藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座

第一節(jié)吡啶類藥品分析

（一）經(jīng)典藥品結(jié)構(gòu)異煙肼尼可剎米一、基本結(jié)構(gòu)與主要化學(xué)性質(zhì)硝苯地平藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第1頁（二）主要化學(xué)性質(zhì)1.弱堿性母核吡啶環(huán)上氮原子顯弱堿性2.還原性酰肼基含有較強還原性3.吡啶環(huán)特征可發(fā)生開環(huán)反應(yīng)藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第2頁（一）吡啶環(huán)開環(huán)反應(yīng)

本反應(yīng)適合用于吡啶環(huán)α、α’位為無取代基異煙肼和尼可剎米。1.戊烯二醛反應(yīng)

尼可剎米與溴化氰、苯胺反應(yīng)生成黃色至黃棕色戊烯二醛衍生物。二、鑒別試驗2.二硝基氯苯反應(yīng)

異煙肼與2,4-二硝基氯苯反應(yīng)，在堿性溶液中顯紫紅色。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第3頁1.還原反應(yīng)(銀鏡反應(yīng))

異煙肼加水溶解后，加氨制硝酸銀試液，即有黑色渾濁出現(xiàn)，并生成氮和金屬銀，可在管壁上產(chǎn)生銀鏡。+AgNO3+H2O4Ag+N2（二）酰肼基團反應(yīng)藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第4頁（三）形成沉淀反應(yīng)

本類藥品含有吡啶環(huán)結(jié)構(gòu)，可與重金屬鹽類（如氯化汞、硫酸銅、碘化鉍鉀）及苦味酸等試劑形成沉淀。

（四）分解產(chǎn)物反應(yīng)

尼可剎米與氫氧化鈉試液加熱，即有二乙胺臭味逸出，能使?jié)駶櫦t色石蕊試紙變藍(lán)色。2.縮合反應(yīng)

異煙肼含有未被取代酰肼基，與芳醛縮合形成腙，析出黃色結(jié)晶，可測定其熔點（m.p228～231℃）。最慣用芳醛為香草醛，其次是對二甲氨基苯甲醛、水楊醛等。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第5頁1、對比最大吸收或最小吸收波長

按藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)將供試品用要求溶劑配成一定濃度供試液，在要求波長區(qū)域內(nèi)測定最大吸收波長（λmax）

（或最小吸收波長λmin）。與藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中指明最大吸收波長（或最小吸收波長）對比，假如相同可因為是同一藥品。2、對比百分吸收系數(shù)

按藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)將供試品用要求溶劑配成一定濃度溶液，在要求波長下測定吸收度，計算出百分吸收系數(shù)并進(jìn)行比較。（五）紫外吸收光譜特征藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第6頁三、相關(guān)物質(zhì)檢驗（一）異煙肼中游離肼檢驗

異煙肼是一個不穩(wěn)定藥品，其中游離肼是由制備時原料引入，或貯存過程中降解而產(chǎn)生。而肼又是一個誘變劑和致癌物質(zhì)，所以國內(nèi)外藥典多數(shù)要求了異煙肼原料藥及其制劑中游離肼限量檢驗。慣用方法有薄層色譜法，比濁法和差示分光光度法。

1、薄層色譜法

中國藥典對異煙肼原料和注射用異煙肼中游離肼檢驗，均采取薄層色譜法。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第7頁2、比濁法JP（14）采取檢驗方法。3、差示分光光度法（二）尼可剎米中相關(guān)物質(zhì)檢驗

Ch.P采取TLC高低濃度對照法進(jìn)行檢驗

（三）硝苯地平中相關(guān)物質(zhì)檢驗硝苯地平遇光極不穩(wěn)定，可發(fā)生光化學(xué)歧化作用降解為硝苯吡啶衍生物及亞硝基吡啶衍生物，Ch.P采取HPLC法進(jìn)行檢驗。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第8頁（喹核堿）（喹啉環(huán)）H2SO4·2H2O

本類藥品具吡啶與苯環(huán)稠合而成喹啉雜環(huán)，本類最常見經(jīng)典藥品有硫酸奎寧、硫酸奎尼丁、鹽酸環(huán)丙沙星、喜樹堿等。第二節(jié)喹啉類藥品分析硫酸奎寧（quininesulfate)一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)（一）經(jīng)典藥品結(jié)構(gòu)藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第9頁硫酸奎尼?。╭uinidinesulfate)H2SO4·2H2O藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第10頁鹽酸環(huán)丙沙星·HCl·H2O藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第11頁（二）主要化學(xué)性質(zhì)1、堿性：喹啉環(huán)上N含有堿性。2、旋光性3、熒光特征藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第12頁二、鑒別試驗（一）綠奎寧反應(yīng)

奎寧和奎尼丁互為異構(gòu)體，結(jié)構(gòu)中都有6位含氧喹啉衍生物，能夠發(fā)生綠奎寧反應(yīng)，即奎寧鹽經(jīng)氯水（或溴水）氯（溴）化反應(yīng)，再加氨水處理，生成翠綠色二醌基吲胺胺鹽。（二）光譜特征1.紫外吸收光譜特征2.熒光光譜特征3.紅外光譜特征（三）無機酸鹽藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第13頁三、特殊雜質(zhì)檢驗（一）硫酸奎寧中特殊雜質(zhì)檢驗檢驗項目主要有：1.酸度2.氯仿－乙醇中不溶物3.其它金雞納堿

TLC高低濃度對比法檢驗藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第14頁（二）鹽酸環(huán)丙沙星中特殊雜質(zhì)檢驗檢驗項目主要有：

1.酸度2.溶液澄清度與顏色3.相關(guān)物質(zhì)

HPLC法中歸一化法檢驗藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第15頁第三節(jié)托烷類藥品托烷類藥品大多數(shù)是由莨菪烷衍生氨基醇與不一樣有機酸縮合成酯生物堿，常見有顛茄生物堿和古柯生物堿，依據(jù)其結(jié)構(gòu)特征均屬于雜環(huán)類藥品?，F(xiàn)以最慣用經(jīng)典藥品硫酸阿托品和氫溴酸東莨菪堿為例，就其判別和雜質(zhì)檢驗相關(guān)問題進(jìn)行討論。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第16頁.HBr.3H2O氫溴酸東莨菪堿2.H2SO4.H2O硫酸阿托品一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)經(jīng)典藥品結(jié)構(gòu)（一）藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第17頁（二）主要化學(xué)性質(zhì)1.水解性本類藥品含有酯結(jié)構(gòu)，易水解。如阿托品水解后生成莨菪醇與莨菪酸。2.堿性

阿托品和東莨菪堿五元脂環(huán)上有叔氮原子，含有較強堿性。3.旋光性

阿托品和東莨菪堿均含有不對稱碳原子而呈左旋體，比旋度－24～－27。。阿托品為莨菪堿消旋體。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第18頁二、鑒別試驗（一）托烷生物堿普通判別試驗（Vitaili反應(yīng)）（二）氧化反應(yīng)

本類藥品水解后生成莨菪酸，可與硫酸和重鉻酸鉀在加熱條件下，發(fā)生氧化反應(yīng)，生成苯甲酸，同時有類似苦杏仁臭味。（三）沉淀反應(yīng)與生物堿沉淀試劑生成沉淀。（四）硫酸鹽與溴化物反應(yīng)該反應(yīng)為阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿等托烷類生物堿均顯莨菪酸結(jié)構(gòu)特征反應(yīng)，與發(fā)煙硝酸加熱處理得黃色三硝基衍生物，遇醇制氫氧化鉀即顯深紫色。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第19頁※（五）色譜法當(dāng)前慣用薄層色譜吸附劑多為硅膠，生物堿類藥品必須以游離堿形式才能順利遷移（展開）。若是以鹽形式存在，則在硅膠薄層板上吸附太牢，致使色斑嚴(yán)重拖尾。這是含氮生物堿藥品色譜分離判別關(guān)鍵問題，為使生物堿呈游離狀態(tài)分離判別，常采取兩種方法：1、在展開劑中加入少許堿性試劑

如濃氨水、二乙胺、有機脂烴胺類，方便中和與堿結(jié)合酸和硅膠弱酸性，使生物堿游離。2、硅膠薄層板用堿處理

即取硅膠適量，加入一定量氫氧化鈉溶液攪拌均勻，鋪制成堿性薄層板。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第20頁三、氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質(zhì)檢驗

氫溴酸東莨菪堿是從茄科植物顛茄、白曼陀羅、莨菪等提取得到莨菪堿氫溴酸鹽。依據(jù)其生產(chǎn)工藝，本品在生產(chǎn)和貯藏過程中可能引入特殊雜質(zhì)主要有：1.酸度2.其它生物堿3.易氧化物藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第21頁第四節(jié)吩噻嗪類藥品分析一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特點與經(jīng)典藥品

吩噻嗪藥品為苯并噻嗪衍生物，其分子結(jié)構(gòu)中均含有共同硫氮雜蒽母核，基本結(jié)構(gòu)為：藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第22頁本類藥品結(jié)構(gòu)上差異，主要表現(xiàn)在母核2位上R2取代基和N10位上R1取代基不一樣。R2基團通常為—H、—Cl、—CF3、—COCH3、—SCH2CH3等，R1基團則為含有2～3個碳鏈二甲或二乙胺基，或為含氮雜環(huán)如哌嗪和哌啶衍生物等。.HCl.HCl鹽酸異丙嗪鹽酸氯丙嗪藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第23頁（二）主要化學(xué)性質(zhì)1、含有紫外和紅外吸收光譜特征本類藥品紫外特征吸收，主要由母核三環(huán)π系統(tǒng)所產(chǎn)生。普通含有三個峰值，即在204～209nm（205nm附近）、250～265nm（254nm）附近、和300～325nm（300nm附近）。最強峰多在250～265nm（ε為2.5×10-4～3×10-4）；本類藥品母核中S為二價，易氧化，其氧化產(chǎn)物為亞砜和砜,它們含有四個吸收峰，與未氧化吩噻嗪類母核吸收峰不一樣。（SO）（S）00藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第24頁2、易氧化呈色本類藥品硫氮雜蒽母核中二價S易氧化，其母核易被氧化成亞砜、砜而呈色。3、與金屬離子絡(luò)合呈色

未被氧化二價S能與金屬鈀離子形成有色配位化合物。其氧化產(chǎn)物亞砜、砜則無此反應(yīng)。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第25頁（一）紫外特征吸收和紅外吸收光譜（二）顯色反應(yīng)

1、氧化劑氧化顯色2、與鈀離子絡(luò)合顯色

吩噻嗪類藥品分子結(jié)構(gòu)中未被氧化二價S能與金屬鈀離子絡(luò)合形成有色絡(luò)合物。（三）分解產(chǎn)物反應(yīng)二、鑒別試驗藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第26頁（一）鹽酸異丙嗪雜質(zhì)起源與檢驗1.合成工藝2.雜質(zhì)起源合成過程中因為一些副反應(yīng)產(chǎn)生中間體、異構(gòu)體。3.檢驗方法TLC法（二）鹽酸硫利達(dá)嗪中相關(guān)物質(zhì)檢驗TLC法檢驗三、特殊雜質(zhì)檢查藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第27頁第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥品一、結(jié)構(gòu)特征與經(jīng)典藥品結(jié)構(gòu)

苯并二氮雜卓類藥品為含氮雜原子、六元和七元環(huán)雙并合而成有機化合物，其中1,4-苯并二氮雜卓類藥品是當(dāng)前臨床應(yīng)用最廣泛鎮(zhèn)靜劑。中國藥典收載有氯氮卓（利眠寧），并將安定和硝基安定更名為地西泮和硝西泮。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第28頁地西泮氯氮卓阿普唑侖藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第29頁（一）化學(xué)判別

1、沉淀反應(yīng)

2、水解后重氮化-偶合反應(yīng)

氯氮卓和奧沙西泮加鹽酸溶液加熱煮沸水解后，水解產(chǎn)物可有此反應(yīng)。而地西泮水解后則無此反應(yīng)。3、硫酸-熒光反應(yīng)4、分解產(chǎn)物反應(yīng)5、氯化銅焰色反應(yīng)二、鑒別試驗（12）（二）紫外和紅外吸收光譜（三）薄層色譜法藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第30頁（一）相關(guān)物質(zhì)檢驗1.地西泮中相關(guān)物質(zhì)檢驗2.氯氮卓中相關(guān)物質(zhì)檢驗3.氯氮卓中相關(guān)物質(zhì)反相高效液相色譜法檢驗三、特殊雜質(zhì)檢查（二）降解產(chǎn)物檢驗

地西泮注射液采取

HPLC法檢驗藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第31頁第六節(jié)含量測定本章五類藥品慣用含量測定方法主要有六種一、非水溶液滴定法非水溶液滴定法，是國內(nèi)外藥典采取較多含測方法，尤其是對弱堿類藥品及其鹽含測。弱堿及其鹽在水溶液中用標(biāo)準(zhǔn)酸液直接進(jìn)行滴定沒有顯著滴定突躍，滴定終點難于掌握。若采取非水酸性溶劑作為滴定介質(zhì)，則可顯著提升弱堿性藥品相對堿度，使滴定突躍增大，滴定反應(yīng)順利完成。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第32頁

除少數(shù)藥品以游離堿形式供分析外，絕大多數(shù)為鹽類（HCl鹽與H2SO4鹽）。這些鹽類滴定過程，實際上是一個置換滴定，即強酸滴定液置換出與游離堿結(jié)合較弱酸。反應(yīng)原理可用以下通式表示：BH+·A-+HClO4BH+·ClO4-+HA基本原理：

因為被置換出來HA酸性強弱不一樣，所以對滴定反應(yīng)影響也不一樣。當(dāng)HA酸性較強時，反應(yīng)不能定量完成，必須采取辦法除去或降低反應(yīng)產(chǎn)生HA酸性，使反應(yīng)順利完成。所以，必須依據(jù)不一樣情況采取對應(yīng)測定條件。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第33頁二、鈰量法本法是氧化還原法，硝苯地平與吩噻嗪類藥品可采取本法進(jìn)行測定。因為這些藥品含有還原性，在酸性介質(zhì)中能夠用硫酸鈰滴定液直接滴定。前者用鄰二氮沸指示劑，后者不加指示劑而是利用藥品本身顏色改變指示終點。（一）硝苯地平測定詳見P193（二）吩噻嗪類藥品測定滴定開始時，藥品先失去一個電子形成一個紅色自由離子，到終點時吩噻嗪類藥品均失去兩個電子，紅色消失而指示終點。也可采取電位法或永停滴定法指示終點。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第34頁三、比色法（一）酸性染料比色法本法是在適當(dāng)pH介質(zhì)中利用酸性染料（如磺酸酞類）與堿性藥品定量結(jié)合呈色，采取比色法測定其含量。酸性染料是指含有酸性基團酸堿指示劑(磺酸酞類)，如溴酚藍(lán)、溴麝香草酚藍(lán)、溴甲酚綠、溴甲酚紫等。本法含有一定專屬性和準(zhǔn)確度，樣品需用量少，靈敏度高，適合用于樣品量少、小劑量藥品及其制劑或體內(nèi)堿性藥品測定。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第35頁1、基本原理

在適當(dāng)pH介質(zhì)中，堿性藥品（B）可與氫離子結(jié)合成陽離子（BH+），一些酸性染料在此條件下解離為陰離子（In-）

，與上述陽離子定量地結(jié)合生成有色配位化合物（BH+In-），即離子對，能夠被一些有機溶劑定量提取，在一定波優(yōu)點測定該溶液（有色離子對）吸收度，即可求得堿性藥品含量。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第36頁即：水相（一定pH條件下）：B+H+BH+生物堿鹽陽離子HInH++In-酸性染料陰離子BH++In-（BH+·In-）水相離子對（有色）（BH+·In-）有機相有機相：BH+·In-被有機溶劑提取，使有機相呈色。剩下酸性染料留于水相。比色測定：定量分離出該呈色有機提取液，脫水后，測定其吸收度，求出有機堿含量。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第37頁（1）水相最適pH值選擇2.影響原因

水相pH值大小極為主要。只有選擇適當(dāng)pH才能使有機堿性藥品變成陽離子（BH+），同一條件下，酸性染料才能電離出足夠陰離子（In－），陰陽離子才能定量生成有色離子對（BH+In-），并完全溶于有機溶劑中而過量酸性染料完全保留在水相中，最終才能確保定量測定。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第38頁如水相pH值過低（H+），抑制了HIn離解成In-，使In-濃度降低。影響離子正確形成；如水相pH值過高，使有機堿藥品游離，離子對濃度也降低，此時有機相萃取不是離子對而是有機堿本身。故所選pH應(yīng)使有機堿全部以BH+形式存在，酸性染料大部分以In-形式存在，方便于二者定量結(jié)合。普通是以有機溶劑提取液吸收度最大，空白值最低時pH值最好。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第39頁（3）有機溶劑選擇（2）酸性染料及其濃度選擇（4）水分影響

有機相中應(yīng)嚴(yán)防混入水分。不然，微量水分可使有機相（如氯仿層）發(fā)生混濁，影響比色，同時因為帶入了水相中過量染料，而影響測定結(jié)果。有機溶劑中混入水分，能夠經(jīng)過加入脫水劑（如無水硫酸鈉）或經(jīng)濾紙濾過除去。3、應(yīng)用實例

阿托品注射液含量測定。氫溴酸東莨菪堿片也用本法測定，詳細(xì)見p195.藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第40頁（二）鈀離子比色法1.基本原理

在適當(dāng)pH值溶液中，利用吩噻嗪類藥品可與金屬鈀離子形成有色絡(luò)合物，借以進(jìn)行比色測定。

本法優(yōu)點可選擇性地用于未被氧化吩噻嗪藥品測定。因為Pd2+只與被氧化硫共階，當(dāng)硫原子已被氧化為亞砜或砜時，則不與Pd2+絡(luò)合呈色。缺點是：樣品濃度高時，絡(luò)合物溶解度較低，可能會造成絡(luò)合物析出。2.測定方法藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第41頁四、紫外分光光度法

本章五類藥品制劑或片劑均勻度與溶出度測定均采取本法，測定原理是基于藥品據(jù)有紫外特征吸收光譜，在其最大吸收波優(yōu)點測定吸收度，利用百分吸收系數(shù)計算；或與對照品溶液同時測定，計算含量。（一）直接分光光度法1、鹽酸異丙嗪片測定

取本品10片，除去糖衣后，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸異丙嗪12.5mg），置200ml量瓶中，加鹽酸溶液（91000）適量，振搖15分鐘使鹽酸異丙嗪藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第42頁（二）萃取后分光光度法（三）萃?。p波長分光光度法（四）二階導(dǎo)數(shù)分光光度法溶解，濾過，取續(xù)濾液10ml,置100ml量瓶中，再用鹽酸溶液（91000）稀釋至刻度，搖勻，在249nm波優(yōu)點測定吸收度，按C17H20N2S·HCl吸收系數(shù)（）為910計算，即得。2、鹽酸異丙嗪注射液測定抗氧劑VitC對測定有干擾。測定波長改在299nm處。3、奧沙西泮測定﹒

E1%1cm藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第43頁五、氣相色譜法氣相色譜法是一個有效地分離技術(shù)，它含有分離效果好、靈敏度高、選擇性好、用量少和分析速度快等特點，尤其適合組分比較復(fù)雜供試品中微量有機藥品及其代謝物分離測定。因為絕大數(shù)藥品極性大，不易氣化，或?qū)岵环€(wěn)定，所以該法在藥品分析中應(yīng)用不如HPLC法多（一）硫酸阿托品片劑含量測定USP(24)方法，色譜條件：玻璃填充柱，擔(dān)體為硅烷化硅藻土，固定液為3％OV－17，載氣為氮氣，流速25ml/min，檢測器為FID。后馬托品為內(nèi)標(biāo)。（二）人血漿中硝苯地平GC法測定及藥代動力學(xué)研究藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第44頁六、高效液相色譜法高效液相色譜法，在本類藥品含量測定中應(yīng)用越來越廣泛，其中80％以上是采取反相HPLC法，利用本法可十分有效地分離和測定本類藥品及分解產(chǎn)物。USP(24)收載藥品有數(shù)十個品種采取本法測定。本章藥品僅有地西泮注射液在Ch.P()中是采取本法進(jìn)行測定。（一）反相HPLC法

反相HPLC法，是指流動相極性大于固定相極性色譜方法。藥物分析醫(yī)學(xué)知識講座第45頁在本法中常采