人類免疫缺陷病毒抗原抗體檢測試劑性能評估注冊審查指導原則

#/22陽性檢出率。包容性抗體檢測試劑：1型應選擇來源于不同時間、不同地域的多份臨床確診且經合理方法確定人類免疫缺陷病毒抗體陽性的患者樣本進行檢測，建議覆蓋、B/B'、BC重組型（包括CRF07_BC重組型和CRF08_BC重組型）、AE重組型（CRF01_AE重組型）、CRF55_01B及除上述重組型以外的至少5種其他重組型。對于難以獲取、在中國流行較少的的基因型1型O組、2型及其他重組型可選擇來源于不同時間、不同地域的多份臨床確診且經合理方法確定人類免疫缺陷病毒抗體陽性的患者樣本或商業(yè)參考盤?？乖瓩z測試劑：應選擇來源于不同時間、不同地域的多份臨床確診且經合理方法確定人類免疫缺陷病毒抗原陽性的患者樣本進行包容性評價，建議覆蓋1型和2型兩個基因型，其中2型可選擇臨床確診且經合理方法確定人類免疫缺陷病毒抗原陽性的患者樣本或商業(yè)參考盤。包容性評價檢測結果應與預期結果相符。驗證用樣本的濃度水平應接近檢測限濃度，可采用臨床陰性樣本進行稀釋精密度HIV-1M組抗體、HIV-1O組抗體、HIV-2抗體、抗原應分別進行精密度研究，應選擇臨床樣本、病毒培養(yǎng)物，HIV-1O組抗體、HIV-2抗體可選擇商業(yè)參考盤進行硏究。重復性、中間精密度和再現(xiàn)性申請人應對精密度指標的評價標準做出合理要求，如變異系數的范圍或顯色強度等。應對可能影響檢測精密度的主要變量進行驗證，包括不同時間、地點、操作者、檢測輪次、試劑批次、適用儀器（如適用）等。設定合理的精密度評價周期，例如：為期至少20天的檢測。至少采用3個水平的臨床樣本進行精密度評價，具體要求如下：陰性樣本：待測物濃度低于最低檢測限或為零濃度，陰性檢出率應為100%（n>20）臨界陽性樣本：待測物濃度略高于試劑的最低檢測限，陽性檢出率應大于95%（n>20）。中/強陽性樣本：待測物濃度呈中度到強陽性，陽性檢出率為100%，變異系數（CV）應在合理的可接受范圍內（如適用）（n>20）。臨界值水平的精密度研究除上述精密度研究外，建議申請人對申報產品的臨界值進行確定，并采用該濃度/水平樣本進行精密度研究。首先建立C50濃度，并通過對該濃度水平樣本進行多次重復檢測，以對C50濃度進行確認。而后以各濃度水平樣本進行多次重復檢測的方式，判斷某一特定可接受范圍。申請人可結合產品的特點，設置合理的（單側或雙側）置信度水平，采用合理的統(tǒng)計方法對數據進行分析。推薦對C50±2O%兩個濃度水平分別重復進行40次檢測，當+20%濃度水平全部為陽性，-20%濃度水平全部為陰性時，得出-20%到+20%濃度范圍包含C5?C95區(qū)間的置信度〉80%。分析特異性6.1交叉反應用于人類免疫缺陷病毒交叉反應驗證的病原體種類主要考慮以下幾方面：抗原結構具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀、采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他微生物，具體目錄參見表1。如果試劑原料采用基因重組抗原，則還需考慮對重組基因導入微生物特異性抗體的交叉反應評價。例如采用大腸埃希菌作為宿主菌進行重組抗原的表達，建議考慮大腸埃希菌抗體陽性樣本可能產生的交叉反應。交叉反應物的抗原抗體應分別進行驗證，建議在病原體的醫(yī)學相關水平進行交叉反應的驗證。通常病毒最低濃度為105PFU/ml,細菌或者真菌的最低濃度為106CFU/mL，提供所有用于交叉反應驗證的病毒/樣本的來源、種屬/型別、陰陽性鑒定和濃度/滴度確認等試驗資料。表1建議進行交叉反應評估的病原體類別I/II型人類嗜T細胞病毒（HTLV-1/II）梅毒螺旋體甲型流感病毒支原體*乙型肝炎病毒（HBV）丙型肝炎病毒（HCV）巨細胞病毒（CMV）EB病毒（EBV）系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）肺抱子菌鳥胞內分枝桿菌復合體*結核分枝桿菌I/II型單純皰疹病毒弓形蟲水痘帶狀皰疹病毒隱球菌*念珠菌假絲酵母菌*馬爾尼菲籃狀菌*人乳頭瘤病毒（HPV）人細小病毒B19曲霉*風疹病毒注：＊項為選擇性驗證干擾試驗應根據所采集樣本類型，選擇適用的干擾物質進行研究建議申請人在每種干擾物質的潛在最大濃度（“最差條件”）下，采用待測抗體/抗原為弱陽性和陰性水平的多例樣本進行試驗，應至少包括下列可能的干擾物質。6.2.1內源性干擾物質：血液：血紅蛋白、膽紅素、血脂、類風濕因子、其他自身免疫性抗體，異嗜性抗體（如HAMA）總IgG、總IgM、紅細胞壓積（全血樣本適用）?？谇火つB出液：唾液（蛋白）、漱口水、薄荷糖、食物殘渣、牙膏。尿液：尿潛血、總蛋白、尿膽紅素、尿液白細胞、紅細胞、尿酮體、尿膽原、亞硝酸鹽、葡萄糖、細菌、真菌、尿比重和pH異常樣本常見治療性藥物：主要包括抗逆轉錄病毒藥物、抗病毒藥物、抗結核藥、抗炎藥及其他針對機會性感染疾病的治療藥物、癥狀相關其他經驗性藥物。具體內容詳見表2。

表2建議進行干擾試驗的藥物HIV治療藥物齊多夫定奈韋拉平拉米夫定依非韋倫阿巴卜韋利匹韋林替諾福韋洛匹那韋恩曲他濱達蘆那韋丙酚替諾福利托那韋拉替拉韋考比斯他多替拉韋艾維雷韋艾博韋泰Y干擾素其他相關治療藥物磺胺甲噁唑甲氧芐胺嘧啶異煙肼利福平利福布汀乙胺丁醇吡嗪酰胺克拉霉素更昔洛韋膦甲酸鈉阿昔洛韋泛昔洛韋伐昔洛韋乙胺嘧啶磺胺嘧啶糖皮質激素抗生素抗真菌藥物嗎啡*解熱鎮(zhèn)痛藥7鉤狀（HOOK）效應硏究HIV-1抗體、HIV-2抗體、抗原應分別進行鉤狀效應硏究，須采用多份高滴度臨床樣本或重組抗原進行梯度稀釋后由低濃度至高濃度分別檢測，每個梯度的稀釋液重復3?5次，對鉤狀效應進行合理的驗證。8.其他需注意問題對于使用儀器進行結果判讀的產品，應提供產品說明書【適用機型】項中所有型號儀器的性能評估資料。9.適用的樣本類型如果試劑適用于多種樣本類型，應分別進行性能評估評價每種樣本類型的適用性。如產品適用于血清和血漿，可采用同源比對驗證樣本的可比性和各種抗凝劑的適用性。如產品適用于靜脈全血，建議進行最低檢測限和精密度研究，同時進行同源比對試驗。（五）陽性判斷值研究資料提交對申報試劑陰性/陽性結果判斷的陽性判斷值（cut-off）確定和驗證資料，包括具體的試驗方案、人群及樣本選擇、評價標準、統(tǒng)計學分析和研究數據等。建立陽性判斷值的樣本選擇應考慮不同的地理區(qū)域、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素的影響，納入陰性、陽性及臨界值附近的樣本。申請人應根據具體情況選擇適當的方法，如受試者工作特征曲線（ROC）的分析方式，來確定合理的陽性判斷值。若試驗結果存在灰區(qū)，則應明確灰區(qū)建立的基礎。如產品適用多個樣本類型，應明確不同的樣本類型是否存在差異，如無差異，可采用一個樣本類型進行陽性判斷值確定后，對其他樣本類型進行驗證。如有差異，應分別進行陽性判斷值的確定和驗證。（六）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。試劑穩(wěn)定性主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、開瓶（開封）穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性（如涉及）、機載穩(wěn)定性（如涉及）、運輸穩(wěn)定性等研究。如果產品配套校準品，還應對校準頻率進行研究。申請人可根據實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據、具體的實施方案、接受標準、詳細的研究數據以及結論。對于實時穩(wěn)定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實際運輸及儲存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗證，以確認樣本的保存條件及保存時間可以在合理的溫度范圍內，每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行驗證，從而確認不同類型樣本的穩(wěn)定性?？衫鋬霰４娴臉颖具€應對凍融次數進行合理驗證。（七）產品技術要求申請人應當在原材料質量和生產工藝穩(wěn)定的前提下，根據產品研制、前期評價等結果，依據國家標準、行業(yè)標準及有關文獻資料，按照《醫(yī)療器械產品技術要求編寫指導原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關要求，編寫產品技術要求。人類免疫缺陷病毒抗原抗體檢測試劑的產品性能指標應主要包括：物理性狀、陽性參考品符合率、陰性參考品符合率、重復性、最低檢測限等。按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號，下文簡稱《辦法》）的規(guī)定，此類產品為第三類體外診斷試劑，申請人應按照《醫(yī)療器械產品技術要求編寫指導原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產工藝及半成品要求，附錄的編制應符合相關編寫規(guī)范的要求。（八）產品說明書產品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產品說明書的格式應符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，進口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內容應盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產品說明書中相關技術內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，則應以規(guī)范格式對此內容進行標注，并單獨列明文獻的相關信息。結合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求，人類免疫缺陷病毒抗原抗體檢測試劑說明書編寫應重點關注以下內容。1．【預期用途】該產品用于體外定性檢測人血清/血漿/全血……樣本中的人類免疫缺陷病毒（P24）抗原和（HIV-1/2）抗體。結合臨床和其他實驗室指標，用于人類免疫缺陷病毒感染的輔助診斷。臨床背景描述：簡單介紹病原體的生物學特征、流行病學、潛伏期、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)及相關疾病等。簡要介紹現(xiàn)有的HIV臨床或實驗室診斷方法?！緲颖疽蟆恐攸c明確以下內容：樣本采集：明確采集時間、采集順序、采集量等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。說明采集方法及樣本類型，對于血漿、全血樣本，應注明對抗凝劑的要求。樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時限和運輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測前是否需要恢復室溫，冷凍樣本的凍融次數限制等。如需專用采樣工具應進行詳細說明。【檢驗方法】詳細說明試驗操作的各個步驟：實驗環(huán)境：實驗室的溫度、濕度要求，檢測試劑及樣本的復溫要求等。試劑配制方法，試劑開封后使用方法等。高濃度樣本稀釋的方法。3.4試驗條件：操作步驟、溫度、時間、儀器波長等。質量控制：操作步驟，質控結果的要求（試驗有效性的判斷），質控結果不符合要求的處理方式。對于膠體金法檢測試劑可以圖示形式顯示正確的檢驗操作方法、程序等。特別注意應強調操作溫度及濕度條件、讀取結果的時間。特別說明檢驗操作過程中的注意事項?！娟栃耘袛嘀怠空f明陽性判斷值，并簡要說明陽性判斷值確定的試驗方法。如陽性判斷值需進行計算確定，詳細描述具體計算方法?！緳z驗結果的解釋】結合質控線/對照品/質控品/校準品以及樣本的檢測結果，對所有可能出現(xiàn)的結果組合及相應的解釋進行詳述。對于膠體金法檢測試劑可采用圖示形式顯示檢測結果。對于檢測試劑應明確試驗無反應，報告為〃HIV抗體陰性”。試驗有反應，必須進行復檢（使用原有試劑雙孔/雙份檢測或使用原有試劑加另一種試劑檢測）：兩次均無反應，報告為“HIV抗體陰性”；兩次均有反應，或一個有反應一個無反應，需進一步進行“補充試驗”。檢驗結果的解釋應以陽性判斷值的研究結論為依據。如有適用的臨床診療指南，則應在此項下引用，相應檢驗結果的解釋應符合相關指南的要求。如有灰區(qū)判定，詳細說明灰區(qū)樣本的處理方法。【檢驗方法局限性】綜合產品的預期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進行相關說明，建議包括以下內容：6.1本試劑盒的檢測結果不得作為臨床診治的唯一依據，對患者的臨床管理應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。不合理的樣本采集、轉運、處理及不當的實驗操作和實驗環(huán)境均有可能導致假陰性或假陽性結果。感染初期或艾滋病晚期，抗體可能未產生或者產生水平低于產品最低檢測限，而產生陰性結果。檢測陰性不能排除急性感染，對于可疑的樣本建議進行病原學檢測，或至少間隔7天再次檢測。評價血清學檢測結果時需要結合患者的臨床病程、基礎狀況以及年齡等因素綜合考慮，如：免疫功能低下、缺陷的人群、產生抗體能力較低的嬰幼兒，可能不產生或產生低滴度的抗體，其血清學抗體檢測的參考價值有限。如疑似窗口期感染，建議進一步做HIV-1核酸檢測或2-4周后復檢。6.6對于定性檢測,HIV-1p24抗原試驗有反應的樣本，必須經過中和試驗確證以后才能判斷陽性或陰性。HIV-1p24抗原陽性僅作為HIV感染的輔助診斷依據；HIV-1p24抗原陰性結果不能排除HIV感染?！井a品性能指標】根據產品性能評估資料，詳述以下性能指標：企業(yè)參考品符合率、最低檢測限、包容性、精密度、分析特異性（交叉反應和干擾試驗）、鉤狀（HOOK）效應。介紹所用樣本背景信息、數量、濃度，評價方法及檢測結果?！咀⒁馐马棥繎辽侔ㄒ韵聝热荩?.1有關試劑盒內人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內對照品（質控品）或其他可能含有人源物質的組分，雖已經通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項目的檢測，結果為陰性，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應將這些組分作為潛在傳染源對待。全血、血漿的運送應符合生物安全要求，參照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》。三、參考文獻《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場監(jiān)督管理總局令第48號），2021年8月26日《關