結(jié)核分枝桿菌課件

2023/9/5結(jié)核分枝桿菌1結(jié)核分枝桿菌2023/9/5結(jié)核分枝桿菌2選題？2023/9/5結(jié)核分枝桿菌31.結(jié)核的現(xiàn)狀

結(jié)核病是全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一。據(jù)WHO統(tǒng)計，全球約有20億人感染結(jié)核分枝桿菌，每年有約200萬人死于結(jié)核。我國是世界上22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，結(jié)核感染導(dǎo)致的死亡人數(shù)是其他傳染性疾病總死亡人數(shù)的2倍以上，曾經(jīng)一度控制良好，再次死灰復(fù)燃，隨著耐藥菌株的出現(xiàn)和傳播，結(jié)核控制更加棘手。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌42.患者的需要有患者咨詢，結(jié)核病怎么檢查2023/9/5結(jié)核分枝桿菌53.醫(yī)生的需求有醫(yī)生咨詢結(jié)核病的檢查2023/9/5結(jié)核分枝桿菌64.各類考試常見的考點(diǎn)中級職稱高級職稱研究生考試2023/9/5結(jié)核分枝桿菌7分枝桿菌屬M(fèi)ycobacterium一類直或微彎曲的桿菌，有分枝生長趨勢，可呈絲狀或菌絲樣生長。細(xì)胞壁脂質(zhì)含量高〔分枝菌酸〕，耐酸，抗酸染色陽性。對氧和營養(yǎng)要求高，生長慢。又稱抗酸桿菌(acid-fastbacillus)---不易著色，可抵抗鹽酸酒精的脫色作用分類屬放線菌科，本屬有80多種，可分三類：結(jié)核分枝桿菌、非結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌。細(xì)菌的DNAG+Cmol%為62－702023/9/5結(jié)核分枝桿菌8結(jié)核分枝桿菌一、分類結(jié)核分枝桿菌〔MycobacteriumTuberculosis，TB〕復(fù)合群：人結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)牛分枝桿菌(M.bovis)非洲分枝桿菌田鼠分枝桿菌2023/9/5結(jié)核分枝桿菌9二、細(xì)菌特性形態(tài)染色

TB菌細(xì)長略彎曲，有時可見分枝，呈單、成堆或成束排列，無鞭毛、無芽胞，有莢膜。可出現(xiàn)多形性，在陳舊的病灶和培養(yǎng)物中，形態(tài)常不典型，可呈顆粒狀，串球狀，短棒狀，長絲形等。TB菌革蘭染色陽性。熒光染料金胺O染色，在熒光下菌體呈橘黃色。萋～尼氏抗酸性染色法染色，菌體染成紅色。

2023/9/5結(jié)核分枝桿菌10培養(yǎng)特性專性需氧菌，3%－5%的CO2能促進(jìn)生長。最適ph6.5～6.8，最適溫度為37℃，低于30℃難生長，營養(yǎng)要求高，在含有蛋黃、馬鈐薯、甘油和天門冬素等的固體培養(yǎng)基上才能生長，且生長緩慢。固體培養(yǎng)基---典型菌落為枯燥、堅硬、外表呈顆粒狀、乳酪色或淡黃色，形似菜把戲。液體培養(yǎng)基---生長較快呈粗糙皺紋狀菌膜生長，有毒株可呈索狀生長〔吐溫干擾〕。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌11生化反響生化不活潑。不發(fā)酵糖類，多數(shù)菌株觸酶陽性，熱觸酶陰性，非結(jié)核分枝桿菌正好相反。結(jié)核分枝桿菌煙酸和硝酸鹽試驗(yàn)陽性，耐噻吩－2－羧酸肼(T2H)，牛型那么相反。有毒株中性紅試驗(yàn)陽性。變異性TB菌易發(fā)生形態(tài)、菌落、最適生長溫度、毒力和耐藥性的變異。如卡介苗、Much顆粒和多重耐藥菌株出現(xiàn)等。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌12抵抗力TB菌細(xì)胞壁含大量脂類，抵抗力較強(qiáng)干痰中存活6-8個月，粘附塵埃上保持傳染性8-10天，陰濕處能生存5個月以上。3%HCL或4%NaOH、6%H2SO4溶液中能耐受30分鐘紫外線、酒精的抵抗力弱。(如在水中煮沸1分鐘，陽光曝曬2～3小時，75%酒精內(nèi)數(shù)分鐘即死亡。)最簡單的方法是直接燃燒帶有病菌的痰紙。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌13致病物質(zhì)〔未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生內(nèi)毒素、外毒素、侵襲性酶〕1.脂質(zhì)－脂質(zhì)占菌體干重的20～40%，占胞壁干重的60%。①磷脂：能刺激單核細(xì)胞增生，并可抑制蛋白酶的分解作用，使病灶形成干酷樣壞死。②索狀因子：是分枝菌酸與海藻糖的復(fù)合物，具有破壞細(xì)胞線粒體膜，毒害微粒體酶類，抑制中性粒細(xì)胞游走和吞噬作用，引起慢性肉牙腫。具有該物質(zhì)的TB菌毒株，在液體培養(yǎng)基中能緊密粘成索狀。③蠟質(zhì)D：是一種肽糖脂與分枝菌酸復(fù)合物，能引起遲發(fā)型變態(tài)反響，并具有佐劑作用。④硫酸腦苷脂：TB菌毒株胞壁中含有，能抑制吞噬細(xì)胞中的吞噬體與溶酶體融合，使結(jié)核桿菌在細(xì)胞內(nèi)存活。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌14致病物質(zhì)2.莢膜－主要為多糖，少量脂質(zhì)和蛋白質(zhì)。①粘附和入侵②分解物質(zhì)提供營養(yǎng)③防止有害物質(zhì)入侵3.蛋白質(zhì)－TB菌菌體內(nèi)都含有數(shù)種蛋白質(zhì)，其中重要的蛋白質(zhì)是結(jié)核菌素。結(jié)核茵素與蠟質(zhì)D結(jié)合，能引起較強(qiáng)的遲發(fā)型變態(tài)反響。其他蛋白質(zhì)可引起機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，但無保護(hù)作用。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌15三、臨床意義TB菌引起結(jié)核病。對人類致病的有人結(jié)核分枝桿菌、牛型結(jié)核桿菌和非洲分枝桿菌，人型結(jié)核桿菌感染引起的發(fā)病率最高。成為全球性重大公共衛(wèi)生問題。所致疾病TB菌的致病作用可能是細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)增殖引起炎癥反響，以及誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反響性損傷，屬于IV型〔遲發(fā)型〕變態(tài)反響。通過呼吸道、消化道和破損的皮膚粘膜進(jìn)入機(jī)體，侵犯多種組織器官，引起相應(yīng)器官，其中以肺結(jié)核最常見。可分原發(fā)感染和繼發(fā)感染。免疫性TB菌的感染率很高，發(fā)病率卻較低，這說明人體感染結(jié)核桿菌可獲得一定的抗結(jié)核免疫力，這種免疫稱為有菌免疫或傳染性免疫。TB菌的免疫原rRNA和變應(yīng)原結(jié)核菌素誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫反響。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌16導(dǎo)致的疾病1.肺結(jié)核，飛沫傳播為最常見方式原發(fā)性肺結(jié)核血行播散型肺結(jié)核浸潤型肺結(jié)核慢性纖維空洞型肺結(jié)核結(jié)核性胸膜炎2023/9/5結(jié)核分枝桿菌17肺結(jié)核實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)核菌檢查：痰中找到結(jié)核菌是確診肺結(jié)核的主要依據(jù)。直接厚涂片陽性率優(yōu)于薄涂片無痰或兒童不會咳嗽，可采用清晨的胃洗液找結(jié)核菌，成人亦可通過纖支鏡刷片或涮洗液查找結(jié)核菌PCR法，40個結(jié)核菌即可出現(xiàn)陽性結(jié)果2023/9/5結(jié)核分枝桿菌182.腸結(jié)核患者多有開放性肺結(jié)核或喉結(jié)核，經(jīng)常吞咽含結(jié)核桿菌的痰液而患病。，主要位于回盲部。輔助診斷：結(jié)核菌素試驗(yàn)

X線胃腸鋇餐造影或鋇劑灌腸結(jié)腸鏡，活檢找到干酪樣壞死性肉芽腫或結(jié)核桿菌具有確診意義。大便找抗酸桿菌？大便結(jié)核桿菌PCR？2023/9/5結(jié)核分枝桿菌193.泌尿生殖系統(tǒng)結(jié)核---尿液4.結(jié)核性腦膜炎---腦脊液5.結(jié)核性腹膜炎---腹水6.關(guān)節(jié)結(jié)核---關(guān)節(jié)液2023/9/5結(jié)核分枝桿菌20四、微生物學(xué)檢驗(yàn)臨床標(biāo)本涂片檢查別離培養(yǎng)核酸檢測抗體檢測直接涂片集菌涂片處理標(biāo)本或無污染標(biāo)本染色液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基動物試驗(yàn)〔羅氏或米氏〕抗酸..金胺O..37℃，涂片鏡檢儀器培養(yǎng)＜7天生長＞7天生長快速生長菌慢生長菌菌種鑒定抗酸染色菌落特點(diǎn)鑒定試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)2023/9/5結(jié)核分枝桿菌21標(biāo)本采集感染部位不同，取不同的標(biāo)本常見標(biāo)本：痰、纖支鏡刷片、尿、胸腹水、腦脊液、關(guān)節(jié)液等檢查方法1.顯微鏡檢查1〕直接涂片：用萋－尼氏法染色，假設(shè)鏡檢找到抗酸性桿菌，通常應(yīng)報告：“找到抗酸性桿菌〞，需進(jìn)一步別離培養(yǎng)鑒定。2〕濃縮集菌涂片：如標(biāo)本中菌量少，雜菌和雜質(zhì)多時，用離心沉淀法將菌濃縮聚集，再取沉淀物涂片作抗酸染色檢查熒光染料金胺O染色，在熒光下菌體呈橘黃色。萋～尼氏抗酸性染色法染色，菌體染成紅色。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌222023/9/5結(jié)核分枝桿菌232023/9/5結(jié)核分枝桿菌242023/9/5結(jié)核分枝桿菌252023/9/5結(jié)核分枝桿菌262023/9/5結(jié)核分枝桿菌27菜把戲菌落2023/9/5結(jié)核分枝桿菌282、別離培養(yǎng)TB菌接種前處理－液化和處理雜菌4%NaOH、6%H2SO4、胰酶15-20min培養(yǎng)基選擇—羅氏培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基(PNB、T2H、NAP)儀器培養(yǎng)—Bacte460、BacT/ALERT3D液體培養(yǎng)基培養(yǎng)時間—長一般6-8周鑒定1.染色性2.菌落特征3.生長速度4.色素產(chǎn)生5.生化試驗(yàn)2023/9/5結(jié)核分枝桿菌29鑒別試驗(yàn)：

NAP(p-nitro-α-acetylamino-β-hydroxy-propiophenome)抑制試驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌NAP-

非結(jié)核分枝桿菌NAP+

2023/9/5結(jié)核分枝桿菌30藥物敏感試驗(yàn)動物接種菌株別離和檢測毒力2023/9/5結(jié)核分枝桿菌313、結(jié)核菌素試驗(yàn)：OT或PPD遲發(fā)型超敏反響結(jié)核菌素的純蛋白衍化物〔PPD〕皮內(nèi)注射0.1ml〔5IU〕硬結(jié)≥5mm為陽性反響，如無反響，可在一周后再用5IU，如仍為陰性，大致可除外結(jié)核感染，但也要考慮感染的窗口期，還未建立充分的變態(tài)反響，應(yīng)用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制藥物、免疫力低下或營養(yǎng)不良也成陰性反響。結(jié)核菌素試驗(yàn)對嬰幼兒的診斷價值較成人大，3歲以下強(qiáng)陽性反響者，應(yīng)視為有新近感染的活動性肺結(jié)核。

2023/9/5結(jié)核分枝桿菌324、抗體檢測檢測PPDIgG輔助診斷。目前血清抗阿拉伯糖甘露糖脂IgG抗體是一種新的較好的診斷結(jié)核病的指標(biāo)。5、抗原檢測6、核酸檢測

快速診斷：PCR-特異性核酸探針7、高效液相色譜分析技術(shù)測分枝菌酸可鑒定菌種8、全血干擾素測定2023/9/5結(jié)核分枝桿菌332023/9/5結(jié)核分枝桿菌34基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理結(jié)核感染的免疫應(yīng)答反響以細(xì)胞免疫為主，結(jié)核感染后體內(nèi)長期存在抗原特異性的記憶性T細(xì)胞當(dāng)再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增殖，釋放r干擾素r干擾素是結(jié)核分枝桿菌感染后機(jī)體免疫應(yīng)答中最重要的細(xì)胞因子2023/9/5結(jié)核分枝桿菌35由來----γ干擾素釋放試驗(yàn)〔IGRAs〕IFN-γ在調(diào)節(jié)對結(jié)核分支桿菌的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反響中起重要作用，從而使得〔interferongammareleaseassays〕IGRAs用于檢測結(jié)核感染。IGRAs通過檢測代表結(jié)核分支桿菌的抗原刺激T淋巴細(xì)胞反響后釋放IFN-γ的量來判斷是否存在結(jié)核桿菌感染。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌36T-SPOT-TB—定義以結(jié)核特異的混合抗原A和混合抗原B〔分別為ESAT-6和CFP-10的局部多肽片斷〕刺激結(jié)核桿菌感染者外周血單核細(xì)胞中存在結(jié)核特異的活化T淋巴細(xì)胞分泌γ干擾素，從而應(yīng)用ELISPOT方法檢測對結(jié)核桿菌反響的效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)量，對結(jié)核桿菌感染進(jìn)行輔助診斷。特異抗原ELISPOT活化的T細(xì)胞否存在感染2023/9/5結(jié)核分枝桿菌37T-SPOT-TB—幾個概念ELISPOT〔enzyme-linkedimmunospotassay,〕是一種新型的免疫酶技術(shù)，它是從單細(xì)胞水平檢測分泌抗體細(xì)胞或分泌細(xì)胞因子細(xì)胞。〔簡單說：可以數(shù)出分泌特異因子的細(xì)胞的個數(shù)〕ESAT-6和CFP-10蛋白：存在結(jié)核分枝桿菌及少數(shù)致病非結(jié)核分枝桿菌中名為“RD1〞的基因序列，編碼產(chǎn)生兩種蛋白。在卡介苗菌株和大局部環(huán)境中的分枝桿菌基因中那么缺乏次序列。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌38基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理T-SPOT.TB技術(shù)：利用結(jié)核桿菌感染者外周血單個核細(xì)胞〔PBMC〕中存在結(jié)核特異性T細(xì)胞，這些淋巴細(xì)胞在受到結(jié)核特異抗原刺激后分泌r干擾素而設(shè)計的T細(xì)胞免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)。檢測外周血中受結(jié)核特異抗原刺激釋放r干擾素的T淋巴細(xì)胞，經(jīng)酶聯(lián)免疫顯色后，通過ELISPOT分析系統(tǒng)對斑點(diǎn)進(jìn)行計數(shù)，1個斑點(diǎn)代表一個細(xì)胞，計算計算對結(jié)核桿菌反響的效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)量2023/9/5結(jié)核分枝桿菌39基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理包2023/9/5結(jié)核分枝桿菌40基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理2023/9/5結(jié)核分枝桿菌41基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理2023/9/5結(jié)核分枝桿菌42基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理空白對照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)小于10且陽性對照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)大于20時視為試驗(yàn)有效T-SPOT.TB試驗(yàn)結(jié)果用每106PBMCs中斑點(diǎn)形成細(xì)胞〔SFCs〕的數(shù)目來描述，即SFCs/106PBMCs2023/9/5結(jié)核分枝桿菌43T-SPOT.TB的臨床意義T-SPOT.TB高靈敏度

2023/9/5結(jié)核分枝桿菌44T-SPOT-TB—解釋非黃金標(biāo)準(zhǔn)敏感性95.3%-98.8%特異性94.1%-100%薩斯分枝桿菌(Mycobacteriumkansasii)、海分枝桿菌(Mycobacteriummarinum)、斯氏分枝桿菌(Mycobacteriumszulgai)等少數(shù)分枝桿菌中也存在完整RD1區(qū)，編碼ESAT6和CFP10,可造成檢測結(jié)果成假陽性。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌45T-SPOT-TB—應(yīng)用在活動性結(jié)核病中的診斷意義1.敏感性86-94%，特異性89-99%2.在肝移植術(shù)后、艾滋病、血液腫瘤等免疫抑制患者中，T-SPOT-TB陽性率略低于免疫正常組，但仍具有較高的敏感性，且優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)。3.在肺外結(jié)核患者診斷中的，敏感性優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)。4.對小于4歲兒童，與結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)比較敏感性無優(yōu)勢，美國CDC更推薦結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)。2023/9/5結(jié)核分枝桿菌46T-SPOT-TB—應(yīng)用在結(jié)核性腦膜炎、結(jié)核性胸膜炎中的診斷意義1.敏感性優(yōu)于ADA、TB-DNA，約在62-75%，特異性無統(tǒng)計學(xué)差異。在結(jié)核病治療中的評價意義1.其數(shù)值上下與嚴(yán)重程度無關(guān)。2.效應(yīng)T細(xì)胞隨結(jié)核桿菌