu-Val-……BSS生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第22頁(yè)

肽鍵平面—因?yàn)殡逆I雙鍵性質(zhì)，使得形成肽鍵N、C原子以及它們相連四個(gè)原子形成一個(gè)平面，這個(gè)平面就叫肽鍵平面。形成原因：p－

共軛，肽鍵不能自由旋轉(zhuǎn)

結(jié)果：形成剛性平面生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第23頁(yè)二面角—和兩個(gè)構(gòu)象角稱(chēng)為二面角NNOOCCC

C

C

HH

生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第24頁(yè)

關(guān)鍵點(diǎn)：?jiǎn)捂溣倚蝗?.6殘基上升0.54nm形成5→1氫鍵且全部平行R－基指向外側(cè)（2）種類(lèi)（4類(lèi)）a－螺旋：生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第25頁(yè)

－折疊：關(guān)鍵點(diǎn)：肽鏈伸展，形成鏈間氫鍵（成為片層），R-基處于片層上下生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第26頁(yè)反平行b－折疊平行b－折疊

－折疊有平行和反平行兩種生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第27頁(yè)

－轉(zhuǎn)角（回折）：肽鏈180°旋轉(zhuǎn)，氫鍵連接；無(wú)規(guī)則卷曲—轉(zhuǎn)角生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第28頁(yè)卵溶菌酶無(wú)規(guī)則卷曲生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第29頁(yè)三、超二級(jí)結(jié)構(gòu)：概念：相鄰二級(jí)結(jié)構(gòu)單元相互作用形成聚合體DE種類(lèi)：（A）

X(B、C)

波折（D）回形拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)(E)生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第30頁(yè)生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第31頁(yè)四、結(jié)構(gòu)域生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第32頁(yè)乳酸脫氫酶結(jié)構(gòu)域刀豆蛋白結(jié)構(gòu)域彈性蛋白酶三級(jí)結(jié)構(gòu)與結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白G生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第33頁(yè)如：卵溶菌酶一條肽鏈，124個(gè)氨基酸殘基，分子量為14600五、三級(jí)結(jié)構(gòu)：定義：蛋白質(zhì)分子中全部原子空間排列生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第34頁(yè)

肌紅蛋白是肌肉中運(yùn)輸氧蛋白質(zhì)，一條肽鏈，153個(gè)氨基酸殘基，分子量為16700，含一個(gè)血紅素輔基，氧分子就結(jié)合在它鐵上。整個(gè)分子有8個(gè)

-螺旋，而且有

-轉(zhuǎn)角和無(wú)規(guī)則卷曲，不過(guò)無(wú)

-折疊。生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第35頁(yè)三級(jí)結(jié)構(gòu)特征：①高低不平IgG結(jié)構(gòu)②疏密不一③近似球狀醛糖脫氫酶生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第36頁(yè)③外親內(nèi)疏生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第37頁(yè)如：血紅蛋白含有四個(gè)亞基，為

2

2，每個(gè)亞基含一個(gè)血紅素，每個(gè)血紅素可結(jié)合一個(gè)氧分子。

亞基含141個(gè)氨基酸殘基，

亞基含146個(gè)氨基酸殘基。-亞基-亞基

-亞基

-亞基血紅素血紅素Fe2+Fe2+六、四級(jí)結(jié)構(gòu)：概念：蛋白質(zhì)分子中亞基在空間排列生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第38頁(yè)Hemoglobin空間結(jié)構(gòu)生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第39頁(yè)四級(jí)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)-----對(duì)稱(chēng)性生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第40頁(yè)四級(jí)結(jié)構(gòu)優(yōu)越性：生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第41頁(yè)

氫鍵、鹽鍵、疏水作用力、二硫鍵、配位鍵、范德華引力

氫鍵鹽鍵疏水作用力二硫鍵配位鍵范德華引力二級(jí)結(jié)構(gòu)√××××√三級(jí)結(jié)構(gòu)√√√√√√四級(jí)結(jié)構(gòu)√√√××√七、維持蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)作用力生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第42頁(yè)一、一級(jí)結(jié)構(gòu)與功效關(guān)系：一級(jí)結(jié)構(gòu)與功效有親密關(guān)系1.

氨基酸對(duì)功效主要性假如改變氨基酸是蛋白質(zhì)執(zhí)行功效所必需，則這種氨基酸改變對(duì)功效影響極大，假如改變氨基酸對(duì)功效無(wú)貢獻(xiàn)，則它們改變基本不影響蛋白質(zhì)功效。如RNA酶，假如將其N(xiāo)-端三個(gè)氨基酸去掉，酶功效基本不變，不過(guò)，假如將組12改變，則酶失去活性。

第五節(jié)結(jié)構(gòu)與功效關(guān)系生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第43頁(yè)鐮刀狀貧血?。壕褪且?yàn)檠t蛋白-鏈上第六位谷氨酸被纈氨酸代替，使得血紅蛋白分子在氧分壓低情況下輕易聚合，形成桿狀多聚體，致使紅細(xì)胞由正常圓盤(pán)狀成為鐮刀狀，血液流動(dòng)受到妨礙。生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第44頁(yè)同源蛋白：不一樣生物中含有同一功效蛋白質(zhì)。它們特點(diǎn)是其一級(jí)結(jié)構(gòu)中，與功效直接相關(guān)殘基相同，而其它殘基有差異，這些殘基是能夠改變，這種改變往往與生物進(jìn)化相關(guān)。例：Cytc與進(jìn)化生物殘基改變數(shù)生物殘基改變數(shù)生物殘基改變數(shù)黑猩猩0狗11狗魚(yú)23恒河猴1騾11蛾31兔9馬12小麥35袋鼠10雞、火雞13面包霉43鯨10響尾蛇14酵母44牛、豬、羊10韌齒龜152.種屬差異與分子進(jìn)化生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第45頁(yè)一定結(jié)構(gòu)，一定功效結(jié)構(gòu)改變，功效改變結(jié)構(gòu)破壞，功效破壞二、空間結(jié)構(gòu)與功效關(guān)系生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第46頁(yè)第六節(jié)蛋白質(zhì)理化性質(zhì)

一、兩性解離與等電點(diǎn)：概念：蛋白質(zhì)凈電荷等于零時(shí)環(huán)境pH值。不一樣蛋白質(zhì)其等電點(diǎn)不一樣：胃蛋白酶：1.0～2.5；胰島素：5.3～5.35；血紅蛋白：7.07；魚(yú)精蛋白：12.0～12.4特點(diǎn)：溶解度降低，可用于蛋白質(zhì)分離電泳：大分子化合物在電場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)過(guò)程。原理：不一樣蛋白電荷正負(fù)和數(shù)量不一樣，分子量不一樣，形狀不一樣，所以在電場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)速度不一樣。方向與速度判別：pI–pH，正負(fù)為方向，數(shù)值為速度。用途：分離判定蛋白質(zhì)等大分子化合物NH3+COOHP+NH3+COO—P±NH2COO—P-生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第47頁(yè)點(diǎn)樣處蛋白蛋白蛋白

1蛋白清蛋白依據(jù)載體不一樣，電泳有膜電泳、凝膠電泳等如：人血清蛋白醋酸纖維膜電泳圖譜?，F(xiàn)有一混合蛋白質(zhì)樣品，內(nèi)含A、B、C、D三種蛋白，其等電點(diǎn)分別為：A10.8B7.5C5.6D3.2，指出在pH7.5緩沖液中電泳時(shí)，它們各自位置。依據(jù)pI–pH，結(jié)果為：A

10.8–7.5=3.3B7.5–7.5=0C5.6–7.5=–1.9D3.2–7.5=–4.3它們電泳后位置為：點(diǎn)樣處ABCD–+凝膠電泳例題生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第48頁(yè)蛋白質(zhì)分子量小幾萬(wàn)，大可達(dá)幾百萬(wàn)，其大小為1~100nm，已經(jīng)到達(dá)膠體質(zhì)點(diǎn)范圍，同時(shí)，蛋白質(zhì)分子外表為親水表面，所以，蛋白質(zhì)屬于親水膠體，而且是穩(wěn)定膠體。穩(wěn)定原因：水化膜，同種電荷+二、膠體性質(zhì)+生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第49頁(yè)+±－+±－酸堿加脫水劑不過(guò)穩(wěn)定是相正確，假如改變條件其穩(wěn)定性就會(huì)發(fā)生改變，如加入有機(jī)溶劑則會(huì)脫去水化膜，改變pＨ就會(huì)改變其電荷。生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第50頁(yè)透析：大分子化合物不能經(jīng)過(guò)半透膜性，可用于蛋白質(zhì)脫鹽沉降：在強(qiáng)離心場(chǎng)中，大分子化合物向離心力方向移動(dòng)現(xiàn)象沉降系數(shù)（s）：?jiǎn)挝浑x心場(chǎng)強(qiáng)單位時(shí)間內(nèi)蛋白質(zhì)沉降距離，其單位是S（注意s與S區(qū)分），如某蛋白沉降系數(shù)為70，則表示為70S。蛋白質(zhì)S值大小能夠近似表示蛋白質(zhì)分子量相對(duì)大小。生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第51頁(yè)三、變性概念：物理化學(xué)原因影響，空間結(jié)構(gòu)破壞，性質(zhì)改變，功效喪失核糖核酸酶變性過(guò)程生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第52頁(yè)原因：物理：熱、高能射線，振動(dòng)；化學(xué)：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、變性劑。原因：空間結(jié)構(gòu)破壞。性質(zhì)改變：溶解度下降，反應(yīng)活性改變。標(biāo)志：生物活性喪失生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第53頁(yè)鹽析：高濃度中性鹽使蛋白質(zhì)沉淀現(xiàn)象原因：破壞了穩(wěn)定膠體兩個(gè)原因四、沉淀：NH4+SO42-NH4+SO42-SO42-NH4+NH4+SO42-++++++NH4+NH4+SO42-NH4+SO42-NH4+SO42-SO42-++++++++++++SO42-SO42-SO42-SO42-SO42-SO42-靜電荷為零優(yōu)點(diǎn)：不影響蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)，慣用于蛋白質(zhì)分離慣用鹽類(lèi)：硫酸銨和氯化鈉鹽溶：低濃度中性鹽使蛋白質(zhì)溶解度增加現(xiàn)象變性沉淀；沉淀劑沉淀：有機(jī)溶劑、重金屬鹽、一些酸類(lèi)，如苦味酸、三氯乙酸；相互沉淀生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第54頁(yè)280nm，因?yàn)橛斜奖彼?、酪氨酸和色氨?可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定六呈色反應(yīng)：茚三酮反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)：可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定（540nm）五紫外吸收：生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第55頁(yè)一、蛋白質(zhì)分離純化依據(jù)

大?。ù笮膸装俚揭话偃f(wàn)。普通10,000~150,000）形狀（球型、雪茄型蛋白在電泳、梯度離心、層析時(shí)摩擦阻力、擴(kuò)散速度不一樣）電荷（天冬氨酸、谷氨酸占優(yōu)勢(shì)，pH=7時(shí)帶負(fù)電荷，為酸性蛋白；賴(lài)氨酸、和精氨酸殘基占優(yōu)勢(shì)，pH=7時(shí)帶正電荷，為堿性蛋白）等電點(diǎn)（蛋白質(zhì)等電點(diǎn)普通為4.0-10.0之間）電荷分布（荷電殘基不均勻分布或成簇分布時(shí)往往能以適當(dāng)強(qiáng)度與陰陽(yáng)兩種離子交換樹(shù)脂作用）第七節(jié)蛋白質(zhì)分離純化生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)專(zhuān)家講座第56頁(yè)疏水性（多數(shù)疏水性氨基酸蠶基藏在蛋白內(nèi)部，但也有一些見(jiàn)于表面。鹽濃度增大時(shí)往往露出疏水表面）溶解度（溶解度從基本不溶<10ug/ml到極易溶解>300mg/ml,pH、離子強(qiáng)度、離子性質(zhì)、溫度、溶液極性等影響溶解度）密度（富含磷酸鹽蛋白高密度1.8mg